专利名称：一种米曲霉真菌及其在普洱茶生产中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种米曲霉真菌及其在普洱茶生产中应用，属生物技术领域。
背景技术：
众所周知，曲霉属(Aspergillus)。有多种活性强大的酶系，可用于工业生产，如淀粉酶用于淀粉的糖化、液化以及酒精工业或制造葡萄糖和消化剂。果胶酶用于水解聚半乳糖醛酸，产生的纤维素酶为Cx酶，含有较强的蛋白酶及果胶酶，当底物ph值达到3.0时它仍能发挥作用。米曲霉能分解有机质产生多种有机酸如抗坏血酸、柠檬酸、葡萄糖酸和没食子酸等。此菌系还可在甾族化合物11-α位起羟化作用。
在普洱茶大生产过程中，该菌系能分泌酶类作用于基质。在淀粉酶的作用下，将原料中的直链支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等，在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸。在果胶酶、糖化酶、纤维素酶的作用下使发酵基质大分子不溶物质转化为可溶解于水的小分子物质，对普洱茶品质的形成带来积极的作用。
在普洱茶研究领域，由于长期缺乏学科的研究，尤其是从微生物的角度来进行普洱茶的研究。而如何通过对云南普洱茶加工中微生物的研究，并从普洱茶加工中筛选有益优势微生物菌株应用到生产中来提升普洱茶的品质尚未见公开的文献报道。
发明内容
本发明的目的是从微生物的角度对进行普洱茶进行研究，为生产企业提供高品质普洱茶有益菌株来源。本发明的另一目的是通过控制有益菌种在普洱茶生产中的比例，为促进云南普洱茶品质稳定和提高发挥作用。
本发明的具有提高普洱茶品质功能的真菌，由生产菌株经米曲霉纯化培养及天然培养基培养后得到，生产菌株为米曲霉(Aspergillus oryzae)PAsp0502，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址北京是海淀区中关村北一条13号，保藏日期2005年5月16日，保藏号CGMCC No.1374。
本发明的米曲霉(Aspergillus oryzae)PAsp0503的形态学特征为该菌类生长稍局限，10-14天直径可达2.5-3cm，菌丝初为白色，常常出现黄色区域，厚绒状，黑色，反而无色或中央部分略带黄褐色。镜检后观察得到分生孢子头幼时球形，渐变为放射形或裂成几个放射的柱状物，一般为1-3mm，直径15-20μm，壁厚，光滑。顶囊球形一般直径45-75μm。小梗双层，自顶囊全面着生，褐色，梗基一般20-30×5-6μm，长者可达60-70μm，宽8-10μm，有的具横隔，分生孢子球形，直径大多4-5μm，粗糙。
本发明经常规的米曲霉纯化培养工序及天然培养基培养后得到。
本发明的米曲霉(Aspergillus oryzae)PAsp0502真菌有提高普洱茶品质的作用，可应用于普洱茶的生产工艺中。
本发明的优点在于将PAsp0502按一定的比例用于普洱茶的大生产过程中，其普洱茶中的茶多糖含量为2-4％、茶褐素含量为10-12％，普洱茶的品质有明显的提高，并缩短了加工时间，对普洱茶品质的稳定和提高发挥重要作用。
具体实施例方式实施例1PAsp0502菌种的纯化从采集到的茶样中，通过公知的平板分离得到米曲霉菌株。米曲霉纯化培养基为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000ml、ph自然。马铃薯去皮，切成块，煮熟半小时，然后用纱布过滤，在加琼脂和糖，熔化后补足水至1000ml。121℃灭菌20min。
纯化方法(1)将固体培养基熔化，冷却至45℃，注入无菌培养皿中，每皿约15～20毫升，稍微摇转，静置，使成平板备用。
(2)取要分离的茶样2g，在火焰旁加到装有98ml无菌水的研钵中研碎，此时得到的是10-2的菌悬液。
(3)稀释按十倍稀释法把菌悬液稀释至10-8，十倍法是指下一管的菌悬液要比上一管的稀十倍。
(4)接种事先准备好的平板9套，分别标号为10-6、10-7、10-8，每个稀释度写三套平皿，以便比较。在每个已标号的平皿中注入1ml相应的菌悬液，用涂布棒涂均匀，放入25～28℃培养24小时观察。
(5)培养2～5天后，挑取单个菌落，并移植于斜面上培养，待形成子实器官后检查是否只有一种菌而且这种菌是否符合米曲霉的特征。
(6)最后把选出的菌种接种到天然培养基上(葡萄糖30g、麸皮10g、玉米粉50g、蛋白胨10g、酵母膏1.0g、加蒸馏水至1000，不调ph值)。放到28℃恒温箱中早晚摇动培养5～7天后，在无菌超作台上用无菌滤纸过滤，无菌收获滤纸上的菌丝和米曲霉的孢子，放到28±2℃恒温箱中干燥即可用于接种发酵试验。
实施例2PAsp0502的生产应用将毛茶按传统的方法进行湿热，随后在毛茶中接种重量比为0.1-0.8％的PAsp0502让其发酵，当堆温升高到37℃左右时，PAsp0502开始进行代谢，并且随着堆温进一步的升高，分泌出大量的葡萄糖淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、纤维素酶和果胶酶等。在普洱茶大生产过程中，该菌系分泌酶类作用于基质。在淀粉酶的作用下，将原料中的淀粉降解为糊精及各种低分子的糖类，如麦芽糖、葡萄糖等；在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸；在果胶酶、糖化酶、纤维素酶的作用下使大分子不溶物质转化为可溶于水的小分子物质，有益于普洱茶品质及保健机理的形成。
经接种PAsp0502后生产的普洱茶，其品质有明显的提高，普洱茶中的茶多糖含量为2-4％、茶褐素含量为10-12％，形成的普洱茶产品，汤色红浓明亮，滋味甘滑，独特陈香。
权利要求
1.一种米曲霉真菌，由生产菌株经米曲霉纯化培养及天然培养基培养后得到，其特征在于生产菌株为米曲霉(Aspergillus oryzae)PAsp0502，保藏日期2005年5月16日，保藏号CGMCC No.1374。
2.权利1所说的真菌，其特征在于该真菌有提高普洱茶品质的作用，可应用于普洱茶的生产工艺中。
全文摘要
本发明涉及一种米曲霉真菌及其在普洱茶生产中应用，属生物技术领域。本发明的米曲霉真菌由米曲霉纯化培养、天然培养基培养工序后得到，其特征在于生产菌株为米曲霉(Aspergillus oryzae)PAsp0502，保藏日期2005年5月16日，保藏号CGMCC No.1374。该真菌有提高普洱茶品质的作用，可应用于普洱茶的生产工艺中。本发明的优点在于将PAsp0502按一定的比例用于普洱茶的大生产过程中，其普洱茶中的茶多糖含量为2－4％、茶褐素含量为10－12％，普洱茶的品质有明显的提高，并缩短了加工时间，对普洱茶品质的稳定和提高发挥重要作用。
文档编号A23F3/06GK1752203SQ20051001094
公开日2006年3月29日 申请日期2005年7月28日 优先权日2005年7月28日
发明者周红杰, 龚加顺, 秘鸣, 赵龙飞 申请人:秘鸣