专利名称：一种红厚壳组培苗生根培养方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及红厚壳的组织培养，尤其涉 及一种红厚壳组培苗生根培养方法。
背景技术：
红厚壳属(07/o/ /z7//"m L)为藤黄科(Gw加/erae)植物，在我国的海南 岛和东南亚、印度、非洲等热带地区都有分布。红厚壳又名胡桐、海棠果，经 济价值高，应用范围广，具有油用、药用、材用、观赏、生态保护等多种用途。
我国有4种红厚壳植物，其中海南分布2种，分别为红厚壳(C。/op/^//1//77 7 op/z_y〃ww Zz>w.)禾口薄叶红厚壳(C. mew6rawaceww C7"ni/1 e CTz"mp.)， 目前 大都处在野生状态。由于砍伐和土地利用等，使红厚壳仅在某些地区小范围存 在。国内对红厚壳资源利用、保护和开发还没有进行过系统的科学研究，经济 利用价值还没有完全开发出来，特别是还缺乏栽培技术，产量低、株间差异大、 经济效益差。
根据陶忠良(陶忠良，资源开发与市场，2003， 19: 85 — 87)报道，红厚 壳植株生长较缓慢，幼苗生长6个月株高达40 50cm，但生长10年后才能结 果。
植物组织培养技术经过几十年的发展，已称为快速培育植物优质种苗的重 要技术手段之一。植物组织培养方法大致分为试管芽苗多代分化培养和芽苗的 试管生根培养两大程序，常规的生根培养是从一个试管中剪取无根芽苗，将芽 苗植于另一个试管的生根培养基上，进行生根培养，生根后即可形成完整植株，从试管中取出，炼苗后栽于移栽用基质中。组织培养的常规培养方法中，生根
阶段成本占到试管苗生产成本的30%左右，由于培养基及操作原因，存在培养 芽苗易污染，出苗率低，移栽过程复杂等问题，组织培养中经继代培养分化的 幼苗能否生根及生根的好坏关系到能否成苗和苗木质量的好坏。
在组织培养技术领域，普遍认为大多数植物需要经过3代以上才可进行生 根培养，并且生长时间为60 80天，縮短植物生长时间，加快植物组织培养 的周期，是组织培养应用领域一直渴望解决的问题。
建立红厚壳组织培养再生苗的生根方法，是红厚壳组培试管苗快速繁殖的 关键步骤，海南红厚壳组织培苗生根的方法以及移栽技术的研究至今未见相关 报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种生根率高、根系发达且 移栽成活率高的红厚壳组培苗生根培养方法。
本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的-一种红厚壳组培苗生根培养方法，该方法包括如下步骤
(1) 将红厚壳组培苗转入生根培养基中光照培养，诱导生根；所述生根培 养基的配方为1/2MS+1.0mg/L a-萘乙酸+8.0g/L琼脂+30 g/L蔗糖；
(2) 将已生根的组培苗转入含有活性炭的继代培养基中培养；所述继代培 养基的配方为1/2MS+0.5g/L活性炭+8.0g/L琼脂+30 g/L蔗糖；
(3) 将上述继代培养基中的幼苗经炼苗后即可进行移栽。
上述步骤(1)中，所述红厚壳组培苗是采用本领域技术人员的常规组织 培养技术，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、 体细胞等)以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条 件下，诱导培养所得的组织培养再生幼苗，此处的组培苗是无根的。
上述步骤(1)中，将红厚壳组培苗在无菌条件下切取幼苗，转入生根培
养基中，光照培养条件为培养温度为28士rC，相对湿度为70土5%，光照 条件为12小时/每天，光照强度为10±lpmol/m2 *s (表示"微摩尔/平方米X 秒")；
上述步骤(2)中，幼苗在生根培养基中一般培养4周左右，就已诱导出 根，此时将已生根的幼苗转入含有活性炭的继代培养基中进行培养；培养条温 度为28土rC，相对湿度为70±5%，光照条件为12小时/每天，光照强度为 10±lpmol/m2 s (表示"微摩尔/平方米X秒")
上述步骤(3)中，所述炼苗是将幼苗在继代培养基中培养4周，此时幼 苗生长健壮,根系发达，在培养室内逐步打开培养瓶盖子， 一周后将幼苗移出 瓶。
