专利名称：畜禽用复合益生菌饲料添加剂及预混料、浓缩料和配合料的制作方法
技术领域：
本发明属于畜禽饲料领域，尤其是一种畜禽用复合益生菌饲料添加剂及其制备方法，以及含有其的预混料、浓缩料和配合料。
背景技术：
动物肠道中存在着由许多微生物组成的复杂多样的微生态区系，该区系对宿主的生长和健康意义重大。对畜禽来说，肠道中微生态菌群的组成及变化直接影响着畜禽的健康和生理功能，畜禽肠道内的微生物在畜禽生长发育过程中逐渐产生，逐渐形成适合畜禽的微生物菌群，并逐渐达到最适宜的微生态平衡状态，其中益生菌占绝对优势。益生菌一词来源于拉丁文，意思为有利于生命，是一类与宿主互利共生、有利于宿主健康的肠道细菌。益生菌在畜禽肠道内数量多，占据主要地位，起到主要的生理作用，畜禽肠道益生菌一旦遭到破坏或数量减少，就会引起疾病，使猪出现腹泻、脱水、体重下降、生产性能降低等症状。 畜禽肠道益生菌对畜禽的健康和生命活动具有十分重要的作用，益生菌有很多的种类及特殊的生理功能。根据农业部颁布的饲料添加品种目录(2008)，选择酵母菌提供大量的菌体蛋白，丰富的B族维生素等营养物质，提高畜禽免疫及生产性能；芽孢杆菌调节肠道菌群平衡；肠球菌可以在畜禽肠道内定植，降低肠道PH等作用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种畜禽用复合益生菌饲料添加剂。本发明提供的复合益生菌饲料添加剂含有复合益生菌粉和辅料，所述复合益生菌为产I元假丝酵母(Candida util is)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)、幾肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)。其中，产朊假丝酵母菌粉、酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉、粪肠球菌菌粉和屎肠球菌菌粉的重量比为I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1.O-L 5 o其中，所述产朊假丝酵母的活菌数为1.0\109 1.0\10110 ~8，所述酿酒酵母的活菌数为I. OX IO9 1.0X10nCFU/g，所述产朊假丝酵母的活菌数为I. OX IO9 1.0X10nCFU/g，所述枯草芽孢杆菌的活菌数为I. OX IO9 1.0X10nCFU/g，所述粪肠球菌的活菌数为I. OXlO9 1.0X10nCFU/g，所述屎肠球菌的活菌数为1.0X109 I. 0X10nCFU/g。其中，所述辅料选自玉米淀粉、葡萄糖、麦芽糊精中的一种或多种。本发明还提供所述的饲料添加剂的制备方法，其包括如下步骤I)分别制备产朊假丝酵母、酿酒酵母、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的菌泥，再将各自的菌泥与相应的冻干保护剂混匀后冷冻干燥制备成各自的菌粉；2)将产朊假丝酵母冻干菌粉、酿酒酵母冻干菌粉、地衣芽孢杆菌冻干菌粉、枯草芽孢杆菌冻干菌粉、粪肠球菌冻干菌粉和屎肠球菌冻干菌粉的按重量比I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1.0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5混匀后，再与辅料进行混合。本发明提供的所述的饲料添加剂的制备方法，还可包括制备各自菌粉后将菌粉进行稀释，所用的稀释载体为重量百分比75-100%的玉米粉和0-25%的红糖。其中，产朊假丝酵母和酿酒酵母的冻干保护剂为8-10%的甘油、生理盐水和10-20%菌泥重量的脱脂奶粉；地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的冻干保护剂为5. 0-6. 5%蔗糖、I. 0-1. 2%谷氨酸钠和I. 0-1. 2%抗坏血酸水溶液、50-70%菌泥重 量的脱脂奶粉。本复合益生菌饲料添加剂可以添加到预混料、浓缩料、配合料，用于畜禽预混料、浓缩料、配合料的制备。本发明饲料添加剂可以提高畜禽生长性能，促进采食，维持其肠道微生物区系平衡，减少排泄物味道。