一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法与流程

文档序号:22964800发布日期:2020-11-19 21:31阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)花蕾采集和预处理:采集尚未开放的木芙蓉花蕾,镜检小孢子鉴定发育时期,筛选出单核靠边期所对应的花蕾,将其置于4℃冰箱中进行低温预处理;

(2)花蕾的消毒:用自来水冲洗低温预处理后的花蕾,用4%的次氯酸钠浸泡20min,将浸泡完的花蕾在超净工作台中用无菌水冲洗干净,再用75%酒精冲洗20~30s,然后用无菌水反复冲洗干净,最后用无菌滤纸吸干多余的水分;

(3)花药预处理:用无菌镊子剥开花蕾取出花药,去除花丝,放入浓度为30%的富氢水中预处理24h,期间第12h更换一次新鲜的富氢水;

(4)愈伤组织的诱导:将上述花药接种于诱导培养基上,轻压花药使其与培养基充分接触,用封口膜封好,置于人工气候室中进行暗培养,诱导愈伤组织形成。

2.根据权利要求1所述的一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,所述步骤(4)中,诱导培养基成分为:nh4no31360-1550mg/l,kno31780-2000mg/l,kh2po4180-200mg/l,cacl2·2h2o510-530mg/l,mgso4·7h2o205-225mg/l,mnso4·4h2o10.3-13.5mg/l,znso4·7h2o7.2-9.0mg/l,h3bo35.6-7.4mg/l,ki0.7-0.8mg/l,na2moo4·2h2o0.2-0.3mg/l,cuso4·5h2o0.01-0.02mg/l,cocl2·6h2o0.02-0.03mg/l,乳酸亚铁26.5-29.5mg/l,肌醇90-110mg/l,甘氨酸2.0-3.0mg/l,脯氨酸25-35mg/l,水解酪蛋白200-250mg/l,维生素b13.5-4.5mg/l,维生素b60.6-0.8mg/l,烟酰胺1.1-1.5mg/l,d-生物素0.03-0.05mg/l,tdz0.04-0.06mg/l,6-ba0.9-1.1mg/l,2,4-d1.8-2.2mg/l,亚硝基胍2.5-3.5mg/l,秋葵热浸液30-70ml/l,na2seo32.0-3.0mg/l,蔗糖45-55g/l,琼脂6-8g/l,ph值为5.6-6.0。

3.根据权利要求1所述的一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,所述步骤(1)中,镜检小孢子的方法:将花药从花蕾中剥出,置于载玻片上,滴加醋酸洋红染色液,用镊子捣碎花药,挤出其中的小孢子后,去除残渣,然后盖上载玻片置于显微镜下观察小孢子的发育时期。

4.根据权利要求1所述的一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,所述步骤(1)中,低温预处理的时间为24~48h。

5.根据权利要求1所述的一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,所述步骤(3)中,富氢水的制备方法为:由氢气发生器制备纯度达99.99%(v/v)的氢气,并以150~200ml/min的速率持续通入1l蒸馏水中鼓泡30min,制备出饱和的富氢水,之后立即用蒸馏水稀释到所需浓度。

6.根据权利要求1所述的一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,所述步骤(4)中,培养温度为:白天26±1℃,晚上23±1℃。

7.根据权利要求2所述的一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,其特征在于,所述诱导培养基成分中秋葵热浸液的制备方法为:称取新鲜秋葵200g,加入600ml蒸馏水加热煮沸,冷却后用双层纱布过滤,取滤液备用。


技术总结
本发明公开了一种木芙蓉花药培养愈伤组织诱导方法,属于生物技术领域。方法包括采集尚未开放的木芙蓉花蕾,镜检后筛选出单核靠边期所对应的花蕾,置于4℃低温预处理24~48h;将花蕾消毒后取出花药,放入浓度为30%的富氢水中预处理24h,期间第12h更换一次新鲜的富氢水;将花药接种于本发明的诱导培养基上,置于人工气候室中进行暗培养,诱导愈伤组织形成。利用本发明的方法对木芙蓉花药进行愈伤组织诱导培养,愈伤组织诱导率最高达26.2%。本发明首次开展了木芙蓉花药培养的研究,为建立完整的木芙蓉花药培养体系以及开展木芙蓉花培育种奠定基础。

技术研发人员:金宁佳;王金鑫
受保护的技术使用者:连云港秀景园林绿化工程有限公司
技术研发日:2020.09.07
技术公布日:2020.11.17
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