一种高效防治百合鳞茎青霉病的方法与流程

本发明涉及有效防治由普通青霉菌Penicilliumcommune引起的百合鳞茎青霉病，筛选防治该病的一种或多种药剂。
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：百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)植物的总称，其性甘、微寒，归肺、心、胃经，具有养阴润肺、清心安神的功效。近年来，随着百合栽植面积的扩大，加之常年连作，在百合贮藏和生长季节，往往有大量种球受真菌侵染，使用通用灭菌剂(如多菌灵)后，通常会产生大量的青霉菌，致使种球腐烂，严重影响了百合种球的质量以及其生长过程中的对其它病原菌的抗性能力，因此对于筛选出高效防治百合贮藏期鳞茎青霉菌的杀菌剂，降低成本，提高种球产量和质量有重要意义。王艳等(2011)对甘肃等6省的百合鳞茎进行带菌检测，结果表明，百合鳞茎携带真菌种类较多且数量较大，其中主要为青霉菌、镰刀菌、黑根霉等。青霉病是引起百合贮藏期主要病害(朱明德，2004)，可以造成百合在成株期和贮藏期鳞茎枯死和腐烂。朱海燕(2012)提出百合鳞茎青霉病病原菌通过百合鳞茎上的伤口侵入，导致受害鳞茎出现褐色病斑，之后长出蓝绿色霉层，逐渐腐烂，并可在鳞茎之间相互传染。张轶(2010)指出在百合鳞茎种植前用1‰克菌丹、百菌清、多菌灵、高锰酸钾等杀虫(菌)剂水溶液浸泡30min，晾干后种植可以防治鳞茎青霉腐烂病。王彩霞等(2006)提出用50mg/L、40℃的醚菌酯对采后百合进行1min浸泡处理可控制百合贮藏期青霉病圆弧青霉菌。青霉菌侵染多发生在生长期或种球采收、包装、运输、贮存过程中。被青霉属侵染的种球表面有蓝绿色霉层，局部腐烂，腐烂部为褐色，形状不规则，凹陷，病斑边缘黑色与健部分界明显，上生青绿色霉层，种球贮藏质量下降，使鳞茎失去价值或使植株生长迟缓(张轶，2010)，而单药剂的长期大量使用，使得病原菌对药剂快速地产生了的适应性，防治作用大大降低，不仅增加了成本，同时还对生态环境及生物体造成了严重的破坏和威胁。本专利对贮藏卷丹分离出致病菌普通青霉菌，而国外未见有对该种病菌药剂防治的报道，因此本专利采用优选单药剂复配的方法，筛选出广谱、高效的杀菌剂复配组分，对于防治引起百合种球基盘腐烂的普通青霉菌，降低病原菌的单药剂耐受性和抗药性具有重要的实用价值。主要参考文献：1)王艳，杜弢，连中学，陈红刚，蒋海波，王惠珍，张延红，朱田田.百合鳞茎带真菌检测[J].甘肃中医学院学报，2011，28(2)：48-51.2)朱明德，潘其云，邓建玲，唐祥宁.百合贮藏病害及其防腐措施的研究[J].上海农业科技，2004，(2).3)张轶.百合常见病虫鼠害的防治[J].青海科技，2010，(4).4)朱海燕.龙牙百合鳞茎腐烂病病原鉴定及室内药剂毒力测定[D].湖南农业大学：湖南农业大学，012.5)王彩霞，毕阳，葛永红.醚菌酯对百合鳞茎青霉病的控制[J].甘肃农业大学学报，2006，(5).6)赵宏.唐菖蒲球茎腐烂病原鉴定及其致病力[J].甘肃农业大学学报，1997，(2).技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种有效防治百合鳞茎青霉病的方法。