专利名称：一种蛋氨酸寡肽及其在大菱鲆饲料中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于水产饲料技术领域，具体涉及一种可用于大菱鲆饲料的添加剂，特别涉及一种大菱鲆用的蛋氨酸寡肽及其应用技术。
背景技术：
近年来，随着我国水产养殖产量的逐年增加，配合饲料原料的需求量越来越大，饲料蛋白源供应不足的问题越来越突出。在提高水产饲料产量的同时还必需考虑如何降低饲料的成本，以获得最大的经济效益。而蛋白质是饲料中的主要营养物质，也是决定饲料成本的关键因素；但是目前水产养殖动物大多数都要求在饲料中有较高的蛋白质含量，同时还特别依赖动物性蛋白源——鱼粉，这就大大提高了水产养殖动物饲料的成本；而且鱼粉在世界范围内也变得越来越短缺。因此，人们试图利用价格比较低廉的植物蛋白部分或全部替代动物蛋白，以此配制水产养殖动物的饲料，达到降低成本、提高经济效益的目的。但是， 许多的研究表明植物蛋白只能少量的替代饲料中的动物蛋白，并且用这样的饲料养殖动物往往会引起摄食量减少、转化率降低、生长缓慢、体组成发生异常改变等问题。其中一个重要的原因就是植物蛋白的氨基酸组成不平衡，特别是蛋氨酸的缺乏，限制了植物蛋白在水产养殖动物饲料中的应用。大菱鲆是欧洲名贵的经济鱼种，它适应低水温环境、生长快、抗逆性强、肉质细嫩、 胶质丰富、口感独特，深受养殖业者和消费者的喜爱。自1992年引入我国以来，在我国北方沿海发展迅速，成为我国北方海水养殖的一项支柱产业。大菱鲆饲料中的蛋白质需求量达到48 %，这要求在饲料中添加较高含量的鱼粉，从而导致大菱鲆饵料价格一直居高不下。因此，用植物蛋白源替代饲料中昂贵的鱼粉，是降低大菱鲆饲料成本的有效途径。研究和生产中希望通过在植物蛋白中添加蛋氨酸来弥补植物蛋白氨基酸不平衡的缺陷。目前，商品蛋氨酸添加剂主要为晶体蛋氨酸，包括DL-蛋氨酸、DL-蛋氨酸羟基类似物(MHA)、DL_蛋氨酸羟基类似物钙盐(MHA-Ca)及N-羟甲基蛋氨酸钙等形式。其中，DL-蛋氨酸最为常见。然而，饲料中的晶体氨基酸不能与结合态氨基酸同步吸收。同时，晶体氨基酸的使用会改变饲料的酸碱度，影响水产动物对饲料的利用。另外，饲料中晶体氨基酸在水体环境中易发生溶失，降低了饲料的利用率。这些因素均造成了晶体氨基酸到目前为止仍然不能很好地在水产饲料中得到广泛应用。因此，解决氨基酸吸收不同步、饲料酸碱度和溶失等问题，对于促进氨基酸在水产饲料中的应用，提高植物蛋白源对鱼粉的替代比例至关重要。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛋氨酸寡肽及其在大菱鲆饲料中的应用，解决氨基酸吸收不同步、饲料酸碱度和溶失等问题，从而弥补现有技术的不足。本发明的蛋氨酸寡肽，为蛋氨酸二肽至八肽的混合物。本发明的寡肽是用木瓜蛋白酶对蛋氨酸乙酯盐酸盐进行合成制备的。具体制备方法如下将蛋氨酸乙酯盐酸盐配成300mg/ml的pH为5. 5的柠檬酸钠溶液，再将木瓜蛋白酶溶解于含0. lmol/L的半胱氨酸和lOmmol/L乙二醇二乙醚二胺四乙酸的PH为6. 5的水溶液中制成木瓜蛋白酶溶液，然后将木瓜蛋白酶溶液按照质量比 1 200加入到蛋氨酸乙酯盐酸溶液中，37°C条件下反应2小时，收集沉淀后，上清液中再按质量比1 200加入木瓜蛋白酶溶液，在37°C条件下反应过夜；反应结束后，用蒸馏水稀释产品，并加热至90°C来灭活蛋白酶；将水不溶物在蒸馏水中洗三次，冷冻干燥产品即制得本发明的蛋氨酸寡肽。