一种筛选滩涂贝类幼苗微藻饵料的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于水产养殖巧料培养技术领域，具体设及一种筛选滩涂贝类幼苗微藻巧 料的方法。
【背景技术】
[0002] 目前我国"始、蝴、赔"等滩涂贝类产量占海水贝类养殖总产量近40%。而在滩涂 贝类育苗中，微藻巧料的品种直接决定着育苗的成败。长期实践发现，育苗过程中投喂不同 微藻时，滩涂贝类幼体生长速度差异很大，说明微藻种类对滩涂贝类幼苗的生长发育有着 直接影响。在实际滩涂贝类幼苗繁育过程中，我们需要选择对滩涂贝类幼体具有明显巧料 效果的微藻巧料进行扩繁投喂。
[0003] 某种巧料微藻对滩涂贝类幼体巧料效果如何，一般都通过向滩涂贝类投喂不同种 类的微藻，通过观测对应贝类幼苗的生长速度和成活率来判断对应微藻的巧料效果【朱雨 瑞等，2010. 5种微藻对4种滩涂稚贝生长的影响，海洋学研究，28(3) :60-66】。但该手段 需要比较长的培养周期，另外，水质条件、环境条件均会对幼苗的生长速度和存活率产生影 响。所W往往需要通过多次的反复试验才能最后确定不同微藻对贝类的巧料效果。因此， 就需要提供一种有效的检测微藻作为贝类巧料的方法。而且，目前普遍采用投喂两种或多 种微藻的混合投喂方式，而运种方式需要对不同的微藻进行培养，导致巧料的成本上升。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种筛选滩涂贝类幼苗微藻巧料的方法，即通过定量检测滩涂贝类幼 体摄食混合微藻后贝类体内脂肪酸和酱醇的组成，来准确筛选滩涂贝类幼苗优质微藻巧料 的方法，从而弥补现有技术的不足。
[0005] 本发明的方法，包括如下的步骤：
[0006] 1)标准组PCA得分图的获得
[0007] 用混合微藻投喂贝类幼体作为标准组，投喂一定周期后测定贝类幼体的脂肪酸和 酱醇组成，然后对脂肪酸和酱醇组成进行主成分分析（PCA)，获得PCA得分图；
[0008] 2)在同样的养殖条件下，对贝类幼体分别投喂不同种类的单种微藻进行培养作为 实验组，在投喂相同周期后测定不同实验组贝类幼体的脂肪酸和酱醇组成，然后对脂肪酸 和酱醇组成进行主成分分析，根据各实验组在PCA得分图上的分布筛选出与标准组接近的 实验组的微藻作为该贝类的巧料。
[0009] 所述的贝类为滩涂养殖的贝类，例如泥蝴、毛蝴、青始、鎌赔、彩虹明樓始、文始等。
[0010] 本发明所用的微藻均于位于指数生长期，浓度达到80~120cell?y11时进行投 喂；
[0011] 本发明的贝类投喂微藻巧料前，需要在经过沙滤基本不含任何微藻的洁净天然海 水中不投巧饥饿8-lOhW尽量排空肠胃内残巧。
[0012] 本发明使用气相色谱-质谱联用来进行脂肪酸和酱醇的定量分析。
[0013] 采用本发明的方法，确定泥蝴的巧料微藻为角毛藻或金藻。
[0014] 与现有技术相比，本发明的优点在于：培养周期短，避免了水质环境条件对培养效 果可能产生的影响，基于贝类幼体脂肪酸酱醇组成筛选出的微藻，其巧料效果更切合实际 生长过程中贝类幼体的选择性摄食和同化，从而可作为贝类幼体优质巧料的选择。
【附图说明】
[0015] 图1:基于泥蝴幼苗脂肪酸酱醇主成分分析的第一和第=主成分得分图（A)及第 二和第=主成分得分图度）
[0016]图上样品分别为单种投喂P.Viridis的泥蝴幼苗（IG-PV)、单种投喂 C.calcitrans(TG-CC)、Lga化ana(TG-IG)和N.O州Iata(NO)的泥蝴幼苗；两两混合投喂 I.ga化ana和N.oculata(TG-IG-NO)、I.ga化ana和P.Viridis(TG-IG-NO)、C.calcitrans 和Lga化ana(TG-CC-IG)、C.calcihans和P.Viridis(TG-CC-PV)、C.calcitrans和 N.oculata灯G-CC-N0)及所有4种微藻全混合投喂的泥蝴幼苗灯G-MIX)。
【具体实施方式】
[0017] 本发明通过对投喂混合微藻巧料和单种微藻巧料的贝类幼体测定脂肪酸酱醇组 成，并进行PCA分析，在PCA得分图上，如果投喂了某种微藻后的贝类幼体样品跟混合投喂 微藻巧料的贝类幼体样品比较接近，就可W说明该微藻被该贝类优先摄食和同化了，实际 贝类幼体培育过程中就可W选择该藻作为该贝类幼体的优质巧料。本发明应用该技术，大 大缩短了传统技术中漫长的培养过程，并避免了水质环境条件对培养效果可能产生的影 响，筛选出的微藻巧料效果更切合实际过程中贝类幼体的摄食同化选择。
[0018] 本发明所使用的主成分分析方法（principalcomponentsanalysis,PCA)是一 种多变量数据统计方法，在二维空间上显示物质聚类分布的PCA得分图，可W直观样品间 物质组成的相似或非相似性【VlietEVetal.,2008.Anovelinvitromet油olomics approachforneurotoxicitytesting,proofofprincipleformethylmercury chlorideandcaffeine.NeuroToxicology, 29(I):I- 12]〇
[0019] 所述的纔合微藻是将已报道的该贝类的各种微藻纔合后完成的。
[0020] W下通过实施例对本发明作进一步详细描述。
[0021] 实施例1
[0022] 2014年9月在福建省宝智水产科技有限公司，选择滩涂贝类常用4种海洋微藻， 分别是：娃藻口的角毛藻烟iaetoceros calcitrans)、金藻口的球等鞭金藻（Isoclxrysis ga化ana)和绿色己夫藻（Pavlova viridis)、Eustigmato地yceae藻口的微绿球藻 (Nannochloropsis oculata)进行培养，微藻的培养海水（盐度为20)经0. 45 Jim醋酸纤 维滤膜过滤后，煮沸冷却。加入NMBs营养液（IOOmg 'L 1謂〇3, IOmg 'L 1皿2?〇4, 0. 25mg 'L IMnS 〇4 ?&0, 2. 50mg .L中eS〇4.7&0, IOmg .L lEDTA-Naz, 6 y g .L IyBi, 0. 05 y g .L1VBi2)，同时加入娃 酸钢（20mg. Li)作为角毛藻的娃源。微藻藻种在2500mL的锥形瓶中[自然光，培养溫度为 (20±^°C]培养1周后，把它们转入50L的塑料白桶中，在