本发明属于植物无性繁殖技术领域，涉及樟树组织培养技术，尤其是涉及一种桉叶油素型油樟树芽器官组培繁殖方法。
背景技术：
桉叶油（cineole,C10H18O）素型油樟是樟科樟树属樟树类的一种化学型樟树（Cinnamomum camphora (L.)Presl）又名香樟，为国家Ⅱ级保护植物，主要分布于国内的江西、湖南、广东、福建、海南、广西、四川、台湾等地，国外的越南、韩国及日本也有分布。生长于丘陵及低山地带。是一种集材用、油用、风景园林等于一体的多用途优良树种。桉叶油素为无色透明具挥发性油状液体，具有樟脑气息和辛辣凉味，主要存在于桉树和油樟等芳香植物的挥发油中，已广泛用于香料、食品、医药、化工和国防等各领域。油樟挥发油中的桉叶油素含量达585.5g/kg，比从桉树枝叶中提取的桉叶油素香气更纯郁，被称为“中国桉叶油”，已畅销日本、德国、法国、美国等50多个国家和地区，其绿色原生态天然香料更是+分紧俏，价格一路盘升，市场发展前景看好。桉叶油素从樟树枝叶、树干中提取,并且含量低，需大量伐树，一方面破坏了生态环境，另一方面使资源不断匮乏，不符合国家对自然资源永续利的要求。开发留主干，砍伐油樟树枝叶提取桉叶油素的方法，既可避免掠夺式利用桉叶油素原料资源，又有利于林地水土保持，培育樟树珍贵大径材，资源最大化的利用。
技术实现要素：
本发明的目的是针对桉叶油素型油樟组织培养过程中初代芽褐化或玻璃化严重至死，芽增殖系数低，生长缓慢等问题,提供一种生长效果好、继代芽扩繁快的桉叶油素型油樟芽器官组培芽繁殖方法。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一种桉叶油素型油樟芽器官组培芽繁殖方法，包括外植体选择、外植体处理、初代芽诱导培养、增殖培养和壮芽培养，采集桉叶油素型油樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初代芽诱导培养基中获取初代芽，再将初代芽接种于增殖培养基中经过5-6个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，形成大量高≥2cm健壮的单芽，具体操作步骤如下：
（1）外植体选择：
在至少连续3天晴朗的气候里，采集桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体；
（2）外植体处理：
将外植体置于自来水下冲洗10-15 min，然后去除外植体叶片，将外植体置于体积浓度0.2%次氯酸钠溶液中浸泡10-15min后，用纯净水冲洗外植体4-5次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡15-20min，用纯净水冲洗外植体4-5次后，裁成带至少1个腋芽，1.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内；在无菌条件下，用体积浓度0.15 % HgCl2+30 mg/L VC的混合溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；
（3）初代芽诱导培养：
将步骤（2）得到的外植体接种于初代芽诱导培养基中培养，初代芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于4-8 ℃的低温环境,暗培养8-10 d，再转入温度22-25 ℃,光照强度1000-2000 lux,光照10-12 h/d的条件下培养，培养40-50 d，初代芽萌发、生长；
（4）增殖培养：
将高≥1cm的初代芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养方法为：将接种好的初代芽置于温度25-28℃，光照强度1000-3000 lux，光照12-14 h/d的条件下培养，25-30 d转接一次，循环往复，经5-6个周期的培养，形成丛生芽；
（5）壮芽培养：
将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，置于温度25-28 ℃，光照强度4000-7000 lux，光照12-14 h/d的环境中培养，培养30-35 d，获得大量壮芽。
以上步骤（1）所述的桉叶油素型油樟树的选择方法是：在林分、绿化带或零星分布的樟树中，选择干型通直圆满、树冠枝叶茂盛、生长快、叶片鼻闻樟味浓厚的单株，采其单株叶片回室内进行桉叶油素定量定性分析，叶片叶油得率1.5%以上，桉叶油素含量70 %以上的植株确定为桉叶油素型油樟外植体采集株。
以上所述的初代芽诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 6.0-8.0 mg/L+NAA 2.0-3.0 mg/L+KT 1.0-2.0 mg/L+ZT 1.0-1.5mg/L+ VC 15 mg/L +L-半胱氨酸20mg/L +聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB2 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。
以上所述的增殖培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 3.0-5.0 mg/L+NAA 1.5-2.0 mg/L+ZT 0.1-0.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。
以上所述的壮芽培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 1.5-2.0 mg/L+NAA 0.5-1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。
