到MS+6-BA2.0mg/L +ΙΒΑ0.5mg/L培养基中20_30d，获得恢复生长的无根苗继代增殖多次，获得大量完整植株。
[0032]对比例1
胚培养中的步骤②中从种子中取出的完整胚不经75%酒精及无菌水处理，直接接种于MS培养基中，其余与实施例1相同。3d后萌发率90.1%，污染率9.2%。
[0033]由实施例1和对比例1可见，用75%酒精及无菌水对离体胚进行处理，能有效降低污染率和提高萌发率。
[0034]对比例2
胚培养中的步骤②中从种子中取出的完整胚分别在75%酒精及无菌水中轻蘸并搅动10s，然后接种于MS培养基中，其余与实施例1相同。3d后萌发率25.3%，污染率1.5%。
[0035]由实施例1和对比例2可见，用75%酒精及无菌水处理的时间过长，虽然种胚的污染率降低，但萌发率降低得更为明显。
[0036]实施例2
1.杂交种子筛选:取“印度首领”X “白与蓝”干燥的成熟杂交种子，选取饱满，无病虫害的种子为试验对象，舍弃霉变、干瘪的坏种子。
[0037]2.胚培养:①外植体消毒:干燥种子用无菌水浸泡2d后，先用洗衣粉清洗干净，再用自来水冲洗30min后，在超净工作台上先用75%酒精消毒lOmin，无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞(HgCl2)消毒8min后，无菌水冲洗4次后进行试验，整个消毒过程不断震荡。
[0038]②初代接种:用镊子夹取消毒后的种子，在解剖镜下沿腹缝切开，取出完整胚，分别在75%酒精及无菌水中轻蘸并搅动l_2s，将离体胚接种于MS培养基中，每瓶标记为一个株系，接种完成后，置于培养室中培养。培养室温度23-25°C，每天光照12h，光照强度1000-1500Lx。3d 后萌发率 96.2%，污染率 3.0%。
[0039]③继代增殖:取萌发后2cm左右的幼苗，剪去根系，以芽间剥离的方式小心地分成小芽丛，接种到MS+6-BA4.0 mg/L +IBA1.0 mg/L继代培养基中。接种完成后，置于培养室中培养。每隔25d继代一次。
[0040]④壮苗生根:继代4-5次后，取一部分5cm左右的不定芽接种到MS+PP3330.6mg/L生根培养基中进行生根培养。接种完成后，置于培养室中培养。
[0041]⑤驯化炼苗:当试管苗根长到3cm左右时，将培养瓶从培养室取出，置于散射光5000Lx、温度23-25°C的温室中，封口培养3d。
[0042]⑥移栽:将生根苗从培养瓶中取出，用温水冲洗干净其基部的琼脂，将根部在
0.1%多菌灵溶液里浸泡10s，移栽到经0.5%高锰酸钾处理(浇透)的蛭石基质中，塑料薄膜覆盖保湿，加盖遮阳网遮阳，定期浇杀菌剂灭菌，注意浇水保湿，15d后揭膜，加强移栽后的管理，种苗成活率90.5%。
[0043]3.种质保留:剩余的另一部分无根苗以芽间剥离的方式接种到l/2MS+2%甘露醇的培养基上进行高渗保存。培养温度10-15°C，光照强度500-1000LX，光照时间8_10h。
[0044]4.优良株系筛选:移入大田组培苗经过一个生长周期后，筛选出符合育种目标的优良无性系。
[0045]5.种质恢复、快繁:将筛选出的优良无性系通过保留的种质重新接种到MS+6-BA4.0mg/L+IBAl.0mg/L培养基中20_30d，获得恢复生长的无根苗继代增殖多次，获得大量完整植株。
[0046]利用本发明获得大量的优良鸢尾杂交无性系种苗。在人工授粉的当年，利用成熟杂交种子胚为外植体进行胚培养，第2年即可获得大量杂交无性系种苗，部分种质进行离体保存，部分种质大田培育，经过一个生长周期后，筛选出符合育种目标的优良无性系。第4年即可获得大量优良杂交无性系种苗。传统的播种繁殖，第2-3年开花，筛选出优良单株后，用花蕾组培快繁，最早也得第4年才能获得少量优良无性系种苗，第5年才能规模化生产。与之相比，组织培养启动时间提前3年，植株开花时间相当，筛选出优良无性系时间相当，获得大量杂交无性系种苗时间提前2年。通过胚培养结合种质离体保存，缩短了鸢尾杂交育种周期，加快了育种进程。此外，通过对胚培养各阶段条件的优化，使种胚在3d后即具有较高的萌发率和较低的污染率，并且移栽后成活率较高。
