专利名称：一种母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制品，更具体地说是一种母牛型分枝杆菌菌苗的制造工艺。
母牛型分枝杆菌是1964年Bonicke等从牛乳腺中分离得到的，1968年Tsukamura等证实，该菌为快生长分枝杆菌，广泛分布于自然界，在草地、牧场、水塘、水井中均有发现，该菌呈丰满短杆菌。长1.0～4.0微米，略弯曲，两端圆或偶尔粗大。分枝稀疏但偶尔观察到外型细胞，在鸡蛋培养基上2～3天通常可产生光滑湿润、发光、奶油状园丁型菌落，带有深黄色到橙色色素，菌株对光照极为敏感，在完全黑暗生长1～2天为非产色素，但短暂曝光后，即黄色色素，该菌生长温度为22～40℃，17℃及42℃培养时，生长受到局限，及色素产生受到抑制。母牛型分枝杆菌经培养、生物技术处理，菌液经高温高压灭活的液态菌苗，临床研究证明其为双向免疫调节剂，主要用于结核病的免疫治疗。但这种液态菌苗，局部副作用发生率为60％。
本发明的目的是提供一种冻干粉剂的母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的。
一种母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺，其特征在于包括以下工艺流程。
菌种-菌体培养-收集菌体-母液制备-高压灭活-冷却分装-冻干扎盖一种母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺，其特征在于1、菌体培养将母牛分枝杆菌接种于培养基，在35～39℃下培养3～5天，2、收集菌体取培养好的菌体，以生理盐水洗下菌苔，离心分离，收集菌苔，并打碎，3、母液制备将菌苔加保护液，制成8～12mg/ml的菌悬液并除杂，4、高压灭活取菌悬液，加入保护液，调整菌液浓度为0.8～1.2mg/ml，在0.08～0.12mPa下湿热灭菌15～45分钟，5、冷却分装冻干扎盖将分装后的菌液，进入冻干箱，在-52～-48℃下预冻3～4小时，加热真空升华，待制品温度达到33～38℃时，保温3～5小时，真空密封。
保护液的重量组成为味精 0.05～0.15％蔗糖 0.05～0.15％NaCl 0.2～0.6％ KH2PO40.1～0.3％蒸馏水配制，消毒。
和国外生产的液态母牛分枝杆菌菌苗相比，本发明产品，医疗效果明显提高，副作用大大减少。
经临床应用，本发明产品具有调节免疫功能，增强肺结核患者抗结核菌感染的细胞免疫能力，能加速初治、复治及难治肺结核短程化疗痰菌阴转的速度，加快病灶的吸收好转，及空洞缩小、关闭的速度，4个月化疗加6个月免疫治疗疗效与6个月化疗疗效一致，缩短了初治肺结核短程化疗的疗程。提高难治性肺结核化疗的疗效，总有效率明显提高。
以下结合实施例，对本发明作进一步描述。
实施例1、配制培养基1000ml，按比例准确称取各物料，配制成1000ml培养基，分装于150支试管，每管6～7ml，88℃烤干。
2、菌种，母牛分枝杆菌NcTc10916，共接种6支试管，37℃培养3天，生长良好，光培养深黄、暗培养浅黄。
3、菌体培养上述培养好的菌种5支转种于125支试管，每支菌种接种5支，37℃培养3天，生长良好。
4、收集菌体
取上述培养好的菌体120支，每支加4ml生理盐水洗下菌苔，并收集到离心桶中，离心分离，洗涤两次，得菌泥173080克。
5、母液制备上述菌泥加保护液246.1ml，制成50mg/ml原液，再加入保护液1200ml，制得浓度10mg/ml母液，装500ml盐水瓶，0.1mPa灭菌20分钟，冷却测浓度660ug/ml。
6、分装取母液86ml，加保护液1200ml，总量为1286ml，分装，每支0.5ml，共计分装2550瓶。
7、冻干分装好的西林瓶，进入冻干箱，在-50℃以下预冻3小时，加热升华至35℃，保温3～5小时。
8、扎盖冻干菌苗2550支，扎铝盖。即为成品。
保护液的重量组成为味精 0.05～0.15％蔗糖 0.05～0.15％NaCl 0.2～0.6％ KH2PO40.1～0.3％蒸馏水配制，0.1Kg/CM2蒸汽消毒30分钟，冷却备用。
权利要求
1.一种母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺，其特征在于包括以下工艺流程菌种-菌体培养-收集菌体-母液制备-高压灭活-冷却分装-冻干扎盖
2.根据权利要求1所述的一种母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺，其特征在于1、菌体培养将母牛分枝杆菌接种于培养基，在35～39℃下培养3～5天，2、收集菌体取培养好的菌体，以生理盐水洗下菌苔，离心分离，收集菌苔，并打碎，3、母液制备将菌苔加保护液，制成8～12mg/ml的菌悬液并除杂，4、高压灭活取菌悬液，加入保护液，调整菌液浓度为0.8～1.2mg/ml，在0.08～0.12mPa下湿热灭菌15～45分钟，5、冷却分装冻干扎盖将分装后的菌液，进入冻干箱，在-52～-48℃下预冻3～4小时，加热真空升华，待制品温度达到33～38℃时，保温3～5小时，真空密封，保护液的重量组成为味精 0.05～0.15％蔗糖 0.05～0.15％NaCl 0.2～0.6％ KH2PO4 0.1～0.3％蒸馏水配制，消毒。
全文摘要
本发明公开了一种母牛分枝杆菌菌苗的制造工艺,其工艺流程为:菌种－菌体培养－收集菌体－母液制备－高压灭活－冷却分装－冻干扎盖。通过本发明制造的冻干菌苗,便于贮藏、运输、使用,避免了菌液结团及液态菌苗注射出现的副作用,提高了药品的安全性。
文档编号C12N1/20GK1307100SQ00112069
公开日2001年8月8日 申请日期2000年1月28日 优先权日2000年1月28日
发明者蒋荣发, 王立明, 康卫光, 聂传朋 申请人:安徽生物药业有限责任公司