上述蛋氨酸寡肽作为添加剂在水产饲料中的应用。其中所述的水产饲料为大菱鲆饲料，蛋氨酸寡肽的添加量为0. 2% 0. 5%。上述的大菱鲆饲料优选如下的配方鱼粉30-36 %，豆粕25-35 %，小麦粉 16-20%,啤酒酵母2-4%，大豆卵磷脂1-3%，大菱鲆维生素矿物质预混料1-3%，氯化胆碱 0. 2-0. 3%,磷酸二氢钙0. 2-0. 4%,甜菜碱0. 2-0. 4%,乙氧基喹林0. 04-0. 06%,混合晶体氨基酸2-3%。本发明将蛋氨酸寡肽作为添加剂应用在大菱鲆饲料中，添加量仅为0.2% 0.5%就能补充植物蛋白源中缺乏的蛋氨酸，促进大菱鲆的生长，提高大菱鲆对植物蛋白源的利用，减少饲料中鱼粉的使用量，从而起到降低饲料成本的作用。同时本发明的蛋氨酸寡肽能在不影响饲料酸碱度的情况下，改善蛋氨酸寡肽中释放出的蛋氨酸与饲料中蛋白质结合态蛋氨酸的同步吸收；在饲料中还具有不易在养殖水环境中溶失的特点。同时，本发明的蛋氨酸寡肽配合制备的饲料来使用具有更好的效果。说明书附1 测定蛋氨酸寡肽中不同聚合度肽分子量的质谱图。
具体实施例方式实施例1 蛋氨酸寡肽的制备本发明的蛋氨酸寡肽可以通过人工合成，也可以通过生物酶法来制备；下面对生物学的制备方法进行描述将蛋氨酸乙酯盐酸盐配成300mg/ml的pH为5. 5的柠檬酸钠溶液，再将木瓜蛋白酶溶解于含0. lmol/L的半胱氨酸和lOmmol/L乙二醇二乙醚二胺四乙酸的pH为6. 5的水溶液中制成木瓜蛋白酶溶液，然后将木瓜蛋白酶溶液按照质量比1 200加入到蛋氨酸乙酯盐酸溶液中，37°C条件下反应2小时，收集沉淀后，上清液中再按质量比1 200加入木瓜蛋白酶溶液，在37 °C条件下反应过夜；反应结束后，用蒸馏水稀释产品，并加热至90 0C来灭活蛋白酶；将水不溶物在蒸馏水中洗三次，冷冻干燥产品即制得本发明的蛋氨酸寡肽。实施例2 制备的蛋氨酸寡肽的检测质谱测定蛋氨酸寡肽中不同聚合度肽的分子量(由北京艾米诺医学有限公司提供技术支持)，如
图1所示蛋氨酸寡肽为蛋氨酸2肽、3肽、4肽、5肽、6肽、7肽及8肽的混合物。实施例3 蛋氨酸寡肽的应用以鱼粉、豆粕、啤酒酵母、小麦粉、鱼油、大豆卵磷脂、大菱鲆维生素矿物质预混料、 氯化胆碱、磷酸二氢钙、甜菜碱为主要原料，配制2种低鱼粉大菱鲆人工配合饲料(详见表 1)饲料1#为添加晶体蛋氨酸的处理组；饲料2#为添加了蛋氨酸寡肽的处理组。
表1:实验饲料配方
原料饲料1# 饲料2#
鱼粉3333
豆粕3030
啤酒酵母33
小麦粉18.818.8
鱼油 7
大豆卵磷脂22 大菱鲆维生素矿物质预混料22
氯化胆碱0.250.25
磷酸二氢钙0.30.3
甜菜碱0.30.3
乙氧基喹啉0.050.05
混合晶体氨基酸2.82.8
晶体蛋氨酸0.50
