专利名称：地涌金莲的组培快繁技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及植物的组织培养和快速繁殖技术。
地涌金莲[Musella lasiocarpa (Fr.)C.Y.Wu ex H.W.Li]是芭蕉科(Musaceare)地涌金莲属的多年生单种属植物。它特产云南，自然分布于滇中至滇西海拔1500-2500米的山间坡地或被人们用于庭院栽培。地涌金莲株高60-120厘米，叶片长椭圆形，粉绿色；直立花序着生于假茎上，密集成球穗状，花序由金黄色的苞片层层包裹无数黄色或淡黄色的小花而成，苞片成熟后反转，开放成莲花形。每年4-7月间，一丛丛托着“金色莲花”的大型草本—地涌金莲奇迹般从地里涌现出来，硕大、美丽、端庄，倍受人们的爱恋，亲昵地称之为“地莲花”、“地金莲”、“地涌莲”或“地母金莲”等，实为一种难得的重要园艺观赏植物。盛开的地涌金莲切下置于桌上，可观赏1-2周；若带假茎切下水培，可观赏2-3月，是大型切花的珍品。目前，地涌金莲作为名特花卉，已引起国内外植物界的广泛关注。此外，地涌金莲的花可入药，有收敛止血的功效，茎汁可解毒；假茎还是优良的猪饲料。栽培中，地涌金莲一直用分株繁殖，一株母株一年最多只能产生8-10个小植株，繁殖系数很低。许多园艺学工作者做过大量的种子繁殖的研究工作，但一直没有摸清种子不能萌发的原因。因此，通过现代生物技术，用植物组织培养方法来进行无性繁殖，是大量繁殖地涌金莲的最可行的方法。尽管国内外已作过大量的地涌金莲的组织培养工作，迄今为止也未见成功的报道，更谈不上实现工业化生产的目标。
本发明的目的是针对现有技术还未有地涌金莲的组织培养快速繁殖技术，提供一种地涌金莲的组织培养和快速繁殖技术。该技术解决了地涌金莲快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节，达到了繁殖系数高速度快、技术稳定、实现工业化生产的目的。
为了实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案。
地涌金莲的组培快繁技术，包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养，移栽等步骤，具体地，选取吸芽为培养材料，选择MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l为诱导培养基，在MS+BA2mg/l+IAA0.5mg/l和MS+BA3mg/l+IAA0.5mg/l连续培养5-8代后，调整培养基为MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l，培养1-2代后，再转入BA2-3mg/l的MS培养基中生长；选择MS+IAA0.25mg/l+IBA0.25mg/l为生根培养基。
上述技术中，可优选完整的吸芽为培养材料，经肥皂和自来水洗净，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8-10分钟后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分，接种于诱导培养基中。
上述技术中诱导、增殖、生根步骤的PH值均为5.8，培养温度25℃±3，每天光照时间12小时，光照强度1000LX。
本发明还提供了另一种地涌金莲的组培快繁技术，包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养步骤，选取吸芽为培养材料，选择MS+BA10mg/l+IAA0.5mg/l为诱导培养基，在MS+BA2mg/l+IAA0.5mg/l和MS+BA3mg/l+IAA0.5mg/l连续培养5-8代后，调整培养基为MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l，培养1-2代后，再转入BA2-3mg/l的MS培养基中生长；选择MS+IAA0.25mg/l+IBA0.25mg/l为生根培养基。
上述技术中，可优选完整的吸芽为培养材料，经肥皂和自来水洗净，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8-10分钟后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分，接种于诱导培养基中。
上述技术中，诱导、增殖、生根步骤的PH值均为5.8，培养温度25℃±3，每天光照时间12小时，光照强度1000LX。
本发明的优益性体现在提供了地涌金莲的植物组织培养和快速繁殖技术，摸索出了快速繁殖及其稳定生根等重要环节的关键性技术，一个外植体一年就可复制出一百万株无性后代，为该植物的商品化生产提供了一套切实可行的生产技术路线，实现了地涌金莲的工业化生产目的。
为了更好地说明本发明实质性内容，下面给出本发明的实施例，但本发明的内容并不局限于此。
实施例1一、培养基及培养条件诱导、增殖、生根基本培养基均为MS培养基，并附加不同种类和不同浓度的6-BA、IAA、IBA；PH值均为5.8。培养温度25℃±3，每天光照时间12小时，光照强度1000LX。
二、外植体的选取与处理第一种选取完整的吸芽，用自来水冲洗后，剥去叶鞘，留下3-5cm大小的小芽。
