一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法
【专利摘要】本发明公开了一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法，将保水剂与珍珠岩按2∶1的比例混均，消毒后装入6孔细胞培养板，将烟草种子播种在细胞培养板上，每个品种各播种到一个孔中，10～20粒/孔，放在无菌培养室中培养，温度环境25℃、每天光照16小时、光照强度4000lux、相对温度70～80%，出苗后，每个孔中均匀的留苗5株，用烟草育苗专用肥配制营养液，使其中氮肥浓度达到100ppm，追施到培养板中，待小苗长至两片真叶时，将青枯菌悬浮液用移液枪接种到细胞培养板的每个孔中，每孔接种1ml，15天后调查记录。本发明鉴定周期更短，25天小苗即可用于鉴定，不受季节限制，试验稳定性强。
【专利说明】一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物抗病性鉴定【技术领域】，具体涉及幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方 法。
【背景技术】
[0002] 由细菌引起的一种烟草病害，在我国多个烟区都有发生，危害严重。对青枯病缺乏 特效防治药剂，一旦发生很难防治。在青枯病易发地区，最主要的方法就是选用抗青枯病烟 草品种。对烟草品种的青枯病抗病性鉴定，目前主要依靠田间病圃鉴定，但是田间病圃鉴 定有鉴定时间长、成本高，受地力、季节的影响较大，抗性鉴定不稳定等缺点。中国专利CN 200910094174 "一种烟草青枯病抗性的苗期鉴定方法"采用漂浮池恒温水培接种鉴定方法， 具有发病迅速、结果重复性好、结果可靠性高等优点，但是这个方法操作复杂，时间周期相 对还是较长，需要一个月的时间。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题：针对现有技术中存在的抗性鉴定不稳定、鉴定周期长、 受地力、季节的影响较大等问题，本发明提供了一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法，具 有鉴定周期短、不受季节限和鉴定结果稳定等优点。
[0004] 本发明采用的技术方案：幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法，包括以下步骤： (1) 育苗：将保水剂与珍珠岩按2 :1的比例混均，消毒后装入6孔细胞培养板，将烟草 种子播种在细胞培养板上，每个品种各播种到一个孔中，10?20粒/孔，放在无菌培养室中 培养，温度环境25°C、每天光照16小时、光照强度4000勒克斯、相对温度70?80%，出苗后， 每个孔中均匀的留苗5株，用烟草育苗专用肥配制营养液，使其中氮肥浓度达到lOOppm，追 施到培养板中； (2) 青枯菌悬浮液的制备：将20°C下保存于无菌水中的青枯菌，在肉汁培养基平板上 划线，培养于28?30°C下，24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28°C 24h后，再移至肉汁斜 面，在28°C培养24h后用无菌水稀释成108cfu/ml，即成所需要的接菌浓度； (3) 接种：小苗长至两片真叶时，将青枯菌悬浮液用移液枪接种到细胞培养板的每个孔 中，每孔接种lml，15天后调查记录。
[0005] 记载方法执行国家标准"烟草病虫害分级及调查方法（GB/T 23222-2008)"。病情 指数（D)计算公式： D= Σ (各级病株数X该病级数）X 100/ (调查总株数X最高级数） 病害严重度分级标准按国家标准GB/T 23224-2008执行，抗性划分为6个级别：高抗 或免疫（I):病指为〇 ;抗病（R):抗病（R)冲抗（MR):病指为20. 1?40冲感（MS):病指为 40. 1?60 ;感（S):病指为60. 1?80 ;高感（HS):病指为80. 1?100。
[0006] 本发明与现有技术相对具有以下有益效果： (1)鉴定周期更短，25天小苗即可用于鉴定，相比其它现有技术的鉴定周期短； (2)以细胞培养板为载体，在室内恒定环境下育苗鉴定，不受季节限制，试验稳定性 强； (3 )使用无菌苗，不受其它微生物影响，鉴定结果稳定。
【具体实施方式】 [0007] 实施例1 1.材料与方法 1. 1试验材料 对12个烟草品种进行青枯病抗性鉴定。D101、长脖黄、大虎耳、--448Α、红花大金元、 1(326、南江3号、云烟85、岩烟97、1(346、1?17、中烟100 1. 2试验方法 将保水剂与珍珠岩按2 :1的比例混均，消毒后装入6孔细胞培养板，将烟草种子播种在 细胞培养板上。将试验的12个品种分别播种到一个孔中，10?20粒/孔。试验设4个重 复。将播种后的细胞培养板放在无菌培养室中培养，温度环境25°C、每天光照16小时、光照 强度4000勒克斯（lux)、相对温度70?80%。出苗后，每个孔中均匀的留苗5株。小苗长 至两片真叶时（25?30天)，将青枯菌悬浮液用移液枪接种到细胞培养板的每个孔中，每孔 接种lml。15天后调查记录。
[0008] 青枯菌悬浮液的制作： 将20°C下保存于无菌水中的青枯菌，在肉汁培养基平板上划线，培养于28~30°C下， 24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28°C 24h后，再移至肉汁斜面，在28°C培养24h后用 无菌水稀释成l〇8cfu/ml，即成所需要的接菌浓度。
[0009] 记载方法执行国家标准"烟草病虫害分级及调查方法（GB/T 23222-2008)"。病情 指数（D)计算公式： D= Σ (各级病株数X该病级数）X 100/ (调查总株数X最高级数） 病害严重度分级标准按国家标准GB/T 23224-2008执行，抗性划分为6个级别： 表1 :国家标准抗性划分表
【权利要求】
1. 一种幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法，其特征在于：包括以下步骤： (1) 育苗：将保水剂与珍珠岩按2 :1的比例混均，消毒后装入6孔细胞培养板，将烟草 种子播种在细胞培养板上，每个品种各播种到一个孔中，10?20粒/孔，放在无菌培养室中 培养，出苗后，每个孔中均匀的留苗5株，用烟草育苗专用肥配制营养液，使其中氮肥浓度 达到lOOppm，追施到培养板中； (2) 青枯菌悬浮液的制备：将20°C下保存于无菌水中的青枯菌，在肉汁培养基平板上 划线，培养于28?30°C下，24h后挑取典型菌落移置于肉汁斜面，28°C，24h后，再移至肉汁斜 面，在28°C培养24h后用无菌水稀释成10 8 cfu/ml，即成所需要的接菌浓度； (3) 接种：小苗长至两片真叶时，将青枯菌悬浮液用移液枪接种到细胞培养板的每个孔 中，每孔接种lml，15天后调查记录； (4) 记载方法执行国家标准：GB/T 23222-2008,烟草病虫害分级及调查方法。
2. 根据权利要求1所述的幼苗期鉴定烟草青枯病抗性的方法，其特征在于：无菌培养 室的培养条件为温度环境25°C、每天光照16小时、光照强度40001UX、相对温度70?80%。
【文档编号】A01G7/00GK104152532SQ201410385968
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年8月7日 优先权日:2014年8月7日
【发明者】王仁刚, 任学良, 林世锋, 谢升东, 王轶 申请人:贵州省烟草科学研究院