专利名称：小杆线虫Rhabditis(Oscheius)spp.在防治植物线虫中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物生态防治技术领域，特别是涉及小杆线虫Rhabditis(Oscheius)spp在防治有害线虫——植物线虫中的应用。
背景技术：
植物线虫种类多，分布广，由其直接或间接引起的植物病害已成为农、牧、林等经济作物生产的主要难题。近年来，随着保护地蔬菜、果树等作物种植面积的扩大，由于温室大棚内高温、高湿、封闭的小气候和重茬栽培等特点，使许多植物线虫避开了陆地不良气候的限制而不断蔓延，因而，植物线虫问题愈加突出，已成为大棚作物生产的重要限制因素。仅以黄瓜为例，随着温室黄瓜栽培面积的迅速增长，黄瓜根结线虫等植物线虫的危害日趋严重。黄瓜根结线虫病一般能减产20％～30％，重者50％以上，甚至绝收，造成极大的损失，已经成为毁灭性病害之一；黄瓜矮化线虫病一般使根坏死早衰、地上部分矮化，严重时也能引起较大的经济损失。
目前对植物线虫的防治仍然以化学防治为主，化学药剂不仅污染环境，而且防治效果也很差，线虫易产生抗药性。为了适应可持续发展和大田以及温室瓜果、蔬菜等作物的无公害生产，越来越多的国内外研究者开始关注于生物防治。二十世纪80年代初美国等一些国家以高效低毒、杀线虫谱极宽、对环境副作用较小的阿维菌素作为一种生物源杀线虫剂。1997年研制新的防治线虫生物菌剂DiT，被证明对多种植物线虫有效，并有增产的效果。但目前生物源杀线虫剂种类仍然较少。因此，一些研究者开始探索用生物的、生态的、物理的等方法防治植物线虫。
传统上认为小杆属Rhabditis(Oscheius)的线虫(简称小杆线虫)是食细菌类线虫，国内外尚未见小杆线虫具有抑制植物线虫种群密度的报道，更未见田间用小杆线虫Rhabditis(Oscheius)spp控制植物线虫、以达到有效防治的报道。
发明内容
本发明针对上述领域的空白，提供小杆线虫在防治植物线虫中的应用，以解决生产上的难题，拓宽生物和生态防治途径。
小杆线虫Rhabditis(Oscheius)spp.在防治植物线虫中的应用。
所述应用是在植物线虫侵入作物根系之前向田间施用小杆线虫制剂。
所述作物为黄瓜。
所述小杆线虫制剂施用量为1.0×108条--1.0×1011条/公顷，较好剂量为1.0×1010条-5.0×1010条/公顷。
本发明提供了一种新的防治植物线虫的方法，采用小杆线虫制成制剂施用于将栽种黄瓜的田中，结果表明小杆线虫防治植物线虫效果特别突出。从实验结果看，空白对照组中的植物线虫密度迅速上升，而处理组的植物线虫种群密度保持原有较低水平，其中处理组的黄瓜根结线虫和矮化线虫的种群密度较对照组分别降低了70％和87％，实验结果表明小杆线虫对植物寄生线虫有明显的抑制作用。
小杆属的线虫分布非常广泛，资源丰富，易于获得，易于培养扩繁，一旦在田间施用，容易在自然界建立种群。它具有化学农药无可比拟的优势，它不污染环境，对人畜等脊椎动物安全；害虫不会产生抗性；可与大多数化学农药混用；它能主动寻找寄主；能防治化学农药难以奏效的钻蛀性、隐蔽性害虫。它一旦进入害虫体内，便释放具有侵染能力的细菌，之后在寄主体内发育，大量繁殖，随后爬出寄主体外，寻找新的寄主。因此，小杆线虫用于防治植物线虫比化学农药更主动、有效、持久，能够更好地控制害虫种群数量。小杆线虫使用方便，无化学农药的残毒，可以作为生物新农药，是极具有开发潜力的一类生物防治制剂。
图1施加的小杆线虫对黄瓜根际土壤中的小杆线虫种群数量的影响图2施加的小杆线虫对黄瓜根际土壤中植物线虫的种群数量的影响图3施加的小杆线虫对黄瓜根际土壤中根结属线虫的种群数量的影响图4施加的小杆线虫对黄瓜根际土壤中矮化属线虫的种群数量的影响图5施加的小杆线虫对黄瓜根际土壤中根结属线虫的根结指数的影响具体实施方式