上述步骤(3)中，将炼苗后的幼苗栽于移栽用基质中，可采用沙土和腐 殖土的重量比为1: 1的移栽基质，保持泥土和空气湿润、避免阳光直射，继 续培养直至幼苗开始抽出新芽；将抽出新芽的幼苗置于户外阴凉处生长，避免 阳光直射，温度为30±3°C，相对湿度为50±5%，前20天每4天浇一次水(浇 透)，以后每2天浇一次，28天后获得9 10片叶的整齐的海南红厚壳组培苗。
上述步骤(3)中，在移栽基质中保持泥土和空气的湿润，泥土的湿度要 求浇透水到手用力能捏出水来，保持空气湿度的方法是在容器上覆盖一个透明 物，同时起到防风作用，所采用的覆盖物可选用烧杯、培养瓶或透明薄膜等，覆盖时要留出一条缝隙，避免完全密封。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果
1、 本发明的培养方法其生根率高、移栽成活率高，可达到86.7%，不定根 伸长较快；
2、 本发明能有效縮短诱导生根时间，又能促进根生长；
3、 本发明诱导出的根根系发达，苗木健壮；
4、 本发明操作简单、易行，成活率高达86%，移栽的幼苗生长条件容易 达到，经过4个月的培养，株高可达到30cm左右；
5、 本发明的生根培养采用两步生根法，即先在生根培养基中培养再转入 含活性炭的继代培养基中培养，比起现有的一步生根法，具有更加好的生根效 果。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步地描述，但具体实施例并不对本发 明做任何限定。 实施例l
本实施例的红厚壳组培苗生根培养方法，具体步骤如下
(1) 取2厘米高的红厚壳组培苗(无根)，无菌条件下切取幼苗，转入装有
生根培养基的培养瓶中培养，将培养瓶置于光照培养箱中培养，温度为28士1 °C，相对湿度为70±5%，光照条件为12小时/每天，光照强度为10士lpmo1/ m2*s (表示"微摩尔/平方米X秒")；生根培养基的配方为1/2MS+1.0mg/L a-萘乙酸+8.0g/L琼脂+30 g/L蔗糖；
(2) 4周左右，诱导出根，生根率达86.7%，将已生根的幼苗转入含有活性 炭的继代培养基中培养，继代培养基的配方为1/2MS+0.5g/L活性炭+8.0g/L 琼脂+30g/L蔗糖；继代培养基的培养温度为28士rC，相对湿度为70±5%，每天光照12小时，光照强度为10±l^imol/m2 s;
(3)幼苗在继代培养基中培养4周，此时幼苗生长健壮，根系发达；在 培养箱内逐步打开培养瓶盖子，将幼苗移出瓶，用清水冲洗干净根部附着的培
养基，移栽到含有沙子腐殖土为1: 1的基质的容器中继续培养，保持泥土 和空气湿润、避免阳光直射，直至幼苗开始抽出新芽；将幼苗置于户外阴凉处 生长，避免阳光直射，温度为30土3'C，相对湿度为50±5%，前20天每4天 浇一次水(浇透)，以后每2天浇一次，28天后获得9-10片叶的整齐的海南红 厚壳组培苗。采用本方法，移栽成活率达86%。 实施例2
本实施例的红厚壳组培苗生根培养方法，具体步骤如下
(1) 取2厘米高的红厚壳组培苗(无根)，无菌条件下切取幼苗，转入装 有生根培养基的培养瓶中培养，将培养瓶置于光照培养箱中培养，温度为28 士rC，相对湿度为70±5%，光照条件为12小时/每天，光照强度为10土lpmo1/ nf.s (表示"微摩尔/平方米X秒")；生根培养基的配方为1/2MS+1.0mg/L a-萘乙酸+8.0g/L琼脂+30 g/L蔗糖；
(2) 红厚壳幼苗在生根培养基中诱导出根后，将已生根的幼苗转入生根培 养基上培养，生根培养基的配方以及生根培养条件与步骤(1)相同；4周左 右可诱导出根，诱导率为86.7%，随着培养时间的增加，幼苗基部出现膨大， 根的生长受抑制，根短而粗；
(3) 已生根幼苗在生根培养基上培养4周，幼苗根系生长受抑制，根的颜 色呈浅黑色，部分叶片变黄；在培养箱内逐步打开培养瓶盖子，将幼苗移出瓶， 用清水冲洗干净根部附着的培养基，移栽到含有沙子腐殖土为1: 1的基质的容器中继续培养，保持泥土和空气湿润、避免阳光直射，直至幼苗开始抽出
新芽；将幼苗置于户外阴凉处生长，避免阳光直射，温度为30土3。C，相对湿 度为50±5%，前20天每4天浇一次水(浇透)，以后每2天浇一次，28天后 获得6-7片叶的整齐的海南红厚壳组培苗。移栽成活率为39.6%。 实施例3