以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 1650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L。
相对于现有技术，本发明具有的优点和有益效果如下：
1、本发明是在樟树林中选出干型圆满通直，树冠枝叶茂盛，生长迅速，枝叶定量定性分析出油率≥1.5%，叶油中桉叶油素含量等指标符合GB 1886.33-2015要求的樟树单株作为优良单株，选取优良单株当年生嫩枝为组培繁殖材料，建立一种桉叶油素型油樟茎段组培方法；本方法对加快桉叶油素型油樟树优质壮苗的生产，促进国家工艺用材和定向香原料林产业快速发展，调整林业品种结构，改善大面积桉树无性系林造成的脆弱森林生态系统均具有重要意义。
2、本发明以桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮的当年生嫩枝作为外植体，经过初代芽培养基培养，初始芽萌动率80-85%；经过5-6个周期增殖培养，形成丛生芽，芽增殖系数4/30d-6/30d，再将丛生芽接入壮芽培养基中培养30-35 d，每个500ml三角烧瓶形成≥2cm的单芽20-30株，有效芽的出苗量大。
3、本发明对LS基本培养基进行了改良，添加酚类物质的专一性吸附剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP），迅速有效的抑制桉叶油素型油樟组培芽的褐死，同时加入促进芽生长并且粗壮的氨基酸和维生素，使得培养基的营养更加全面，更有效的促使桉叶油素型油樟芽诱导的发生、增殖和壮芽，实现大量增殖，规模化生产壯芽，实现桉叶油素型油樟树的组培芽不断的重复扩繁。
4、本发明操作过程简便，增殖系数4/30d-6/30d，培养周期短，继代芽产量大,并且质量优，增殖系数达到4以上的组培苗产业化技术要求，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步说明。
实施例1：
在林分、绿化带或零星分布的樟树中，选择干型通直圆满、树冠枝叶茂盛、生长快、叶片鼻闻樟味浓厚的单株，采其单株叶片回室内进行桉叶油素定量定性分析，叶片叶油得率1.5%以上，桉叶油素含量70 %以上的植株确定为桉叶油素型油樟外植体采集株。在至少连续3天晴朗的气候里，采集桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体。
将外植体置于自来水下冲洗10min，然后去除外植体叶片，将外植体置于体积浓度0.2%次氯酸钠溶液中浸泡10min后，用纯净水冲洗外植体4-5次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡15min，用纯净水冲洗外植体4-5次后，裁成带至少1个腋芽，1.5-2.0cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内；在无菌条件下，用体积浓度0.15 % HgCl2+30 mg/L VC的混合溶液对外植体浸泡15min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水。
将消毒灭菌后的外植体接种于初代芽诱导培养基中培养，初代芽诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 6.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L+KT 1.0 mg/L+ZT 1.0mg/L+ VC 15 mg/L +L-半胱氨酸20mg/L +聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB2 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。初代芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于4-6 ℃的低温环境,暗培养8 d，再转入温度22-23 ℃,光照强度1000 lux,光照12 h/d的条件下培养，培养50 d，初代芽萌发、生长，初始芽萌动率80%。
将高≥1cm的初代芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 3.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L+ZT 0.1 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。增殖培养方法为：将接种好的初代芽置于温度25-26℃，光照强度1000 lux，光照14 h/d的条件下培养，25 d转接一次，循环往复，经5-6个周期的培养，形成丛生芽，芽增殖系数4/30d。
将经增殖培养得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，壮芽培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 1.5-2.0 mg/L+NAA 0.5-1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。置于温度25-28 ℃，光照强度4000-7000 lux，光照12-14 h/d的环境中培养，培养30-35 d，每个500ml三角烧瓶形成≥2cm的单芽20-30株，有效芽的出苗量大。将经壮芽培养后得到的高≥2cm的单芽插入常规的生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 1650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L。
实施例2：
