一种皱叶青藓的快速繁殖方法与流程

技术特征：

1.一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于该方法包括下述步骤：配子体和孢子囊消毒后，接种于BCD培养基中，在一定的培养条件下培养，然后进行原丝体的继代和扩大，记录生长情况和生物量。

2.如权利要求1所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于所述的配子体和孢子囊消毒是野外采集皱叶青藓茎叶配子体和孢子囊，无菌水浸泡5小时，配子体冲洗干净后剪成1厘米小段，在直径5厘米的无菌小培养皿中1.5％次氯酸钠消毒1分钟，无菌水清洗5遍后打磨粉碎接种于BCD培养基，同时孢子囊置于1.5ml离心管消毒5分钟，用镊子碾碎后接种于BCD培养基。

3.如权利要求1所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于所述的接种是采用匀浆仪进行皱叶青藓的机械打磨，1g植物材料混合12ml无菌水粉碎后转移2ml接种于6皿培养基，置于16h长日照培养箱，匀浆仪采用10s/次，3次/材料打磨参数进行材料打磨与继代快繁。

4.如权利要求1所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于培养基设置是利用BCD基础培养基作为背景培养基，所述BCD基础培养基配方为：MgSO₄.7H₂O 1μM，KH₂PO₄ 18.4μM，KNO₃ 10μM，FeSO₄.7H2O 45μM；CuSO₄.5H₂O 0.22μM，H₃BO₃ 10μM，CoCl₂.6H₂O 0.23μM，Na₂MoO₄.2H₂O 0.1μM，ZnSO₄.7H₂O 0.19μM，MnCl₂.4H₂O 2μM，KI 0.17μM，酒石酸铵5mM，琼脂0.8％，121℃，20min灭菌，平板培养基中添加3％phytogel。

5.如权利要求1所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于所述的培养是待配子体和孢子囊消毒后，配子体接种于BCD培养基，孢子囊用镊子碾碎后接种于BCD培养基中培养，经过16小时长日照培养2周，配子体和孢子长出新原丝体后，经机械打磨粉碎后均匀接种于BCD培养基平板，培养一周得大量繁殖的原丝体，一个月得成熟配子体。

6.如权利要求1所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于在培养期间设置三种温度和光强梯度的培养条件，三种不同温度梯度为：18℃，23℃，28℃；三种不同光强梯度为：40μmol photons m^-2s^-1，80μmol photons m^-2s^-1，120μmol photons m^-2s^-1。

7.如权利要求1或4所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于所述的培养期间设置培养条件为温度23℃，80μmol photons m^-2s^-1光强。

8.如权利要求1或4所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于所述的皱叶青藓原丝体和配子体生长状态观测采用光学显微镜及带荧光通道的显微镜进行不同放大倍数下的原丝体和配子体生长状态观测，并每天拍照记录，对比分支及生长状态。

9.如权利要求1或4所述的一种皱叶青藓的快速繁殖方法，其特征在于所述的记录记录生长情况和生物量采用收集9种培养条件下，每一种不少于5皿材料，测量生物量，用student’s t-test统计分析。