得 将咪唑乙烟酸敏感水稻歼1和咪唑乙烟酸不敏感的水稻津稻263播于田间，盛花期时 对津稻263去雄，并用歼1的花粉进行杂交，收获Fl代种子。对Fl代种子进行种植，混收 F2代种子；单株种植F2代植株，单株收获F3代种子。
[0022] (2)浸种催芽 将上述100粒F3代收获的种子装在硫酸纸袋中，对不同的单株做好标记，浸泡在32°C的温水中，连同盛放容器置于光照培养箱中32°C保温，每天早中晚换水三次，待3天露白后 播种。
[0023] (3)培养基准备 1)配制除草剂母液：将除草剂普施特稀释十倍，即2ml的普施特加水18ml。
[0024] 2)配制0. 5%(w/w)的琼脂糖平板：将2L水倒入电磁锅中，加入IOg琼脂糖，搅拌均 匀，煮沸直至琼脂完全溶解，待温度降低到70°C后分装到三角瓶中，每瓶500ml，加入500ul 稀释10倍的除草剂咪唑乙烟酸母液，最终浓度为〇.lml/L，摇匀后倒平皿，直径为9cm， 30ml/皿，培养基凝固后即可使用。
[0025] (4)播种 在培养皿上标记所播单株编号，选取露白的种子55粒，均勻的播种在培养基上，同 时播种抗和不抗的品种各两粒作为正负对照，并划线分隔做好标记，为防止水分散失，将 10-12个的培养皿叠到一起并用保鲜膜包裹，最后放到32°C连续光照的培养箱中。
[0026] (5)观察统计 待3-4天后进行观察统计，与抗和不抗的正负对照品种进行比较，统计出抗除草剂的 种子数与不抗除草剂的种子数。
[0027]结果： 本实例要对单株进行纯合和杂合的鉴定，符合孟德尔遗传定律，即纯合株的种子全部 是抗性或不抗的种子（图IA和1B)，而杂合株的种子符合抗与不抗的种子数比约为3:1 (图 1C)。
[0028] 实施例2 采用琼脂糖基质筛选培育抗除草剂水稻的方法： (1)待测水稻种子获得 将Ikg金粳28的种子用蒸馏水浸泡5h，换1%的EMS溶液浸泡过夜(约12h)，清水 冲洗4h，然后浸泡在32 °C的水中培养过夜，第2天播种在秧田，待长出4-5个叶片后移栽 至大田，成熟后得到Ml代种子。将所有Ml代种子进行播种、单株移栽，收获单株(为减少工 作量可以多株混收）上的M2代种子。
[0029] (2)浸种催芽 将上述100粒单株(或多株混收）M2代种子装在硫酸纸袋中，做好标记，浸泡在32°C左 右的温水中，连同盛放容器置于光照培养箱中32°C保温，每天早中晚换水三次。待4天露白 后方可播种。
[0030] (3)培养基准备 1) 配制除草剂母液：将除草剂普施特稀释十倍，即2ml的普施特加水18ml; 2) 配制0. 5%(w/w)的琼脂糖平板：将2L水倒入电磁锅中，加入IOg琼脂糖，搅拌均匀， 煮沸直至琼脂完全溶解，待温度降低到70°C后分装到三角瓶中，每瓶500ml，加入500ul稀 释10倍的除草剂咪唑乙烟酸母液，最终浓度为〇.lml/L，摇匀后倒平皿，直径为9cm，30ml/ 皿，培养基凝固后即可使用。
[0031] (4)播种 在培养皿上标记所播单株编号，选取露白的种子55粒，均勻的播种在培养基上，同 时播种抗和不抗的品种各两粒作为正负对照，并划线分隔做好标记，为防止水分散失，将 10-12个的培养皿叠到一起并用保鲜膜包裹，最后放到32°C连续光照的培养箱中。
[0032] (5)结果观察统计 待3-4天后进行观察统计，与抗和不抗的正负对照品种进行比较，筛选出抗性单株。
[0033] 注意事项： (1)浸种时注意浸泡足够量的正负对照品种。
[0034] (2)琼脂糖的批次不同硬度也不同，注意调整，一般在0. 4%_0. 6%之间进行调整。
