专利名称：一种北虫草菌种的分离方法
技术领域：
本发明涉及一种食用菌菌种分离方法，尤其涉及一种北虫草菌种的组织分离方法，属于食用菌生产技术领域。
背景技术：
北虫草也叫蛹虫草，是一种虫菌复合的药用真菌，属于真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。成熟的北虫草子座长5 15公分，金黄或者桔黄色，是一种名贵的药用真菌，与冬虫夏草有相似的药用和滋补功效。北虫草不仅含有丰富的蛋白质、氨基酸及30 多种人体所需的微量元素，而且含有特有的虫草素、虫草酸，是上等的滋补保健佳品。国内外研究认为，北虫草食用和药用价值可与传统的冬虫夏草媲美，人工培养的北虫草虫草素含量高于传统冬虫夏草几十倍。现代医药学研究证明，虫草中含有虫草素、虫草酸以及各种氨基酸等营养物质，具有滋肺补肾、止血化痰、扩张气管、镇静、抗各类细菌、降血压等功效。 卫生部已经批准北虫草为新资源食品，人工栽培的北虫草将弥补野生冬虫夏草数量严重短缺的状况，已经成为国内外虫草市场的新品种，栽培北虫草也逐渐成为农民增收致富的高效农业项目。随着北虫草产业的不断发展，栽培数量会逐渐增加，北虫草菌种的标准化生产问题不得不引起农业部门的重视，因为北虫草不同于其他食(药)用菌，其菌种的遗传性状非常不稳定，极易退化，不能象其他食(药)用菌菌种一样低温保存后转管继代培养，需要重新分离后，才能实现高产稳产。如果使用转管的菌种有可能导致只长菌丝不出草的状况发生， 给生产者造成很大的经济损失，所以，北虫草菌种分离工作尤为重要。现有技术中，食(药) 用菌菌种一般采用组织分离或孢子分离的方法获得，组织分离的部位一般选择子实体菌柄与菌盖交界部位不裸露的组织，而北虫草没有菌盖，其子座又很细，挑取不裸露的组织很困难。目前，公开的专利文献中尚未检索到北虫草组织分离的方法。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明公开一种北虫草菌种组织分离方法，包括培养基制作，选草，子座处理，选择最佳取种部位、切段，斜面定植与培养，其特征在于所述最佳取种部位区间是离北虫草子座生长点顶端5-30mm，该区间菌丝组织最密集，菌丝活力也最强。本发明的技术方案是这样实现的
1、制作培养基培养基制作方法是先将去皮土豆200g、麸皮5g、大米IOg与 SOO-IOOOml水共煮半小时后，再用4-6层纱布过滤取其汁，加水补足IOOOml后继续加热， 然后放入琼脂18-20g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2-3g、硫酸镁l_2g、蛋白胨6_8g、维生素 B1IOjOmg,调整pH至5. 5-6. 5 ；采用常规方法装试管、封口、灭菌、摆斜面，形成斜面培养基。2、挑选种草选取色泽鲜亮、长度整齐、粗细均勻，粗3-5mm，长60-80mm，生长健壮、无破损、无病虫感染、八成熟的北虫草子座作为种草。3、处理子座子座处理方法是在无菌环境中，用镊子夹住子座根部，先放入无菌水中清洗10-30秒，然后放入75%的酒精溶液中浸泡处理30-60秒，再放入未使用过的无菌水中清洗10-30秒，并用无菌刀刮去子座上部的孢子，逐根处理所选的子座。4、选择最佳取种部位取种最佳部位区间是离北虫草子座生长点顶端5_30mm，该区间菌丝组织最密集，菌丝活力也最强。5、种草切段将经过处理的北虫草子座，先用无菌刀切除顶端5mm的头部部位，再将其依次切成3-10mm长的小段种草，摆放在无菌的培养皿中，逐根切断所选的全部子座。6、定植将所切的北虫草子座小段种草逐一贴附定植在无菌的试管斜面上，每支试管贴附定植1段种草小段，定植部位在试管斜面的中央。7、培养定植好的试管斜面，用棉花或者硅胶塞封口后，放入23-26°C的培养室内，避光培养7-10天，就可以长成供生产使用的首代北虫草母种。本发明的有益效果与现有技术相比，本发明具有以下优点 1、分离方法简便易操作，实用性强。2、选取离北虫草子座生长点顶端5_30mm的部位区间作为种草组织，该区间菌丝组织最密集，菌丝活力也最强。3、每次使用首代母种，可以克服北虫草菌种遗传性状不稳定的缺陷，有效避免只长菌丝不出草的状况发生，确保栽培成功率，避免经济损失。
具体实施例方式