【主权项】
1.一种快速获得鸢尾杂交优良无性系的方法，其特征在于，以鸢尾成熟杂交种子为对象，利用胚培养技术获得杂种无根苗，所述杂种无根苗一部分继续继代培养保留种质，一部分经壮苗生根、炼苗、移栽、定植后，经过一个生长周期，筛选出符合育种目标的优良无性系，对筛选出的优良无性系利用保留的种质通过恢复生长进行扩繁，经生根、炼苗、移栽获得杂交优良无性系种苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胚培养是指以鸢尾成熟杂交种子胚为外植体，经诱导出苗、继代扩繁、壮苗生根、炼苗和移栽得到杂种种苗。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的杂交种子为鸢尾种或品种间花期人工授粉所得种子。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述诱导出苗中包括如下步骤:将所述鸢尾成熟杂交种子消毒，用镊子夹取消毒后的种子，沿腹缝切开，取出完整胚，分别在75% (v/v)酒精及无菌水中轻蘸并搅动l_2s，将离体胚接种于MS培养基中。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的胚培养萌发、继代、生根培养基分别为 MS、MS+6-BA2.0-4.0 mg/L +ΙΒΑ0.5-1.0 mg/L、MS+PP3330.2-1.0 mg/L ;所述的炼苗为将培养瓶放置在散射光5000Lx、温度23-25°C的温室中封口培养3d ;所述的移栽基质为蛭石Ο6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的MS培养基每L含30g鹿糖与6g琼脂，pH值调至5.8-6.0。7.根据权利要求1-6所述的方法，其特征在于，所述的胚培养温度为23-25°C，每天光照 12-14h，光照强度 1000-1500LX。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的保留种质为将鸢尾杂交种质通过高渗保存法进行中期保存，所述的高渗保存法是在MS或1/2MS上加入2-5%甘露醇；种质保存环境条件为:温度10-15°C，光照强度500-1000LX，光照时间8_10h。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的育种目标为育种者的育种目的，良种筛选方法由育种者自行选择。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的种质恢复为将保留种质通过重新接种到继代培养基中20-30d，获得恢复生长的无根苗，所得无根苗继续进行继代、生根培养，获得完整植株。
【专利摘要】本发明公开了一种快速获得鸢尾杂交优良无性系的方法，涉及植物组织培养与植物生物技术领域。该方法以鸢尾成熟杂交种子为对象，利用胚培养技术经诱导出苗、继代扩繁获得大量杂种无根苗，一部分继续继代培养保留种质，一部分经壮苗生根、炼苗移栽、定植后，经过一个生长周期，筛选出符合育种目标的优良无性系。对筛选出的优良无性系利用保留的种质通过恢复生长迅速扩繁达到一定规模。与传统的种子播种，筛选出优良单株后进行组培扩繁相比，本发明获得大量优良杂交无性系种苗的时间至少提前2年，大大缩短了育种进程。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105284622
【申请号】CN201510773709
【发明人】尹新彦, 张全锋, 储博彦, 李金霞, 赵玉芬, 贾红姗
【申请人】河北省林业科学研究院
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月13日