现结合实施例对本发明作进一步的详细说明。
本发明实施例虽然只是应用于温室黄瓜植物线虫的防治，但对危害其它作物的植物线虫具有同样的作用，小杆线虫同样适用于发生植物线虫的其它地块。
实施例1材料与方法1.1试验材料供试药剂小杆线虫Rhabditis(Oscheius)sp.(Bn)由实验室成员从温室黄瓜根际土壤中用大蜡螟老熟幼虫诱集所得，并用大蜡螟老熟幼虫分离、纯化、扩繁培养，可对外公开发放。收集后的小杆线虫悬浮在水溶液中，用浅水层法在4℃保存，20天内施用。
1.2试验地点本试验在河南省通许县练城乡温室中进行。温室东西走向，长50m，宽8m，分成40个南北走向的垄，垄横截面为马鞍形，鞍谷用于浇灌，两侧种两行黄瓜，每行约40株。选取中部6垄用于试验。
1.3试验方法从黄瓜栽种前10天(2004年9月底)开始随浇灌水流均匀灌施线虫溶液，作为处理。处理浓度为每公顷1.0×1010条线虫(1.0×1010IJs/ha)。浇灌等量自来水为对照。处理和对照各三个垄，作为3个重复，每重复1垄、2行、约80株黄瓜。每次施加小杆线虫前从每垄黄瓜根际用直径2.5cm的土钻钻取5-15cm的土壤约500g，混匀、密封后作为一个土样。15天内从每个土样中取50mL土壤用改良贝尔曼漏斗法分离24小时，收集线虫悬浮液并浓缩，用等量FA溶液固定。在光学显微镜下参照Goodey分类系统(1963)和刘维志的《植物线虫志》(2004)，将线虫鉴定到属，并统计各属数量。
在4月底黄瓜拉秧前，从每垄随机拔取3株，共27株黄瓜观察其根结指数。根结按直径大小分为5级，没有根结的为O级，直径小于1mm的为I级，1-2mm的为II级，2-4mm的为III级，大于4mm的为IV级；统计每株黄瓜根上各级根结的数目。
2试验结果2.1小杆线虫的种群建立及动态变化对照组中小杆线虫的密度始终在每100毫升土壤150条线虫(150IJs/100mL)左右波动，而处理组的种群密度在2005年1月之前与对照无明显差异，之后开始迅速上升，在4月份达到2128IJs/100mL土壤，约为对照的11倍(见图1)，差异极显著(P＜0.01)。
2.2植物线虫的动态研究结果表明(图2)对照组的植物寄生线虫(主要是根结线虫Meloidogyne sp和矮化线虫Tylenchorhynchus sp，还有少量螺旋线虫Helicotylenchus sp.和拟滑刃线虫Aphelenchoides sp.等)种群密度2005年2月之前在200-300IJs/100mL土壤左右波动，之后迅速上升，在4月份达到1561IJs/100mL，与2月相比增长了6.8倍；施加小杆线虫后，植物寄生线虫种群密度在2005年1月之前与对照组无明显差异，也在每毫升土壤200-300条线虫之间；2月之后，与以前相比，植物线虫的种群密度略微有些升高，达到392IJs/100mL；在3月和4月，施加小杆线虫的处理组中的植物线虫种群密度仅为对照组的1/2倍和1/4倍，差异极为显著(P＜0.01)。
在河南省开封市通许县练城乡黄瓜根际土壤中，根结属线虫和矮化属线虫是最主要的植物寄生线虫类群(谢文闻等，2004)。小杆线虫Rhabditis(Oscheius)sp.(Bn)对二者的抑制作用分别见图3和图4。
2.2.1根结属线虫的动态对照组的根结属线虫Meloidogyne sp在2005年1月之前种群密度在20IJs/100mL左右波动，至2月，种群密度逐渐增高，接近200IJs/100mL，与1月相比，增加近10倍，虽然以后种群密度有所降低，但在4月份根结线虫的种群密度迅速猛增，达到712IJs/100mL，增加了35倍。而在施加小杆线虫的处理组，根结线虫种群密度在2005年3月之前始终处在较低水平(20IJs/100mL左右)，直至4月根结线虫的种群密度才缓慢增长到213IJs/100mL，但不及对照组的1/3，二者的差异极显著(P＜0.01)(图3)。