通过真菌生长速率法进行药剂的筛选，确定咪鲜胺及其与咪鲜胺复配药剂能够有效阻止百合贮藏青霉病病原菌的菌丝生长，遏制其孢子传播，对防治该病的发生具有重要实用价值和应用生产价值。为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：1)采用组织分离法从卷丹鳞片病健交界处分离、纯化病原菌，鳞片切成5×5mm大小，经75％酒精处理1min，无菌水冲洗5次，每次30s。2)用无菌针挑取真菌菌丝置于显微镜下观察其形态，并显微拍照。3)制作含药平板：各杀菌剂分别设定5个浓度梯度，配制成500、1000、2000、4000、8000稀释倍数的含药PDA平板，混合均匀。封口后在紫外灯下照射1h左右，防止细菌污染。4)供试菌株在PDA培养基上生长5d后，无菌条件下，从菌落边缘生长旺盛区用打孔器(d＝8mm)打取同龄菌饼，用消毒接菌针将菌饼放入预先制备好的上述含药PDA平板上，封口膜封口。置于25℃培养箱中培养，倒置。5天后，用十字交叉法测量菌落直径，计算抑制生长率。附图说明图1病原菌在PDA培养基上生长情况；图2显微镜下病原菌分生孢子形态特征；图3Sorbonne鳞片接种后症状；图4单药剂对百合鳞茎贮藏期青霉病病原菌菌丝生长抑制的效果(图4-1为苯菌灵，图4-2为醚菌酯，图4-3为咪鲜胺，图4-4为异菌脲)；对照：CK；处理：单药剂稀释倍数500，1000，2000，4000，8000图5复配药剂对菌丝生长抑制的效果(图5-1为苯菌·咪鲜胺，图5-2为咪鲜·醚菌酯，图5-3为咪鲜·异菌脲，图5-4为苯菌·异菌脲，图5-5为醚菌·苯菌灵，图5-6为异菌·醚菌酯)。对照：CK；处理：复配药剂稀释倍数250，500，1000，2000，4000，8000具体实施方式有效防治百合鳞茎普通青霉病的方法，其步骤是：1病原菌的分离、纯化采用常规组织分离法分离卷丹腐烂种球鳞片病健交界处。鳞片用蒸馏水冲洗5min，在超净工作台上将鳞片置于75％酒精浸泡震荡1min，用无菌水冲洗5次，每次30s，切成5×5mm小方块，置于PDA培养基上，25℃，黑暗培养。5天后，用接种针将真菌菌落边缘菌丝挑取于PDA培养基，25℃，黑暗培养。重复上一步骤，直至PDA培养基上生长出单一种形态菌落。2病原菌形态学鉴定(1)供试菌株菌落形态观察将分离纯化后的各菌株接种于PDA平板上，25℃黑暗条件下培养，5d后观察各菌株菌落形态、颜色、菌丝生长状况等性状，拍照记录。(2)试菌株微观显微特征观察真菌进行液体培养，用无菌针挑取置于显微镜下观察其形态，并显微拍照。3致病力测定根据柯赫氏法则需要对得到的病原真菌进行回接，进行致病力测定。鳞片用75％酒精表面消毒后，无菌水冲洗5遍，用灭菌枪头在鳞片刺孔，接种普通青霉菌菌液，浸20min，对照为用无菌枪头刺孔的鳞茎置于无菌水中20min，每个处理重复三次，置于25℃，黑暗保湿培养。每天记录发病情况，拍照。对接种发病的鳞茎进行分离和鉴定。4药剂筛选采用菌丝生长速率法测定供试药剂的抑菌效果。杀菌剂成分及厂家一览表农药名称生产厂家50％苯菌灵可湿性粉剂江苏蓝丰生物化工股份有限公司50％醚菌酯水分散粒剂(翠贝)德国巴斯夫50％咪鲜胺锰盐可湿性粉剂(使百功)江苏辉丰农化股份有限公司50％异菌脲可湿性粉剂(大扑因)东莞市瑞德丰生物科技有限公司杀菌剂不同稀释倍数相应抑制生长率当前第1页1 2 3