一种奶牛饲料酵母培养物添加剂及其制备方法

专利名称：一种奶牛饲料酵母培养物添加剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物制品技术领域，尤其涉及用于奶牛饲料的生物添加剂及其制备方法。
背景技术：
牛奶被誉为“绿色食品、白色血液”。近年来，随着中国经济持续、稳定的发展和人均生活水平的不断提高，国家和各地方纷纷把奶业列入了突出发展的产业。近几年来，国内乳品市场的规模大幅度增长，从2000年到2005年，奶类产量增长了211.7％，但与发达国家相比，我国奶业的整体发展水平还不高。据权威机构分析，我国城镇居民人均消费每年也只有20公斤左右，是世界平均水平的1/5，而发达国家人均每年消费量则达到320公斤，是我国的16倍，差距极大。牛奶的产量和消费量直接体现了一个国家的国民经济发展水平、农业结构优化程度和国民的营养状况。我国奶业目前的生产与消费水平，与我国整体的经济发展水平是不相符的，根据我国的产业发展政策及经济发展预测，未来的10年中，中国将成为世界上最大的牛奶消费市场。我国奶业的发展存在着极大潜力和市场空间。
乳脂肪是牛奶的主要成分之一，在牛奶中含量一般为3％-5％。由于乳脂率与乳蛋白率、干物质和热能含量等均呈正相关，而且乳脂是左右乳制品风味的主要因子，所以通常把乳脂率视为乳质量的标志。在我国，除黑龙江、内蒙古等地乳脂率可达3.4％-3.6％，其它地区大多在3.0％-3.2％，而在日本目前平均含脂率已达3.8％。而从奶牛单产水平来看，目前我国奶牛年平均单产只有4000千克左右，约为美国奶牛年单产的一半水平。因此，我国奶牛产奶量及奶质与发达国家及地区存在着较大的差距。提高奶牛的产奶量和乳脂率已成为我国当前奶牛产业亟需要解决的问题。
目前在奶牛养殖中，主要通过下面几种方式来提高奶质和奶牛单产一是通过育种手段来提高奶牛的种质质量；二是添加营养物质，改善日粮结构，提高饲养水平；三是通过添加适量优质安全的饲料添加剂，调整奶牛的瘤胃内环境，以改善营养利用和能量转换。因为奶牛生长所需的50％-80％的蛋白质和约80％的能量均由瘤胃内微生物菌群对饲料进行分解后所提供，因此调控瘤胃内环境或直接改变瘤胃微生物的组成是提高奶牛生产性能的重要途径之一。国内外大量的研究表明，在相同的营养条件和饲养水平下，日粮中添加适量奶牛专用的酵母培养物，能有效地促进奶牛瘤胃中微生物总量的增加，尤其是可以有效促进瘤胃中纤维素分解菌和乳酸利用菌的浓度，以加快纤维消化速率和促进瘤胃中pH稳定性，提高饲料的转化及奶牛的采食量，改善挥发性脂肪酸比例，增加氨的利用，增加微生物蛋白质量，提高蛋白质品质，从而提高奶牛的产奶量及奶质。国外大量的应用试验已证明，在奶牛日粮中添加酵母培养物，可提高奶牛的产奶量和乳脂率。同时酵母培养物中，含有丰富的氨基酸、维生素、酶及一些重要的辅助因子，可以有效提高家畜对饲料中粗蛋白、粗纤维、矿物元素、维生素等营养成分及能量的消化、吸收；而作为直接饲用活菌制剂，酵母培养物还能促进幼、病奶牛胃肠发育和功能的恢复提高，进而增强畜体免疫力和抗病力，减少环境应激和生理应激所带来的不利影响，提高奶牛的生产性能。因此，酵母培养物在牛奶生产中具有重要的应用价值和意义。
近十年来，酵母培养物作为一种直接饲用的微生物类饲料添加剂，用以提高反刍动物生产性能，在国内得到较多的关注其中，有研究利用啤酒糟(啤酒酵母)饲喂奶牛，对奶牛产奶有较好的促进作用；中科院畜牧所研究了酵母培养物对瘤胃内微生物区系及日粮发酵的影响，对酵母培养物对反刍动物的作用机理进行了探讨；东北农业大学，申请号为200510009950.1，名称为“改善奶牛生产性能的酵母培养物及其培养方法”的发明专利申请，对以扣囊复膜孢酵母为菌种发酵所制得的产品，有特定的使用时期，主要应用于奶牛泌乳前期(0-140d)，同时其作用仅局限于提高产奶量而未涉及提高奶品质-乳脂率。在国外，如美国，酵母培养物已存在50多年，是一种被广泛接受的饲料产品。据调查，50％的美国奶牛改良协会的顶级牛群和全美国35％以上的商品奶牛在其一种或几种日粮中添加酵母培养物或酵母产品。而在欧盟、澳大利亚、韩国等许多国家在酵母培养的开发及应用上都开展了广泛的研究，并均已形成了物化产品。目前，许多国外生产的奶牛用酵母培养物产品已进入我国市场，如韩国生产的赛克灵、YC-100，美国的益康“XP”等。这些产品在国内进行了应用效果试验，在特定的日粮条件下，对提高奶产量及奶质均有较明显的作用，但国外产品也同时存在下列问题一是价格比较昂贵，如益康“XP”的价格为每吨10000多元；二是不同酵母培养物的作用往往受不同日粮类型及组成的影响较大，而目前国内外的奶牛在日粮类型及饲养水平上还存在着很大的差异，因此尽快地选育出当地的酵母菌种并辅以最佳的制备工艺，开发出能适应我国目前奶牛日粮条件和饲养水平的奶牛饲料酵母培养物添加剂，有着重要的现实意义。