2.2.2矮化线虫属线虫的动态矮化属线虫Tylenchorhynchus sp.在2005年1月之前种群密度在150IJs/100mL左右波动，然后对照组的种群密度迅速增高，至4月份达到830IJs/100mL，比1月之前增长了5.5倍。施加小杆线虫的处理组，矮化线虫在2005年1月之前与对照没有明显区别。但之后，与对照组有极显著差异(P＜0.01)(图4)，至4月份，矮化线虫的种群密度在200IJs/100mL左右波动，仅为对照组的1/4。
2.2.3根结属线虫的根结指数如图5，到2005年4月，施用小杆线虫的处理组的黄瓜根结指数与对照相比显著降低(P＜0.05)。单株黄瓜的I-IV级根结数分别降低了75％、65％、47％和54％。
3.结论小杆线虫对根结线虫的有效性应该受施用时间的影响，一般在植物线虫侵入植物根系之前施用效果好。为保证足够的作用时间，本研究在黄瓜移栽前10天(9月底)施用小杆线虫。但从本实验结果看(图1-4)，在2005年2月之前，所有线虫的种群密度都不高(这可能与温室土壤温度较低有关)，在2月以后，对照组的植物线虫种群密度才迅速增高，据此，是否可以将第一次施用小杆线虫的时间安排在翌年1月、而不是当年9月底，有待于进一步验证。
从本研究的结果分析，小杆线虫Rhabditis(Oscheius)sp.(Bn)对植物线虫的抑制作用非常显著(P＜0.01)。2月份之后，对照组的植物线虫密度迅速上升，而处理组的植物线虫种群密度基本没变化(图2)，此时的小杆线虫的密度却迅速增大(图1)，尤其在4月份，处理组的黄瓜根结线虫和矮化线虫的种群密度较对照组分别降低了70％和87％(图3、4)，由此表明小杆线虫Rhabditis(Oscheius)sp.对植物寄生线虫有明显的抑制作用(图2-4)，这为应用对环境和人畜友好的生物制剂防治植物线虫开辟了生物防治新途径。本研究的实验方法还表明小杆线虫Rhabditis(Oscheius)sp.使用方便，无化学农药的残毒，可以作为生物新农药。另外，小杆线虫具有分布广泛、资源丰富、在自然界容易获得等优势，这些特性作为生物防治制剂尤为重要，由此认为小杆线虫极具开发价值和推广前景。
权利要求
1.小杆线虫在防治植物线虫的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征是在植物线虫侵入作物根系之前向田间施用小杆线虫制剂。
3.根据权利要求2所述的应用，所述的作物为黄瓜。
4.根据权利要求3所述的应用，所述小杆线虫制剂施用量为1.0×108-1.0×1011条/公顷。
5.根据权利要求4所述的应用，所述小杆线虫制剂施用量为1.0×1010条-5.0×1010条/公顷。
全文摘要
本发明涉及“小杆线虫在防治植物线虫中的应用”。本发明通过田间试验结果表明小杆线虫Rhabditis(Oscheius)spp.能抑制植物线虫的种群密度增长，对温室黄瓜根际植物寄生线虫具有明显的抑制作用，可以作为生物生态防治制剂，防治植物线虫的危害。本研究结果还表明小杆线虫使用方便，无化学农药的残毒，可以作为生物新农药。另外，小杆线虫具有分布广泛、资源丰富、在自然界容易获得等优势，这些特性作为生物防治制剂尤为重要，由此认为小杆线虫极具开发价值和应用前景。
文档编号A01P5/00GK1883274SQ20061001206
公开日2006年12月27日 申请日期2006年5月31日 优先权日2006年5月31日
发明者刘奇志 申请人:刘奇志