专利名称：一种木耳液体冻干菌种的生产方法
技术领域：
本发明涉及食用菌菌种培养领域，具体地说是一种木耳液体冻干菌种的生产方法。
背景技术：
木耳人工栽培所使用的菌种多采用固体发酵法制备，但该法生产周期长、劳动强度大、劳动效率低、易受杂菌污染，同固体菌种相比，液体菌种具有周期短、菌龄整齐发菌快、接种方便、不易污染等优点，是未来食用菌制种的发展方向。但液体菌种也有不易储藏和运输的缺点，限制了液体制种技术在食用菌栽培领域的应用。发明内容
本发明的技术任务是提供一种木耳液体冻干菌种的生产方法。
本发明的技术任务是按以下方式实现的，该生产方法步骤如下
1)在无菌条件下，将木耳母种在斜面培养基中培养，培养条件为温度M 32°C， 时间5 8天，待菌丝布满斜面为止；
2)将斜面菌丝移种到摇瓶液体培养基静置培养1 2天后再进行振荡培养扩增；
3)将培养成熟的摇瓶菌种按5 10%的接种量接种到发酵罐进行培养扩增；
4)将发酵罐培养成熟的菌液进行离心或过滤处理收集菌丝球，并对菌丝球进行破碎处理；
5)向破碎好的菌丝体添加冻干保护剂，并在冰箱内预冻0. 5 2小时；
6)将预冻好的菌丝体在冷冻干燥机内干燥18 30小时后分割成块即为冻干菌种。
所述的斜面培养基由以下重量份配比的原料制成
马铃薯10 25份，蔗糖1 5份，琼脂1 2. 5份。
所述的液体培养基制备方法如下
将适量马铃薯、麸皮放入水中熬汁，然后在上述液体中加入适量葡萄糖、硫酸镁、 硫酸二氢钾和维生素&，混合均勻后获得液体培养基；
所述的各原料的重量份配比如下
马铃薯10 20份，葡萄糖1 5份，硫酸镁0. 01 0. 08份，硫酸二氢钾0. 05 0. 2份，维生素B1 0. 01 0. 1份，麸皮1 10份。
所述的摇瓶液体种子培养条件为温度25 32°C、摇床转速100 200r/min，装液量为100 180ml/500ml三角瓶，培养周期为4 7天。
所述的发酵罐液体种子培养条件为温度25 32°C、转速100 180r/min，通气量0. 02 0. IMpa,培养周期为4 7天。
所述的冻干保护剂为脱脂乳、谷氨酸钠、D-山梨醇、维生素C、蔗糖、葡萄糖及海藻糖中的一种或两种以上的混合物。
本发明的木耳液体冻干菌种的生产方法和现有技术相比，本发明液体培养部分形成的菌丝球大小均一、菌体量大且菌丝球个数多，冻干后的菌粉接种固体培养基后能够正常萌发，且萌发点多、发菌快、出菇周期短，接种24h菌丝布满料面，3-15天长满菌袋；另外， 本发明生产的液体冻干菌室温下可以保存半年活力不衰退，接种方便，将冻干菌粉溶于适量无菌水中即可喷晒接种，长期保持菌种性能稳定，便于工业化生产，具有较高的推广应用价值。
具体实施方式
实施例1
在无菌条件下，将木耳母种在斜面培养基中培养，培养条件为温度M°C，时间5 天，待菌丝布满斜面为止；将斜面菌丝移种到摇瓶液体培养基静置培养1天后再进行振荡培养扩增，培养条件为温度25°C、摇床转速lOOr/min，装液量为100ml/500ml三角瓶，培养周期为4天；将培养成熟的摇瓶菌种按5%的接种量接种到发酵罐进行培养扩增，培养条件为温度25°C、转速lOOr/min，通气量0. 02Mpa,培养周期为4天；将发酵罐培养成熟的菌液进行离心或过滤处理收集菌丝球，并对菌丝球进行破碎处理；向破碎好的菌丝体添加冻干保护剂，并在冰箱内预冻0. 5小时；将预冻好的菌丝体在冷冻干燥机内干燥18小时后分割成块即为冻干菌种。
上述斜面培养基的原料重量配比如下
马铃薯10kg，蔗糖1kg，琼脂1kg。
上述液体培养基制备方法如下
将IOkg马铃薯、Ikg麸皮放入沸水中熬汁，然后在上述熬好的汁液中加入Ikg葡萄糖、0. Olkg硫酸镁、0. 05kg硫酸二氢钾和0. Olkg维生素B1,混合均勻后获得液体培养基。
实施例2
在无菌条件下，将木耳母种在斜面培养基中培养，培养条件为温度32°C，时间8 天，待菌丝布满斜面为止；将斜面菌丝移种到摇瓶液体培养基静置培养2天后再进行振荡培养扩增，培养条件为温度32°C、摇床转速200r/min，装液量为180ml/500ml三角瓶，培养周期为7天；将培养成熟的摇瓶菌种按10%的接种量接种到发酵罐进行培养扩增，培养条件为温度32°C、转速180r/min，通气量0. IMpa，培养周期为7天；将发酵罐培养成熟的菌液进行离心或过滤处理收集菌丝球，并对菌丝球进行破碎处理；向破碎好的菌丝体添加冻干保护剂，并在冰箱内预冻2小时；将预冻好的菌丝体在冷冻干燥机内干燥30小时后分割成块即为冻干菌种。
上述斜面培养基的原料重量配比如下
马铃薯25kg，蔗糖^g，琼脂2. 5kgo