发明内容
本发明目的是，针对国外奶牛饲料酵母培养物添加剂所存在的价格比较昂贵与其作用不适应我国目前奶牛日粮类型及组成等问题，提供一种能适应我国目前奶牛饲料类型及组成的，菌数含量高，原材料丰富，价格低廉，质量稳定，能有效提高产奶量与乳脂率的奶牛专用饲料酵母培养物添加剂；本发明的另一目的是提供制备该添加剂的高效酵母菌株；本发明的再一目的是提供该添加剂的具体制备方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现本发明酿酒酵母菌菌株的分离、筛选与保藏于2001年从杭州、金华及北京、沈阳、南京等不同地区采集堆积牛粪、猪粪、鸡粪的土壤样品，利用不同类菌种常规培养基从中定向分离出酵母菌、放线菌和芽孢杆菌共71株，并进行菌株纯化，其中分离纯化得到酵母菌共21株。将分离获得的酵母菌株和实验室保藏及引进的酵母菌株为对照，共53个分别在无菌操作下，取一环斜面菌种接入60ml PDA马铃薯液体培养基中，于28℃，转速220转/分的摇床中，培养24小时；将培养好的液体菌种，按1％的接种量接入灭菌冷却后的固体发酵培养基(豆粕86％，麸皮7.45％，葡萄糖3.5％，尿素1.0％，K2HPO42.0％，生物素0.05％，)中，搅拌均匀，于28℃培养箱中静置培养64h，出料，于50℃烘干，粉碎后进行有效活菌数测定，根据计数结果从自选的21株酵母菌中初筛得到15株菌数高的菌株。将这15株菌株按上述同样条件发酵烘干后，粉碎，过60目筛，作为待测样品；分别将待测样品按2.5％的添加量(每管200mg)与日粮精粗比为40∶60的日粮(精粮组成10％豆粕、10％菜粕和80％玉米；粗粮组成20％青贮玉米和80％羊草)混合均匀后，加入瘤胃管中，加样时把样品直接送入管底，不能碰壁，以免造成误差；另取当天清晨瘘管羊的瘤胃液，与缓冲液(NH4HCO34.0g；NaHCO335.0g；加蒸馏水至1000ml)按1∶2混合均匀，按每管30ml混合液加入瘤胃管中，与待测样品混匀后，排气，于39℃水浴中，转速为30rpm/min，进行反应，每个样品重复3管，24h后管上的刻度读数即为管内菌株的产气量；根据产气量结果进行数据分析，其中，酿酒酵母菌株WY238与对照组有显著差异，产气量明显高于对照组，因此确定菌株WY238为酵母培养物发酵用菌种并申请菌种保藏，该菌株取样分离自浙江金华。
保藏菌株的形态、培养、生理、生化等特征菌株WY238属酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae Meyen exHansen)；在麦芽汁液体培养基中生长良好，细胞球形，卵形至椭圆形，大小为(4.8-7.2)×(4.8-9.6)um；在麦芽汁琼脂斜面上培养时菌落奶酪状，乳白色，表面平滑，边缘整齐。
该菌株已于2007年4月20日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号CGMCC No.2013。
一种奶牛饲料酵母培养物添加剂，该添加剂可按以下方法制得(1)培养基的配制，其中a)斜面培养基的配制马铃薯葡萄糖固体培养基，备用；b)液体菌种培养基的配制马铃薯葡萄糖液体培养基，备用；c)固体菌种培养基的配制豆粕80-93％，麸皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，备用；(2)斜面菌种的培养将保藏号CGMCC