本发明涉及的是动物繁殖技术领域，具体涉及一种猪精液常温液态负压保存装置及方法。
背景技术：
近年，随着养猪业的不断发展，猪的人工授精技术也得到了迅猛的发展，但由于人工授精所需的精液目前还是主要以常温液态保存为主，猪精液液态保存的质量及时效成为制约猪人工授精技术的关键问题。目前，猪常温液态保存的精液存在保存时间短(一般保存3-7天)、保存后精子活力低、畸形率高等问题。有研究人员试图对猪精液稀释液成分配方进行改良以期延长猪精液保存的时间和提高精液质量，但效果不理想。所以现在急需一种延长猪精液液态保存的时间和提高精液质量的装置和方法。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决现有技术中，猪精液常温液态保存时间短，精子活力低质量差的问题，进而提供一种猪精液常温液态负压保存装置及方法。
本发明的一种猪精液常温液态保存装置，包括密闭容器1、橡胶塞2、连接管4、真空泵5和精液保存管6，密闭容器1上部设有橡胶塞2，连接管4的一端穿过橡胶塞2伸入密闭容器1内部，另一端连接真空泵5，精液保存管6置于密闭容器1内底部。
进一步地，连接管4上设有阀门3。
本发明还涉及一种利用上述装置保存猪精液的方法，包括如下步骤：
步骤一、将新鲜猪精液经离心机去除上层精浆，然后用稀释液对其进行稀释，将浓度调配成每毫升1×108～5×108个，再检测其中的精子活力，达标后置于精液保存管6中；
步骤二、将精液保存管6放入密闭容器1中，盖上带阀门的橡胶塞2，并将连接管4与带真空泵5连接，启动真空泵5将密闭容器1中的空气抽出，使气压降为-0.04MPa～-0.08MPa，真空泵5的开关，将连接管4与密闭容器1分离；
步骤三、将密闭容器1放入16～18℃保温箱中进行保存。
本发明具有如下有益效果：本发明利用本装置提供负压的环境进行猪精液常温液态保存，可以将保存时间延长到9-13天，精子和精液质量均得到显著提高，而且本发明操作简单、效率高，使用方便，适合猪精液常温液体保存得推广应用。
附图说明
图1是本发明猪精液常温液态保存装置的结构示意图。
具体说明如下：
密闭容器1、橡胶塞2、阀门3、连接管4、真空泵5、精液保存管6。
具体实施方式
本发明涉及一种猪精液常温液态保存装置，该装置包括密闭容器1、橡胶塞2、连接管4和真空泵5，密闭容器1上部设有橡胶塞2，连接管4的一端穿过橡胶塞2伸入密闭容器1内部，另一端连接真空泵5。精液保存管6置于密闭容器1底部，连接管4上设有阀门3。
上述装置主要用于猪精液的保存，具体的保存方法包括如下步骤：
步骤一、将新鲜猪精液经离心机去除上层精浆，然后用稀释液对其进行稀释，将浓度调配成每毫升1×108～5×108个，再检测其中的精子活力，达标后置于精液保存管6中；所述精液保存管6加盖，但不密封。
步骤二、将精液保存管6放入密闭容器1中，盖上带阀门的橡胶塞2，并将连接管4与带真空泵5连接，启动真空泵5将密闭容器1中的空气抽出，使气压降为-0.04MPa～-0.08MPa，真空泵5的开关，将连接管4与密闭容器1分离；
步骤三、将密闭容器1放入16～18℃保温箱中进行保存。
优选地，步骤一中，离心机离心工作时的转速为1800r/分钟，离心时间为5分钟，精液保存管6的容积为15～80ml。稀释液为Modena稀释液，其中含4mg/ml的牛血清白蛋白。
实施例1(实验组)
本实施例中保存猪精液的方法，包括如下步骤：
步骤一、将新鲜猪精液经离心机去除上层精浆，离心机离心工作时的转速为1800r/分钟，离心时间为5分钟。然后用Modena稀释液对其进行稀释，将浓度调配成每毫升1×108～5×108个，再检测其中的精子活力，达标后取50毫升置于精液保存管6中；
步骤二、将精液保存管6放入密闭容器1中，盖上带阀门的橡胶塞2，并将连接管4与带真空表的真空泵5连接；启动真空泵5，将密闭容器1中的空气抽出，使气压降为-0.04MPa，关闭阀门3和真空泵5的开关，将连接管4与密闭容器1分离；
步骤三、将密闭容器1放入17℃猪精液保温箱中进行保存即得到所需猪精液。
实施例2(对照组)
本实施例中保存猪精液的方法，包括如下步骤：
步骤一、将新鲜猪精液经离心机去除上层精浆，离心机离心工作时的转速为1800r/分钟，离心时间为5分钟。然后用Modena稀释液对其进行稀释，将浓度调配成每毫升1×108个，再检测其中的精子活力，达标后取50毫升置于精液保存管6中；
步骤二、将精液保存管6放入17℃猪精液保温箱中进行保存即得到所需猪精液。
对比试验
针对实施例1和实施例2中对猪精液的不同保存方法，分别进行试验操作。在不同的保存天数下，分别测定了猪精液的精子活力、畸形率、pH值、活性氧和总抗氧化能力的数值，数据如下表1至5所示(表1至5中，同列数据肩标字母不同差异显著，P<0.05)：
表1.不同保存方式对保存不同时间的猪精子活力的影响
表2.不同保存方式对保存不同时间的猪精子畸形率影响
表3.不同保存方式对保存不同时间的猪精液pH的影响
表4.不同保存方式对保存不同时间的猪精液活性氧(ROS)的影响
表5.不同保存方式对保存不同时间的猪精子总抗氧化能力(T-AOC)(μmol/107sperm)的影响
分析：
从以上数据可以看出，随时间推移常温负压下保存的猪精液，其精子活力逐渐优于常温常压下保存的猪精液，而畸形率较后者明显降低。pH值和总抗氧化数值优于常温常压条件下的数值，活性氧数值低于后者。主要原因是负压减少了氧气含量，使精子处于休眠的状态，其代谢减慢后，延长了保存时间。精子呼吸产生CO2，使得精液的pH值，随着保存时间的延长逐渐下降。弱酸性环境可以抑制精子活动和代谢，负压能够减缓PH的下降。从精子的抗氧化能力方面来说，负压保存要比正常压强下的精子的抗氧化性强，可以看出从3天后有显著差异。
通过对上述数据的分析和原理阐释，可以看出本发明利用真空泵提供负压的环境，再利用负压自吸的原理，将猪精液常温液态负压保存，可以将保存时间延长(9-13天)，精子和精液质量均得到显著提高。
上述内容仅为本发明的较佳实施例，并非用于限制本发明的实施方案，本领域普通技术人员根据本发明的主要构思和精神，可以十分方便地进行相应的变通或修改，故本发明的保护范围应以权利要求书所要求的保护范围为准。