本发明所用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为申请人从传统发酵豆豉中分离得到，其生物学特征如下菌落表面粗糙，不透明，污白色，菌落圆形，边缘呈锯齿状，革兰氏阳性菌；芽孢形态为椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。本发明的枯草芽孢杆菌显著区别于现有的枯草芽孢杆菌，可以耐受pH2.0，l%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受0. 3%的人工胆盐，可以耐受80°C的制粒温度，可以抑制致病性大肠杆菌K88，K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产纤维素酶的能力，可以降解纤维素。本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)已于2011年3月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJia :北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 4628。本发明的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有良好的耐胃酸、耐胆盐、耐高温、耐受常用抗生素等抗逆性能和产酸、产酶、抑制病原菌等益生功能，为申请人从健康动物肠道或粪便中分离、选育得到，经中国农业微生物菌种保藏管理中心鉴定，并于2008年3月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJia :北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No. 2388。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)为申请人从牛肠道中分离、经定向初筛和复筛得到。其营养细胞杆状，其芽孢为椭圆或长筒形，为中生或次端生，孢囊稍膨大。孤立或呈短链，杆端半圆形。在12 16h内能形成菌落，菌落为圆形，或不规则，边缘毛发状，菌落白色，不透明，无褶皱。革兰氏阳性。申请人对此株地衣芽孢杆菌进行了耐酸性、耐胆盐、耐高温性、发酵特性和抑菌活性等实验，此株地衣芽孢杆菌具有对逆环境耐受性强、粘附性强、生长快、生物量大、抑菌活性好等特点。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCCJia :北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 5094。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)为申请人从猪大肠中分离得到,其生物学特征如下菌落圆整，表面光滑，不透明，乳白色，边缘光滑，革兰氏阳性菌；单个菌体为球状或椭圆状。本发明的粪肠球菌经过人工胃液、胆汁液及耐热性的筛选；又经过产酶能力筛选和抑菌能力筛选，可以耐受pH2. O，1%胃蛋白酶的人工胃液，可以耐受0. 3%的人工胆汁液，可以耐受85°C的制粒温度，也可以抑制致病性大肠杆菌K88，K99和金黄色葡萄球菌，具有较强的产酸和抑制豆柏、棉柏、玉米秸杆中霉菌的能力。本发明的粪肠球菌(Enterococcus faecalis)申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址同上，保藏编号为CGMCC No. 5092。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例I酿酒酵母和产朊假丝酵母菌粉制备酿酒酵母CGMCC 2388 ;产朊假丝酵母购自中国食品发酵工业研究院。共用的种子培养基1. 0%酵母浸粉，2. 0%蛋白胨，2. 0%葡萄糖。培养条件28°C，180rpm,24h0产朊假丝酵母培养基1. 0%酵母浸粉，4. 0%葡萄糖，I. 0%蛋白胨，0. 2%磷酸二氢钾，0. 03%硫酸镁。酿酒酵母培养基1. 5%酪蛋白胨，2. 5%酵母浸粉，3. 0%葡萄糖，0. 24%磷酸二氢钾，