上述液体培养基制备方法如下
将20kg马铃薯、IOkg麸皮放入沸水中熬汁，然后在上述熬好的汁液中加入5kg葡萄糖、0. 08kg硫酸镁、0. 2kg硫酸二氢钾和0. Ikg维生素B1,混合均勻后获得液体培养基。
实施例3
在无菌条件下，将木耳母种在斜面培养基中培养，培养条件为温度^°C，时间7 天，待菌丝布满斜面为止；将斜面菌丝移种到摇瓶液体培养基静置培养1. 5天后再进行振荡培养扩增，培养条件为温度、摇床转速150r/min，装液量为140ml/500ml三角瓶，培养周期为5天；将培养成熟的摇瓶菌种按8%的接种量接种到发酵罐进行培养扩增，培养条件为温度^TC、转速140r/min，通气量0. 06Mpa，培养周期为5天；将发酵罐培养成熟的菌液进行离心或过滤处理收集菌丝球，并对菌丝球进行破碎处理；向破碎好的菌丝体添加冻干保护剂，并在冰箱内预冻1. 2小时；将预冻好的菌丝体在冷冻干燥机内干燥19小时后分割成块即为冻干菌种。
上述斜面培养基的原料重量配比如下
马铃薯Ukg，蔗糖:3kg，琼脂1. 5kgo
上述液体培养基制备方法如下
将15kg马铃薯、6kg麸皮放入沸水中熬汁，然后在上述熬好的汁液中加入3kg葡萄糖、0. 04kg硫酸镁、0. 12kg硫酸二氢钾和0. 05kg维生素B1,混合均勻后获得液体培养基。
上述三个实施例中的冻干菌种培养时，先溶于无菌水，然后接种于木耳栽培料袋， 培养M小时菌丝布满料面，15天长满菌袋，出菇量较固体菌种提高15%。
权利要求
1.一种木耳液体冻干菌种的生产方法，属于食用菌菌种培养领域，其特征在于该生产方法步骤如下1)在无菌条件下，将木耳母种在斜面培养基中培养，培养条件为温度M 32°c，时间 5 8天，待菌丝布满斜面为止；2)将斜面菌丝移种到摇瓶液体培养基静置培养1 2天后再进行振荡培养扩增；3)将培养成熟的摇瓶菌种按5 10%的接种量接种到发酵罐进行培养扩增；4)将发酵罐培养成熟的菌液进行离心或过滤处理收集菌丝球，并对菌丝球进行破碎处理；5)向破碎好的菌丝体添加冻干保护剂，并在冰箱内预冻0.5 2小时；6)将预冻好的菌丝体在冷冻干燥机内干燥18 30小时后分割成块即为冻干菌种。
2.根据权利要求1所述的木耳液体冻干菌种的生产方法，其特征在于所述的斜面培养基由以下重量份配比的原料制成马铃薯10 25份，蔗糖1 5份，琼脂1 2. 5份。
3.根据权利要求1所述的木耳液体冻干菌种的生产方法，其特征在于所述的液体培养基制备方法如下将适量马铃薯、麸皮放入水中熬汁，然后在上述液体中加入适量葡萄糖、硫酸镁、硫酸二氢钾和维生素B1,混合均勻后获得液体培养基；所述的各原料的重量份配比如下马铃薯10 20份，葡萄糖1 5份，硫酸镁0. 01 0. 08份，硫酸二氢钾0. 05 0. 2 份，维生素B1 0.01 0. 1份，麸皮1 10份。
4.根据权利要求1所述的木耳液体冻干菌种的生产方法，其特征在于所述的摇瓶液体种子培养条件为温度25 32°C、摇床转速100 200r/min，装液量为100 180ml/500ml 三角瓶，培养周期为4 7天。
5.根据权利要求1所述的木耳液体冻干菌种的生产方法，其特征在于所述的发酵罐液体种子培养条件为温度25 32°C、转速100 180r/min，通气量0. 02 0. IMpa,培养周期为4 7天。
6.根据权利要求1所述的木耳液体冻干菌种的生产方法，其特征在于所述的冻干保护剂为脱脂乳、谷氨酸钠、D-山梨醇、维生素C、蔗糖、葡萄糖及海藻糖中的一种或两种以上的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种木耳液体冻干菌种的生产方法，属于食用菌菌种培养领域，该生产方法步骤如下在无菌条件下，将木耳母种在斜面培养基中培养，待菌丝布满斜面为止；将斜面菌丝移种到摇瓶液体培养基静置后再进行振荡培养扩增；将培养成熟的摇瓶菌种接种到发酵罐进行培养扩增；将发酵罐培养成熟的菌液进行离心或过滤处理收集菌丝球，并对菌丝球进行破碎处理；向破碎好的菌丝体添加冻干保护剂，并在冰箱内预冻；将预冻好的菌丝体在冷冻干燥机内干燥后分割成块即为冻干菌种。本发明液体培养部分形成的菌丝球大小均一、菌丝球个数多，且萌发点多、发菌快、出菇周期短；本发明生产的液体冻干菌保存半年活力不衰退，接种方便。
文档编号A01G1/04GK102498926SQ20111029590
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月8日 优先权日2011年10月8日
发明者冯志彬, 王东涛 申请人:金乡县益佳康生物科技有限责任公司