第二种取地涌金莲花序顶端，剥去苞片及花朵，留下花序轴。
第三种幼嫩种子及成熟种子。
以上材料经肥皂和自来水洗净，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8-10分钟后用无菌水冲洗五次，切去外植体变色的部分，接种于诱导培养基中。结果见表1所示，吸芽为最佳培养材料。
表1不同材料在相同培养基上的不同表现
三、诱导培养。
在MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l的培养基中，从小芽基部长出4个丛芽，无愈伤组织，分泌物深兰色。分别把这4个芽接种于不同的诱导培养基(1)MS+BA1mg/l+IAA0.5mg/l；(2)MS+BA2mg/l+IAA0.5mg/l；(3)MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l；(4)MS+BA10mg/l+IAA0.5mg/l.两个月后结果如下(1)、(2)植株健壮，色绿，无增殖反应，(3)有4个吸芽冒出，生长正常。(4)植株基部叶片膨大，有许多颗粒状的小突起，有的小突起已经形成芽，芽的数量达10个，叶子黄绿色，质地脆。由此可见，诱导培养以(3)、(4)为宜。
四、增殖培养在诱导培养基(3)或(4)中连续培养2-3代，启动后即可转入稳定的分化增殖培养基中，让其产生大量的健壮苗，在这一过程中激素对其影响较大，见表2所示。从表2可以看出，BA是影响丛芽产生的主导因子。在BA2-3中连续培养3-5代，其增殖倍数均可达5倍，且生长健壮，均为有效苗。5-8代后，其增殖率下降20％，这时再次调节6-BA浓度至5mg/l，培养1-2代后，再转入BA2-3mg/l的MS培养基中生长。如此周而复始地循环，一年一株地涌金莲可克隆出100万株小苗。
表2不同激素浓度及其配比对地涌金莲的影响(60天统计结果)
※有效芽指的是植株生长正常，健壮，叶子伸展，色绿。
五、生根培养当丛芽长至2-3cm时，即可切下转入下列生根培养基中，15天后开始生根，30天后结果如表3所示。综合性状以IAA0.25mg/l+IBA0.25mg/l最好。
表3不同生长素对地涌金莲生根的影响
六、移栽当根长至1-2cm(转入生根培养基20天左右)，置于室外适应1-2天后移栽，土壤要求疏松透气，栽后加盖遮阴网。一周后去掉遮阴网，一个月后成活率达85％。
权利要求
1.地涌金莲的组培快繁技术，依次包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养，移栽步骤，其特征是选取吸芽为培养材料，选择MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l为诱导培养基，在MS+BA2mg/l+IAA0.5mg/l和MS+BA3mg/l+IAA0.5mg/l连续培养5-8代后，调整培养基为MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l，培养1-2代后，再转入BA2-3mg/l的MS培养基中生长；选择MS+IAA0.25mg/l+IBA0.25mg/l为生根培养基。
2.根据权利要求1所述的技术，其特征是优选完整的吸芽为培养材料，经肥皂和自来水洗净，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8-10分钟后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分，接种于诱导培养基中。
3.根据权利要求1所述的技术，其特征是诱导、增殖、生根步骤的PH值均为5.8，培养温度25℃±3，每天光照时间12小时，光照强度1000LX。
4.地涌金莲的组培快繁技术，依次包括外植体的选取与处理，诱导培养，增殖培养，生根培养步骤，其特征是选取吸芽为培养材料，选择MS+BA10mg/l+IAA0.5mg/l为诱导培养基，在MS+BA2mg/l+IAA0.5mg/l和MS+BA3mg/l+IAA0.5mg/l连续培养5-8代后，调整培养基为MS+BA5mg/l+IAA0.5mg/l，培养1-2代后，再转入BA2-3mg/l的MS培养基中生长；选择MS+IAA0.25mg/l+IBA0.25mg/l为生根培养基。
5.根据权利要求4所述的技术，其特征是优选完整的吸芽为培养材料，经肥皂和自来水洗净，置于75％酒精中处理30秒，然后在经0.1％的升汞(Hgcl)消毒8-10分钟后用无菌水冲洗，切去外植体变色的部分，接种于诱导培养基中。
6.根据权利要求4所述的技术，其特征是诱导、增殖、生根步骤的PH值均为5.8，培养温度25℃±3，每天光照时间12小时，光照强度1000LX。
全文摘要
提供一种地涌金莲的组织培养和快速繁殖技术。包括外植体的选取与处理,诱导培养,增殖培养,生根培养,移栽等步骤。该技术解决了地涌金莲快速繁殖及其稳定生根的重要技术环节,达到了繁殖系数高速度快、技术稳定、实现工业化生产的目的。
文档编号A01H5/00GK1244582SQ9911023
公开日2000年2月16日 申请日期1999年7月6日 优先权日1999年7月6日
发明者罗桂芬, 胡虹, 段金玉, 许琨, 严宁, 陈梅英 申请人:中国科学院昆明植物研究所