专利名称：一种黑曲霉真菌及其在普洱茶生产中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种黑曲霉真菌及其在普洱茶生产中的应用，属生物技术领域。
背景技术：
众所周知，曲霉属(Aspergillus)较多地发现于发酵食品，是一类产复合酶的菌株，能产生淀粉酶、蛋白酶、果胶酶、糖化酶、纤维素酶、植酸酶等用于工业生产。它们还可以产生溶血酶类用于消除动脉及静脉血栓。有些菌系能产生多种有机酸如柠檬酸、苹果酸、延胡索酸等。
在普洱茶大生产过程中，该菌系能分泌酶类作用于基质。在淀粉酶的作用下，将原料中的直链支链淀粉降解为糊精及各种低分子糖类，如麦芽糖、葡萄糖等，在蛋白酶的作用下，将不易消化的大分子蛋白质降解为蛋白胨、多肽及各种氨基酸。在果胶酶、糖化酶、纤维素酶的作用下使发酵基质大分子不溶物质转化为可溶解于水的小分子物质，对普洱茶品质的形成带来积极的作用。
在普洱茶研究领域，由于长期缺乏学科的研究，尤其是从微生物的角度来进行普洱茶的研究。而如何通过对云南普洱茶加工中微生物的研究，并从普洱茶加工中筛选有益优势微生物菌株应用到生产中来提升普洱茶的品质尚未见公开的文献报道。
发明内容
本发明的目的是从微生物的角度对普洱茶进行研究，为生产企业提供高品质普洱茶有益菌株来源。本发明的另一目的是通过控制有益菌种在普洱茶生产中的比例，为促进云南普洱茶品质稳定和提高发挥作用。
本发明的黑曲霉真菌，由生产菌株和辅料经初筛、复筛、天然培养基培养、及黑曲霉纯化培养工序后得到，生产菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址北京是海淀区中关村北一条13号，保藏日期2005年5月16日，保藏号CGMCC No.1373。
本发明的黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501的形态学特征为该菌类生长稍局限，10-14天直径可达2.5-3cm，菌丝初为白色，常常出现黄色区域，厚绒状，黑色，反而无色或中央部分略带黄褐色。在显微镜下观察分生孢子头幼时球形，渐变为放射形或裂成几个放射的柱状物，一般为1-3mm，直径15-20μm，壁厚，光滑。顶囊球形一般直径45-75μm。小梗双层，自顶囊全面着生，褐色，梗基一般20-30×5-6μm，长者可达60-70μm，宽8-10μm，有的具横隔，分生孢子球形，直径大多4-5μm，粗糙。
本发明经公知的初筛、复筛、天然培养基培养、黑曲霉纯化培养等传统工序后得到。
本发明的黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501真菌有提高普洱茶品质的作用，可应用于普洱茶的生产工艺中。
本发明的优点在于将PAsp0501按一定的比例用于普洱茶的大生产过程中，其普洱茶中的茶多糖含量为2-4％、茶褐素含量为10-12％，普洱茶的品质有明显的提高，并缩短了加工时间，对普洱茶品质的稳定和提高发挥重要作用。
具体实施例方式实施例1PAsp0501菌种的筛选从采集到的茶样中，通过公知的平板分离(培养基用黑曲霉分离纯化培养基)得到48株黑曲霉菌株。黑曲霉纯化培养基为葡萄糖30g、NaNO330g、K3PO41g、MgSO40.25g、KCL0.25g、琼脂15g、蒸馏水1000ml、ph值6.8、在121℃灭菌30min。再通过碳酸钙透明圈法选出可同时产生酶活性较高的AG、CMC、果胶酶的5号菌株作为试验菌。筛选方法如下A.初筛将分离到的黑曲霉菌株接种到培养基(琼脂20g、葡萄糖20g、CaCO325g、加水至1000ml、PH6.5-7、在121℃高压锅中灭菌30min)上，于30℃培养三天。原理是葡萄糖淀粉酶会在生长中将培养基中的葡萄糖转化为酸并扩散到培养基中，与其中的CaCO3作用，产生透明圈。选出其中透明圈大的菌株供复筛。