[0035]Marker笔标记玻璃器皿培养过程中容易掉色，因此最好用塑料器皿；纸袋上的笔 迹也容易被水浸泡模糊掉。
[0036] 5、结果 如图1D，该方法能有效的筛选出抗性单株。
[0037] 该方法与常规方法的比较：
【主权项】
1. 一种采用琼脂糖基质筛选或鉴定抗除草剂水稻的方法，其特征在于按如下的步骤进 行： (1) 浸种催芽： 将100-105粒水稻种子装在纸袋中，做好标记，浸泡在32-34°C的温水中，连同盛放容 器置于光照培养箱中32°C保温，每天早中晚换水三次，待3-4天露白后方可播种；所述的水 稻种子指的是：将咪唑乙烟酸抗性的水稻品种与咪唑乙烟酸非抗性水稻品种杂交，收获得 到Fl代种子；播种Fl代种子，育苗，移栽，混收Fl代植株上的F2种子；单株种植F2代且按 株收获F3代种子，获得到所述的水稻种子；或将咪唑乙烟酸敏感的水稻品种种子进行诱变 处理，得到Ml代种子；播种Ml代种子，按常规育苗、移栽和种植，培育成Ml植株，成熟后收 获得到M2代种子，即为所述的水稻种子； (2) 培养基准备： 1) 配制除草剂母液：将除草剂咪唑乙烟酸稀释十倍，即2ml的普施特加水18ml; 2) 配制0. 4-0. 6%(w/w)的琼脂糖平板：将2L水倒入电磁锅中，加入IOg琼脂糖，搅拌 均匀，煮沸直至琼脂完全溶解，待温度降低到60-70°C后分装到三角瓶中，每瓶500ml，加入 500ul稀释10倍的除草剂咪唑乙烟酸母液，即终浓度为0.lml/L，摇匀后倒平皿，培养基凝 固后即可使用； (3) 播种： 在培养皿上标记所播品系名称，选取露白的种子50-55粒，均匀的播种在培养基上， 同时播种抗和不抗的品种各两粒作为正负对照，并划线分隔做好标记，为防止水分散失，将 10-12个的培养皿叠到一起并用保鲜膜包裹，最后放到32°C连续光照的培养箱中培养； (4) 观察统计： 待3-4天后进行观察统计，与抗和不抗的正负对照品种进行比较，统计出抗除草剂的 种子数与不抗除草剂的种子数。
2. 权利要求1所述的方法，其中的纸袋指的是硫酸纸袋。
3. 权利要求1所述的方法，其中的平皿直径为9cm，30ml/皿。
4. 权利要求1所述的方法，其中配制琼脂糖的浓度为0. 5%(w/w)。
【专利摘要】本发明公开了一种采用琼脂糖做基质筛选或鉴定抗除草剂水稻的方法，包括：浸种催芽、培养基准备、播种、观察统计等步骤。主要是将2L水倒入电磁锅中，加入10g琼脂糖，搅拌均匀，煮沸直至琼脂完全溶解，然后加入稀释10倍的除草剂普施特（咪唑乙烟酸）母液，最终浓度为0.1ml/L，摇匀后倒平皿，培养基凝固后即可使用；在培养皿上标记所播品系名称，选取露白的种子50-55粒，均匀的播种在培养基上，同时播种抗和不抗的品种各两粒作为正负对照，并划线分隔做好标记；待3-4天后进行观察统计。本发明的方法可以快速高效准确的筛选或鉴定出抗除草剂咪唑乙烟酸的水稻。为抗除草剂咪唑乙烟酸的水稻育种及纯度鉴定提供很好的技术手段。
【IPC分类】A01H1-06, A01H1-02, A01G7-00, A01G1-00, A01C1-00
【公开号】CN104542026
【申请号】CN201510013483
【发明人】吴健, 王晓静, 李军玲, 段骅, 苏京平, 姚微, 姚丙晨, 孙玥, 孙林静, 马忠友, 闫双勇, 王胜军, 刘学军
【申请人】天津市农作物研究所
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月12日