专利名称：一种离体培养药蒲公英的方法及其专用分化培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种培养药蒲公英的方法及其专用培养基，特别是涉及一种离体培养药蒲公英的方法及其专用分化培养基。
背景技术：
药蒲公英是菊科(Compositae)蒲公英属(Taraxacum)的多年生草本植物，分布广泛，是传统的中药材，具有清热解毒、消肿散结等功效，被称为中药八大金刚之一。最新研究表明，蒲公英甾醇具有抗肿瘤作用，而且在蒲公英中含量较高，从而使蒲公英成为开发抗癌新药的又一个努力方向。营养成分分析表明，蒲公英叶片中蛋白质、脂肪、维生素、胡萝卜素等有机营养成分的含量明显高于其他常见蔬菜，而且蒲公英还含有丰富的微量元素，其中包括钙、铁、硒等人体必需的矿质元素，是一种理想的营养保健蔬菜。
近年来，随着世界范围内“崇尚自然，反朴归真”保健时尚的兴起，国内外市场对天然保健品的需求日益增加，以蒲公英开发的健胃剂、利尿剂、美容剂等系列产品深受市场欢迎。用野生蒲公英进行保健已成为发达国家的消费时尚。在“绿色食品”倍受青睐的今天，集食用和药用于一身的营养保健蔬菜——蒲公英必将成为蔬菜市场的新宠，在给人们带来健康的同时，也会创造出十分可观的经济效益。随着人们对蒲公英的利用和需求的日益增加，野生蒲公英越来越少，组织培养以其繁殖快的优点而成为蒲公英生产的重要商业途径。
发明创造内容本发明的目的是提供一种离体培养药蒲公英的方法及其专用培养基。
本发明所提供的离体培养药蒲公英的方法，是以药蒲公英叶片为外植体，接种在分化培养基MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或0-2mg/L TDZ中，培养7-14天分化出丛生芽，再将得到的丛生芽转入MS培养基进行生根，培养8-12天得到完整的再生植株。
其中，所述分化培养基优选为MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ，尤其优选为MS+0.2mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/LIAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ；最优选为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
上述方法中采用的培养条件可为温度20-28℃，光照周期10-14h/14-10h，光照强度1400-1800lx；优选为温度24-26℃，光照周期12h/12h，光照强度1600lx。
本发明以MS为基本培养基，添加不同的激素成分筛选得到了药蒲公英(Taraxacum officinale F.H.Wigg)的分化培养基，进而建立了离体培养药蒲公英的方法，实验结果表明，利用本发明的方法，可以得到稳定的药蒲公英植株再生体系，药蒲公英叶片在本发明的专用培养基中能够快速高效地再生，平均诱芽数高达15，不仅为药蒲公英化学成分的研究以及无融合生殖现象的深入研究提供了一个平台，而且可以快速地进行药蒲公英的规模化生产，满足市场需求。
图1为外植体在培养基1-9中的分化频率柱状2为3号培养基中幼叶的形成照片图3为4号培养基中幼叶的形成照片图4为8号培养基中幼叶的形成照片具体实施方式
实施例1、离体培养药蒲公英药蒲公英(Taraxacum officinale F.H.Wigg)种子(购自意大利SAIS公司)经常规消毒(70％酒精消毒30s，10％NaClO消毒6min，无菌水冲洗4次)后接种在1/2MS培养基，黑暗中培养。4天后多数种子已萌发，转移至光下培养，1月后成苗，苗高6-8cm。
将上述无菌苗叶片切成0.5cm×0.5cm的小块，接种到分化培养基上，诱导器官发生。为了得到最佳诱导培养基，叶片外植体以40-60块为一组，分别接种到不同培养基(培养基配方如表1所示)。
实验结果如图1所示，表明药蒲公英叶片外植体接种2周后，在3号培养基(MS+0.2mg/L IAA+4mg/L 6-BA)和4号培养基(MS+0.2mg/L IAA+1mg/L TDZ)中均分化出大量丛生芽，分化频率(发生分化的外植体数/接种的外植体总数)分别为65.21％和71.56％，平均诱芽数(形成的不定芽数目/接种的外植体数)(表2)为12-15，其次是8号培养基(平均诱芽数为9)。由于3号培养基中外植体的分化高峰比4号培养基滞后3-4天，因此，4号培养基是药蒲公英分化的最佳培养基。虽然1和9号培养基中分化频率也比较高，但它们的平均诱芽数仅为3-5个，远小于3、4号培养基(平均幼芽数12-16)。外植体接种3周后，已经由芽点形成了幼叶(图2、图3和图4)。将这些小植株分离后接种在MS基本培养基中，10天后生根，形成完整的再生植株。
表1.药蒲公英分化培养基
注基本培养基是MS+3％蔗糖+0.8％琼脂，pH5.8其中，上述整个组织培养过程中，培养条件为温度(25±1)℃，光照周期12h/12h，光照强度1600lx。
表2.药蒲公英在1-9号分化培养基中的分化情况
权利要求
1.一种离体培养药蒲公英的专用培养基，其配方为MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或0-2mg/L TDZ。
2.根据权利要求1所述的专用培养基，其特征在于所述培养基为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
3.根据权利要求2所述的专用培养基，其特征在于所述培养基为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于所述分化培养基为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
5.一种离体培养药蒲公英的方法，是以药蒲公英叶片为外植体，接种在分化培养基MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-5.0mg/L 6-BA或MS+0.2-1.5mg/L IAA+0-2mg/L TDZ中，培养7-14天分化出丛生芽，再将得到的丛生芽转入MS培养基进行生根，培养8-12天得到完整的再生植株。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述分化培养基为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA、MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ或MS+1.5mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述分化培养基为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ、MS+0.2mg/L IAA+4.0mg/L 6-BA或MS+1.0mg/L IAA+1.0mg/L TDZ。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述分化培养基为MS+0.2mg/LIAA+1.0mg/L TDZ。
9.根据权利要求5-8中的任意一项所述的方法，其特征在于所述方法中采用的培养条件为温度20-28℃，光照周期为10-14h/14-10h，光照强度1400-1800lx。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于所述培养条件为温度24-26℃，光照周期12h/12h，光照强度1600lx。
全文摘要
本发明公开了一种离体培养药蒲公英的方法及其专用培养基。该方法是以药蒲公英叶片为外植体，接种在分化培养基MS+0.2－1.5mg/L IAA+0－5.0mg/L 6－BA或MS+0.2－1.5mg/L IAA+0－2mg/L TDZ中，培养7－14天分化出丛生芽，再将得到的丛生芽转入MS培养基进行生根，培养8－12天得到完整的再生植株。实验结果表明，药蒲公英叶片在本发明的专用培养基中能够快速高效地再生，平均诱芽数高达15，可以快速地进行药蒲公英的规模化生产，满足市场需求。
文档编号C12N5/04GK1667117SQ200410006600
公开日2005年9月14日 申请日期2004年3月11日 优先权日2004年3月11日
发明者李银心, 陈华 申请人:中国科学院植物研究所