B.复筛用250ml三角瓶装50ml培养基(葡萄糖50g、蛋白胨3g、(NH4)2HPO40.4g、KH2PO40.2g、MgSO4·7H2O0.1g)灭菌后接入初筛的黑曲霉菌种，于振荡摇瓶培养3天(30℃)。然后用PHS-2型酸度计测定酸度。每株菌接种三瓶。最后选出一株产酸最多的菌株作为产酶菌种。
C.最后把选出的菌种接种到天然培养基上(葡萄糖30g、麸皮10g、玉米粉50g、蛋白胨10g、酵母膏1.0g、加蒸馏水至1000，ph值6.5-7)。放到28℃恒温箱中早晚摇动培养5～7天后，在无菌超作台上用无菌滤纸过滤，无菌收获滤纸上的菌丝和黑曲霉的孢子，放到28℃恒温箱中干燥即可用于接种发酵试验。
实施例2PAsp0501的生产应用将毛茶按传统的方法进行湿热，随后在毛茶中接种重量比为0.1-0.8％的PAsp0501让其发酵，当堆温升高到30±3℃时，PAsp0501开始进行代谢，并且随着堆温进一步的升高，分泌出大量的葡萄糖淀粉酶、纤维素酶和果胶酶等。这些酶对茶叶中的内含成分进行氧化、水解。其中还原糖、可溶性碳水化合物和水化果胶呈现不断增加的趋势，但由于此时茶叶中除PAsp0501外，还有大量的其它微生物开始滋生，多糖水解产物被这许多的微生物用于生长繁殖所消耗，因此可溶性碳水化合物的含量到出堆时比普洱茶大生产和模拟大生产的都少。同时在出堆茶样中粗纤维的含量也较传统处理的少，这说明，接种PAsp0501到毛茶原料中让其发酵的过程比起大生产和模拟大生产的发酵程度都深，PAsp0501能加速形成普洱茶品质特征和缩短加工时间。
经接种PAsp0501后生产的普洱茶，其品质有明显的提高，普洱茶中的茶多糖含量为2-4％、茶褐素含量为10-12％，形成的普洱茶产品，汤色红浓明亮，滋味甘滑，独特陈香。
权利要求
1.一种黑曲霉真菌，由生产菌株和辅料经初筛、复筛、天然培养基培养、及黑曲霉纯化培养工序后得到，其特征在于生产菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501，保藏日期2005年5月16日，保藏号CGMCC No.1373。
2.权利1所说的黑曲霉真菌，其特征在于该真菌有提高普洱茶品质的作用，可应用于普洱茶的生产工艺中。
全文摘要
本发明涉及一种黑曲霉真菌及其在普洱茶生产中的应用，属生物技术领域。本发明的具有提高普洱茶品质功能的真菌，由生产菌株和辅料经初传统的筛、复筛、天然培养基培养、及黑曲霉纯化培养工序后得到，其特征在于生产菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)PAsp0501，保藏日期2005年5月16日，保藏号CGMCC No.1373。该真菌有提高普洱茶品质的作用，可应用于普洱茶的生产工艺中。本发明的优点在于将PAsp0501按一定的比例用于普洱茶的大生产过程中，其普洱茶中的茶多糖含量为2－4％、茶褐素含量为10－12％，普洱茶的品质有明显的提高，并缩短了加工时间，对普洱茶品质的稳定和提高发挥重要作用。
文档编号A23F3/06GK1752202SQ20051001094
公开日2006年3月29日 申请日期2005年7月28日 优先权日2005年7月28日
发明者周红杰, 龚加顺, 秘鸣, 赵龙飞 申请人:秘鸣