I.6%磷酸氢二钾。 培养条件28°C，150rpm,72h0所得发酵液用高速冷冻离心机离心，离心条件6000rpm，4°C，lOmin。离心后弃上清液，得菌泥。将10%甘油和0. 85%生理盐水按体积比I: I混合，稀释搅拌菌泥混匀，再加A 10%进口脱脂奶粉混匀。先置于-80°C超低温冰箱冷冻，再置于真空冷冻干燥机干燥24h，取出粉碎，过60目筛。实施例2地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌菌粉制备地衣芽孢杆菌CGMCC 5094 ;枯草芽孢杆菌CGMCC 4628。共用种子培养基0. 5%牛肉膏，I. 0%蛋白胨，0. 5%氯化钠。培养条件37°C，180rpm，24h。地衣芽孢杆菌培养基3. 0%红糖，I. 0%玉米粉，3. 0%豆饼粉，0. 25%尿素，0. 15%磷
酸二氢钠。枯草芽孢杆菌培养基2. 0%葡萄糖，4. 0%大豆蛋白胨，0. 16%硫酸镁，0. 3%磷酸氢二钾，0. 3%磷酸二氢钾。培养条件3rc，180rpm,24h0所得发酵液用高速冷冻离心机离心，离心条件5000rpm，4°C，lOmin。离心后弃上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%谷氨酸钠，I. 0%抗坏血酸的水溶液搅拌菌泥混匀，再加入50%进口脱脂奶粉。先置于-80°C超低温冰箱冷冻，再置于真空冷冻干燥机干燥24h，取出粉碎，过60目筛。实施例3屎肠球菌和粪肠球菌菌粉制备屎肠球菌购自中国食品发酵工业研究院；粪肠球菌CGMCC5092。共用种子培养基为商品MRS肉汤(乳酸菌专用培养基)。培养条件37°C，IOOrpm,12h。屎肠球菌和粪肠球菌培养基3. 5%蛋白胨，6. 0%牛肉粉，0. 50%柠檬酸二铵，3. 5%蔗糖，I. 0%酵母浸粉，0. 4%磷酸氢二钾，0. 1%乙酸钠，0. 02%硫酸镁，0. 005%硫酸锰，0. 05%
吐温80。培养条件37°C，50rpm，12h。所得发酵液用高速冷冻离心机离心，离心条件5000rpm，4°C，lOmin。离心后弃上清液，得菌泥。用5. 0%蔗糖，I. 0%谷氨酸钠，I. 0%抗坏血酸的水溶液搅拌菌泥混匀，再加入50%进口脱脂奶粉。先置于-80°C超低温冰箱冷冻，再置于真空冷冻干燥机干燥24-30h，取出粉碎，过60目筛。实施例4菌粉活菌数测定取冻干后的菌粉各0. 5g，在无菌条件下放入装有4. 5ml无菌水的试管，震荡，混匀，取0. 5ml菌液再放入装有4. 5ml无菌水的试管，震荡，混匀，以此类推，将菌液稀释至10_8后，取10_8、10_7、10_6浓度菌液各200 ill涂平皿，每个浓度涂两个平皿，培养、计数。酵母菌使用商业麦芽汁琼脂平皿，肠球菌使用商业MRS琼脂平皿，芽孢杆菌使用商业营养琼脂平皿。活菌计数酵母菌约I. O X 1010CFU/g ;芽孢杆菌约2. O X 10nCFU/g ;肠球菌约3. 0X10nCFU/g。实施例5复合益生菌饲料添加剂的制备产朊假丝酵母和酿酒酵母纯菌粉按I: I比例混合，用玉米粉(过40目筛)，红糖(食品级)按重量百分比75% :25%稀释，使最终活菌数达到酵母菌I. OX 109CFU/g。地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌纯菌粉按I: I比例混合，用玉米粉(过40目筛)稀释，使最终活菌数达到2. OX 109CFU/g。屎肠球菌和粪肠球菌纯菌粉按1:1比例混合，用玉米粉(过40目筛)稀释，使最终活菌数达到3.0X109CFU/g。稀释菌粉按酵母菌芽孢杆菌肠球菌1.0:1.5:1.0进行混合后再与玉米淀粉配合制备饲料添加剂。复合菌粉与玉米淀粉的重量比为1:1。试验例I试验动物选择28日龄断奶仔猪(大X长)，根据窝源、体重、性别随机分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复6-8头猪，公母比例均衡。表I试验设计
_添加刻_浓度仔猪头数
空白 - -43
处理2 实施例5 0.1%43处理3 实施例5 0.2%43处理4 实施例5 0.3%43、对照组I 胜肥速得 0.2% 43对照组2_益菌多_02%_43_注胜肥速得韩国生产的一种微生物产品，直接取自动物肠道的微生物，主要含有嗜酸乳酸菌I X 10nCFU/g;枯草芽孢杆菌I X 10nCFU/g ;粪链球菌I X 10nCFU/g ;酵母菌lX10nCFU/g。试验规程试验从仔猪断奶时即28日龄左右时开始，一共进行35天，63日龄时结束。试验组日粮在基础日粮(表2 )的基础上添加规定比例的微生物制剂。表2基础日粮配方