在林分、绿化带或零星分布的樟树中，选择干型通直圆满、树冠枝叶茂盛、生长快、叶片鼻闻樟味浓厚的单株，采其单株叶片回室内进行桉叶油素定量定性分析，叶片叶油得率1.5%以上，桉叶油素含量70 %以上的植株确定为桉叶油素型油樟外植体采集株。在至少连续3天晴朗的气候里，采集桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体。
将外植体置于自来水下冲洗10min，然后去除外植体叶片，将外植体置于体积浓度0.2%次氯酸钠溶液中浸泡10min后，用纯净水冲洗外植体4-5次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡15min，用纯净水冲洗外植体4-5次后，裁成带至少1个腋芽，2.0cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内；在无菌条件下，用体积浓度0.15 % HgCl2+30 mg/L VC的混合溶液对外植体浸泡15min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水。
将消毒灭菌后的外植体接种于初代芽诱导培养基中培养，初代芽诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 7.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L+KT 1.5 mg/L+ZT 1.0 mg/L+ VC 15 mg/L +L-半胱氨酸20mg/L +聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB2 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。初代芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于5-6 ℃的低温环境,暗培养8 d，再转入温度22-23 ℃,光照强度1000 lux,光照12 h/d的条件下培养，培养40 d，初代芽萌发、生长，初始芽萌动率80%。
将高≥1cm的初代芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 3.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+ZT 0.2 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。增殖培养方法为：将接种好的初代芽置于温度25-26℃，光照强度2000 lux，光照13 h/d的条件下培养，25 d转接一次，循环往复，经5-6个周期的培养，形成丛生芽，芽增殖系数5/30d。
将经增殖培养得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，壮芽培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 1.5mg/L+NAA 1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。置于温度25-26 ℃，光照强度5000 lux，光照13 h/d的环境中培养，培养30d，每个500ml三角烧瓶形成≥2cm的单芽20-30株，有效芽的出苗量大。将经壮芽培养后得到的高≥2cm的单芽插入常规的生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 1650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L。
实施例3：
在林分、绿化带或零星分布的樟树中，选择干型通直圆满、树冠枝叶茂盛、生长快、叶片鼻闻樟味浓厚的单株，采其单株叶片回室内进行桉叶油素定量定性分析，叶片叶油得率1.5%以上，桉叶油素含量70 %以上的植株确定为桉叶油素型油樟外植体采集株。在至少连续3天晴朗的气候里，采集桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体。
将外植体置于自来水下冲洗15min，然后去除外植体叶片，将外植体置于体积浓度0.2%次氯酸钠溶液中浸泡15min后，用纯净水冲洗外植体4-5次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡20min，用纯净水冲洗外植体4-5次后，裁成带至少1个腋芽，2.0-2.5cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内；在无菌条件下，用体积浓度0.15 % HgCl2+30 mg/L VC的混合溶液对外植体浸泡20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水。
将消毒灭菌后的外植体接种于初代芽诱导培养基中培养，初代芽诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 7.5 mg/L+NAA 2.5 mg/L+KT 1.0 mg/L+ZT 1.5 mg/L+ VC 15 mg/L +L-半胱氨酸20mg/L +聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB2 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。初代芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于6-7 ℃的低温环境,暗培养9 d，再转入温度23-24 ℃,光照强度1000 lux,光照12 h/d的条件下培养，培养45 d，初代芽萌发、生长，初始芽萌动率85%。