蛋氨酸寡肽00.5选用当年人工孵化的同一批大菱鲆，体重约6. 8g左右，作为试验用鱼。经1周的驯养后，挑选出体格健壮、规格一致的大菱鲆进行分组试验。共分为2组，每组设3个平行，每个平行为1个250L的玻璃钢桶，放养30尾试验用大菱鲆，2个组分别投喂1#和2#试验饲料。流水养殖，充气。在为期56天的养殖试验中，海水的溶氧在7. 8-8. 2mg/L,pH 7. 5-8.0， 盐度观-30，温度14-16°C。每天投喂2次，分别在07 00、19 00，饱食投喂，每日清除残饵及排泄物。试验开始和结束时对每个平行的大菱鲆进行称重，计算大菱鲆的增重率和特定生长率。增重率=(Wt-W0)/W0XlOO特定生长率=(LnWt-LnWtl)X 100/t其中，W0和Wt分别为每个平行大菱鲆初始体重和终末体重，t为实验天数。实验结果用平均值士标准误(mean士S. E)表示。同一行右上角不同英文上标字母表示有显著性差异(P < 0. 05)，具体实验结果见表2。具体实验结果见表2。表2 投喂蛋氨酸寡肽对大菱鲆存活、生长和饲料系数的影响
权利要求
1.一种蛋氨酸寡肽，其特征在于，所述的蛋氨酸寡肽为蛋氨酸二肽至八肽的混合物。
2.权利要求1所述的蛋氨酸寡肽的制备方法，其特征在于，是用木瓜蛋白酶对蛋氨酸乙酯盐酸盐进行合成制备的。
3.如权利要求2所述的制备方法，其具体制备方法如下将蛋氨酸乙酯盐酸盐配成 300mg/ml的pH为5. 5的柠檬酸钠溶液，再将木瓜蛋白酶溶解于含0. lmol/L的半胱氨酸和 lOmmol/L乙二醇二乙醚二胺四乙酸的pH为6. 5的水溶液中制成木瓜蛋白酶溶液，然后将木瓜蛋白酶溶液按照质量比1 200加入到蛋氨酸乙酯盐酸溶液中，37°C条件下反应2小时，收集沉淀后，上清液中再按质量比1 200加入木瓜蛋白酶溶液，在37°C条件下反应过夜；反应结束后，用蒸馏水稀释产品，并加热至90°C来灭活蛋白酶；将水不溶物在蒸馏水中洗三次，冷冻干燥产品即制得本发明的蛋氨酸寡肽。
4.权利要求1所述的蛋氨酸寡肽作为添加剂在水产饲料中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的水产饲料为大菱鲆饲料。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的大菱鲆饲料中，蛋氨酸寡肽的添加量为 0. 2% 0. 5%。
7.如权利要求4或5所述的应用，其特征在于所述的大菱鲆饲料的配方组分和质量百分比为鱼粉30-36%，豆粕25-35%，小麦粉16-20 %，啤酒酵母2_4%，大豆卵磷脂1-3%, 大菱鲆用维生素矿物质预混料1-3%，氯化胆碱0. 2-0. 3%,磷酸二氢钙0. 2-0. 4%,甜菜碱 0. 2-0. 4%，乙氧基喹林0. 04-0. 06%，混合晶体氨基酸2—3%。
全文摘要
本发明涉及一种蛋氨酸寡肽，为蛋氨酸二肽至八肽的混合物，及其在大菱鲆饲料中作为添加剂的应用。本发明将蛋氨酸寡肽作为添加剂应用在大菱鲆饲料中，添加量仅为0.2％～0.5％就能补充植物蛋白源中缺乏的蛋氨酸，促进大菱鲆的生长，提高大菱鲆对植物蛋白源的利用，减少饲料中鱼粉的使用量，从而起到降低饲料成本的作用。同时本发明的蛋氨酸寡肽能在不影响饲料酸碱度的情况下，改善蛋氨酸寡肽中释放出的蛋氨酸与饲料中蛋白质结合态蛋氨酸的同步吸收；在饲料中还具有不易在养殖水环境中溶失的特点。同时，本发明的蛋氨酸寡肽配合制备的饲料来使用具有更好的效果。
文档编号A23K1/10GK102422984SQ201110330500
公开日2012年4月25日 申请日期2011年10月26日 优先权日2011年10月26日
发明者刘付志国, 张文兵, 徐玮, 白楠, 谷珉, 麦康森 申请人:中国海洋大学