本实施例的红厚壳组培苗生根培养方法，具体步骤如下 (1)取2厘米高的红厚壳组培苗(无根)，无菌条件下切取幼苗，转入装
有生根培养基的培养瓶中培养，将培养瓶置于光照培养箱中培养，温度为28 土rC，相对湿度为70±5%，光照条件为12小时/每天，光照强度为10±lMmol/ m2*s (表示"微摩尔/平方米X秒")；生根培养基的配方为l/2MS+1.0g/L 活性炭+8.0g/L琼脂+30 g/L蔗糖；
(2) 8周左右，诱导出根，生根率达82.3%，将已生根的幼苗转入含有活性 炭的继代培养基中培养，继代培养基的配方为1/2MS+0.5g/L活性炭+8.0g/L 琼脂+30g/L蔗糖；继代培养基的培养温度为28士rC，相对湿度为70±5%， 每天光照12小时，光照强度为10±l^imol/m2 s;
(3) 幼苗在继代培养基中培养4周，此时幼苗生长健壮，根细长，基部未 出现膨大；在培养箱内逐步打开培养瓶盖子，将幼苗移出瓶，用清水冲洗干净 根部附着的培养基，移栽到含有沙子腐殖土为h 1的基质的容器中继续培 养，保持泥土和空气湿润、避免阳光直射，直至幼苗开始抽出新芽；将幼苗置 于户外阴凉处生长，避免阳光直射，温度为30±3°C，相对湿度为50±5%， 前20天每4天浇一次水(浇透)，以后每2天浇一次，28天后获得9-10片叶 的整齐的海南红厚壳组培苗。采用本方法，移栽成活率达86%。由实施例l、 2和3可以看出，实施例1采用先生根培养基培养然后再继代 培养基培养的两步生根法，其生根效果、生根率以及移栽成活率均优于只用生 根培养基培养的方法，此外生根培养基的优选配方为1/2MS+1.0mg/Lct-萘乙酸 +8.0g/L琼脂+30g/L蔗糖。
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权利要求
1、一种红厚壳组培苗生根培养方法，其特征在于该方法包括如下步骤(1)将红厚壳组培苗转入生根培养基中光照培养，诱导生根；所述生根培养基的配方为1/2MS+1.0mg/L α-萘乙酸+8.0g/L琼脂+30g/L蔗糖；(2)将已生根的组培苗转入含有活性炭的继代培养基中培养；所述继代培养基的配方为1/2MS+0.5g/L活性炭+8.0g/L琼脂+30g/L蔗糖；(3)将上述继代培养基中的幼苗经炼苗后即可进行移栽。
2、 根据权利要求1所述培养方法，其特征在于所述步骤(1)中，光照培 养的培养温度为28士rC，相对湿度为70±5%，每天光照12小时，光照强度 为10士l^imol/m2 s 。
3、 根据权利要求1所述培养方法，其特征在于上述步骤(2)中，继代培 养基的培养温度为28土rC，相对湿度为70±5%，每天光照12小时，光照强 度为10±lpmol/m2 s 。
4、 根据权利要求1所述培养方法，其特征在于上述步骤(3)中，所述炼 苗的步骤是幼苗在继代培养基中培养4周，此时幼苗生长健壮，根系发达，在 培养室内逐步打开培养瓶盖子， 一周后将幼苗移出瓶。
5、 根据权利要求1所述培养方法，其特征在于上述步骤(3)中，移栽采 用沙土和腐殖土的重量比为1: l的移栽基质。
6、 根据权利要求1所述培养方法，其特征在于上述步骤(3)中，移栽后 保持泥土和空气湿润、避免阳光直射，继续培养直至幼苗开始抽出新芽，将抽 出新芽的幼苗置于户外阴凉处生长，避免阳光直射，温度为30土3'C，相对湿 度为50±5%,前20天每4天浇水一次，以后每2天浇水一次。
全文摘要
本发明公开一种红厚壳组培苗生根培养方法，该方法包括如下步骤(1)将红厚壳组培苗转入生根培养基中光照培养，诱导生根；(2)将已生根的组培苗转入含有活性炭的继代培养基中培养；(3)将上述继代培养基中的幼苗经炼苗后即可进行移栽。本发明操作简单、易行，生根率高、移栽成活率高，可达到86.7％，不定根伸长较快，移栽的幼苗生长条件容易达到，经过4个月的培养，株高可达到30cm左右。本发明能有效缩短诱导生根时间，又能促进根生长，诱导出的根根系发达，苗木健壮。本发明的生根培养采用两步生根法，比起现有的一步生根法，具有更加好的生根效果。
文档编号A01H4/00GK101647395SQ200910192490
公开日2010年2月17日 申请日期2009年9月18日 优先权日2009年9月18日
发明者王小菁, 许德成 申请人:华南师范大学