将高≥1cm的初代芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 4.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L+ZT 0.3 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。增殖培养方法为：将接种好的初代芽置于温度26-27℃，光照强度2000 lux，光照14 h/d的条件下培养，30 d转接一次，循环往复，经5-6个周期的培养，形成丛生芽，芽增殖系数6/30d。
将经增殖培养得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，壮芽培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+VC 10 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。置于温度26-27 ℃，光照强度6000 lux，光照12 h/d的环境中培养，培养30d，每个500ml三角烧瓶形成≥2cm的单芽20-30株，有效芽的出苗量大。将经壮芽培养后得到的高≥2cm的单芽插入常规的生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 1650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L。
实施例4：
在林分、绿化带或零星分布的樟树中，选择干型通直圆满、树冠枝叶茂盛、生长快、叶片鼻闻樟味浓厚的单株，采其单株叶片回室内进行桉叶油素定量定性分析，叶片叶油得率1.5%以上，桉叶油素含量70 %以上的植株确定为桉叶油素型油樟外植体采集株。在至少连续3天晴朗的气候里，采集桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体。
将外植体置于自来水下冲洗15min，然后去除外植体叶片，将外植体置于体积浓度0.2%次氯酸钠溶液中浸泡15min后，用纯净水冲洗外植体4-5次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡20min，用纯净水冲洗外植体4-5次后，裁成带至少1个腋芽，2.5-3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内；在无菌条件下，用体积浓度0.15 % HgCl2+30 mg/L VC的混合溶液对外植体浸泡20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水。
将消毒灭菌后的外植体接种于初代芽诱导培养基中培养，初代芽诱导培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 8.0 mg/L+NAA 3.0 mg/L+KT2.0 mg/L+ZT 1.5mg/L+ VC 15 mg/L +L-半胱氨酸20mg/L +聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB2 15 mg/+琼脂粉3.6 g/L+蔗糖20 g/L。初代芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于7-8 ℃的低温环境,暗培养8 d，再转入温度24-25 ℃,光照强度2000 lux,光照10 h/d的条件下培养，培养50 d，初代芽萌发、生长，初始芽萌动率82%。
将高≥1cm的初代芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 5.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L+ZT 0.5 mg/L+VC 15 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。增殖培养方法为：将接种好的初代芽置于温度27-28℃，光照强度3000 lux，光照12 h/d的条件下培养，30 d转接一次，循环往复，经5-6个周期的培养，形成丛生芽，芽增殖系数4/30d。
将经增殖培养得到的丛生芽进行切割，4-5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，壮芽培养基的配方为：改良LS培养基+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+VC 10 mg/L+VB2 20 mg+L-半胱氨酸 10 mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉 3.6 g/L+蔗糖 30 g/L。置于温度27-28 ℃，光照强度7000 lux，光照12 h/d的环境中培养，培养30 d，每个500ml三角烧瓶形成≥2cm的单芽20-30株，有效芽的出苗量大。将经壮芽培养后得到的高≥2cm的单芽插入常规的生根培养基中诱导生根；余下小芽丛再次接种于增殖培养基中继续增殖，然后再重复壮芽培养，循环往复，获得大量壮芽。
以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3 1650 mg/L+KNO3 1900mg/L+CaCl2·2H2O 400mg/L+MgSO4.·7H2O 370 mg/L+KH2PO4 170 mg/L+H3BO3 6.2 mg/L+MnSO4.·4H2O 22.3 mg/L+ZnSO4·4H2O 8.6 mg/L+KI0.83mg/L+Na2MoO4·H2O 0.25 mg/L+CuSO4.·5H2O 0.025 mg/L+CoCl2·6H2O 0.025 mg/L+FeSO4 27.8 mg/L+NaEDTA 37.0 mg/L+肌醇 100 mg/L+烟酸 0.5 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L+甘氨酸 2 mg/L+盐酸吡哆醇0 .5 mg/L。