1、制作培养基培养基制作方法是先将去皮土豆200g、麸皮5g、大米IOg与IOOOml水共煮半小时后，再用6层纱布过滤取其汁，加水补足IOOOml后继续加热，然后放入琼脂20g、 葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1. 5g、蛋白胨6g、维生素BfOmg，调整pH至6. O ；采用常规方法装试管、封口、灭菌、摆斜面，形成斜面培养基。2、挑选种草选取色泽鲜亮、长度整齐、粗细均勻，粗3-5mm，长60-80mm，生长健壮、无破损、无病虫感染、八成熟的北虫草子座作为种草。3、处理子座子座处理方法是在无菌环境中，用镊子夹住子座根部，先放入无菌水中清洗20秒，然后放入75%的酒精溶液中浸泡处理60秒，操作要轻，不能造成表皮破损，防止酒精进入子座内部杀伤菌丝，为提高处理效果，可以将子座在无菌水和酒精之间来回操作2-3遍；最后再放入未使用过的无菌水中清洗20-30秒，并用无菌刀刮去子座上部的孢子，逐根处理所选的子座。4、选择最佳取种部位北虫草子座最佳取种部位区间是离生长点顶端5_30mm，该区间菌丝组织最密集，菌丝活力也最强。5、种草切段将经过处理的北虫草子座，先用无菌刀切除顶端5mm的头部部位，再将其依次切成5mm长的小段种草，摆放在无菌的培养皿中，逐根切断所选的全部子座。6、定植将所切的北虫草子座小段种草逐一贴附定植在无菌的试管斜面上，每支试管贴附定植1段种草小段，定植部位在试管斜面的中央。7、培养定植好是试管斜面，用棉花或者硅胶塞封口后，放入25°C的培养室内，避光培养7-10天，就可以长成供生产使用的首代北虫草母种。
权利要求
1.一种北虫草菌种的分离方法，包括培养基制作，选草，子座处理，选择最佳取种部位、 切段，斜面定植与培养，其特征在于所述最佳取种部位区间是离北虫草子座生长点顶端 5-30mm，该区间菌丝组织最密集，菌丝活力也最强。
2.根据权利要求1所述的一种北虫草菌种的分离方法，其特征在于所述的培养基制作方法是将去皮土豆200g、麸皮5g、大米IOg与SOO-IOOOml水共煮半小时后，用4_6层纱布过滤取其汁，加水补足IOOOml后继续加热，放入琼脂18-20g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾2_3g、 硫酸镁l_2g、蛋白胨6-8g、维生素B1IOjOmg,调整pH至5. 5-6. 5 ；采用常规方法装入试管， 灭菌摆斜面，形成斜面培养基。
3.根据权利要求1所述的一种北虫草菌种的分离方法，其特征在于所述的选草就是挑选种草，选取色泽鲜亮、长度整齐、粗细均勻，粗3-5mm，长60-80mm，生长健壮、无破损、无病虫感染、八成熟的北虫草子座作为种草。
4.根据权利要求1所述的一种北虫草菌种的分离方法，其特征在于所述的子座处理方法是在无菌环境中，用镊子夹住子座根部，先放入无菌水中清洗10-30秒，然后放入75% 的酒精溶液中浸泡处理30-60秒，再放入未使用过的无菌水中清洗10-30秒，并用无菌刀刮去子座上部的孢子，逐根处理所选的子座。
5.根据权利要求1所述的一种北虫草菌种的分离方法，其特征在于所述的切段是将经过处理的北虫草子座，先用无菌刀切除顶端5mm的头部，再将其依次切成3-10 mm长的小段，摆放在无菌的培养皿中，逐根切断所选的子座。
6.根据权利要求1所述的一种北虫草菌种的分离方法，其特征在于所述的斜面定植与培养是将所切的北虫草子座小段逐一贴附定植在无菌的试管斜面上，每支试管贴附1 段，贴附部位在试管斜面的中央；封口后放入23-26°C的培养室避光培养7-10天。
全文摘要
本发明属于食用菌生产领域，公开一种北虫草菌种的组织分离方法，包括培养基制作，选草，子座处理，选择最佳取种部位、切段，斜面定植与培养，其特征在于所述最佳取种部位区间是离北虫草子座生长点顶端5-30ml，该区间菌丝组织最密集，菌丝活力也最强。本发明分离方法简便易行，实用性强，每次使用首代母种应用生产，可以克服北虫草菌种遗传性状不稳定的缺陷，有效避免只长菌丝不出草的状况发生，避免经济损失，确保栽培成功率。
文档编号A01G1/04GK102440141SQ201010299589
公开日2012年5月9日 申请日期2010年10月8日 优先权日2010年10月8日
发明者朱忠贵, 董亚萍 申请人:镇江市食用菌研究所