权利要求
1.一种畜禽用复合益生菌饲料添加剂，其含有复合益生菌粉和辅料，所述复合益生菌为产I元假丝酵母(Candida util is)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、地衣芽抱杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)、幾肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)。
2.如权利要求I所述的饲料添加剂，其特征在于，产朊假丝酵母菌粉、酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉、 粪肠球菌菌粉和屎肠球菌菌粉的重量比为I. 0-1. 5:I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5。
3.如权利要求I或2所述的饲料添加剂，其特征在于，所述产朊假丝酵母的活菌数为I. OX IO7 1.0X10nCFU/g，所述酿酒酵母的活菌数为I. OX IO7 1.0X10nCFU/g，所述产朊假丝酵母的活菌数为I. OX IO7 1.0X1012CFU/g，所述枯草芽孢杆菌的活菌数为I.0 X IO7 I. 0 X 1012CFU/g,所述粪肠球菌的活菌数为I. 0 X IO7 I. 0 X 1012CFU/g,所述屎肠球菌的活菌数为I. 0 X IO7 I. 0 X 1012CFU/g。
4.如权利要求I或2所述的饲料添加剂，其特征在于，所述辅料选自玉米淀粉、葡萄糖、麦芽糊精中的一种或多种。
5.权利要求I 4任一项所述的饲料添加剂的制备方法，其包括如下步骤 1)分别制备产朊假丝酵母、酿酒酵母、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的菌泥，再将各自的菌泥与相应的冻干保护剂混匀后冷冻干燥制备成各自的菌粉； 2)将产朊假丝酵母菌粉、酿酒酵母菌粉、地衣芽孢杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉、粪肠球菌菌粉和屎肠球菌菌粉的按重量比I. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1. 5:1. 0-1.5混匀后，再与辅料进行混合。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括制备各自菌粉后将菌粉进行稀释，所用的稀释载体为重量百分比75-100%的玉米粉和0-25%的红糖。
7.如权利要求5或6所述的制备方法，其特征在于，产朊假丝酵母和酿酒酵母的冻干保护剂为8-10%的甘油、生理盐水和10-20%菌泥重量的脱脂奶粉；地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的冻干保护剂为5. 0-6. 5%蔗糖、I. 0-1. 2%谷氨酸钠和I. 0-1. 2%抗坏血酸水溶液、50-70%菌泥重量的脱脂奶粉。
8.含有权利要求I 4任一项所述的饲料添加剂的预混料。
9.含有权利要求I 4任一项所述的饲料添加剂的浓缩料。
10.含有权利要求I 4任一项所述的饲料添加剂的配合料。
全文摘要
本发明公开了一种畜禽用复合益生菌饲料添加剂，其含有复合益生菌粉和辅料，所述复合益生菌为产朊假丝酵母、酿酒酵母、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌。本发明饲料添加剂可以提高畜禽生长性能，促进采食，维持其肠道微生物区系平衡，减少排泄物味道。
文档编号A23K1/16GK102742728SQ20121020361
公开日2012年10月24日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者孙晓雯, 宋维平, 张军, 彭子欣, 李晓清, 汪攀, 贠桂玲, 闫轶洁, 韩科厅 申请人:北京大北农科技集团股份有限公司, 哈尔滨大北农牧业科技有限公司, 漳州大北农农牧科技有限公司