No.2013的酿酒酵母菌株WY238接种于步骤(1)斜面培养基上于28℃的培养箱中培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏备用；(3)液体菌种的制备在无菌操作下，取一环酵母菌株WY238斜面菌种接入60ml步骤(1)液体菌种培养基中，于28℃，转速220转/分的摇床中，培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；(4)固体菌种放大培养将固体培养基与水按1∶1比例混匀，放入灭菌锅中121℃，0.1Mpa，灭菌30分钟，取出自然冷却；按固体培养基重1％吸取液体菌种，接入同等量的无菌水中于室温活化菌种1小时后接入固体培养基；拌匀后放入30℃培养间中，培养72小时后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量产品的制备固体培养基按步骤(4)同样比例条件加水拌匀、灭菌至冷却；按制备菌剂重量的1％称取步骤(4)的固体菌种，放入无菌水中活化菌种一小时后接入固体培养基；放入培养间，关闭门窗，料厚1.5-2厘米，前期室温控制在28℃-30℃，待料温上升至40℃以上后，打开门窗、地上洒水或利用电风扇把料温控制在40℃至50℃，培养72小时后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，装袋后制成奶牛饲料酵母培养物添加剂。
一种制备所述奶牛饲料酵母培养物添加剂的方法，按以下步骤进行(1)培养基的配制其中a)斜面培养基的配制马铃薯葡萄糖固体培养基，备用；b)液体菌种培养基的配制马铃薯葡萄糖液体培养基，备用；c)固体菌种培养基的配制豆粕80-93％，麸皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，备用；(2)斜面菌种的培养将保藏号CGMCC No.2013的酿酒酵母菌株WY238接种于步骤(1)斜面培养基上于28℃的培养箱中培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏备用；(3)液体菌种的制备在无菌操作下，取一环酵母菌株WY238斜面菌种接入60ml步骤(1)液体菌种培养基中，于28℃，转速220转/分的摇床中，培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；(4)固体菌种放大培养将固体培养基与水按1∶1比例混匀，放入灭菌锅中121℃，0.1Mpa，灭菌30分钟，取出自然冷却；按固体培养基重1％吸取液体菌种，接入同等量的无菌水中于室温活化菌种1小时后接入固体培养基；拌匀后放入30℃的培养间中，培养72小时后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量产品的制备固体培养基按步骤(4)同样比例条件加水拌匀、灭菌至冷却；按制备菌剂重量的1％称取步骤(4)的固体菌种，放入无菌水中活化菌种一小时后接入固体培养基；放入培养间，关闭门窗，料厚1.5-2厘米，前期室温控制在28℃-30℃，待料温上升至40℃以上时，打开门窗、地上洒水或利用电风扇把料温控制在40℃至50℃，培养72小时后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，装袋即成产品。
本发明的有益效果1、本发明采用了自行分离、筛选与保藏的酿酒酵母菌株WY238为培养菌种，并通过对该菌的习性研究与各因素的影响试验，确定适合的C、N比，生长温度、接种量和培养基的配方，辅以最适宜的制备工艺与方法，所制菌剂产品能较好适应我国目前奶牛饲料的类型及组成，取得好的饲料添加剂效果。
2、本发明产品所用原料丰富，价格低廉，一吨产品的价格在5000元上下，较进口产品如美国益康“XP”便宜一半左右；同时产品菌数含量较高，一般都在2-7×108个/克左右，而其它产品的菌数一般仅在几千万个左右，产品的质量也较稳定。
3、奶牛饲料中添加本发明酵母培养物后取得了较理想的饲养效果，其中，能增加奶牛对干物质的采食量0.76％-1.95％(见表3)；可提高奶牛产奶量6.97％-8.20％(见表4)，并延缓了产奶量的下降趋势；提高乳脂率3.78％-5.23％，降低乳糖率3.09-4.19％，对乳蛋白率、总固体、非脂乳固体的影响较小(见表5)。
具体实施例方式
本发明通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1(本发明产品的配方与制备方法1)葡萄糖分析纯，国产；尿素46％，国产；K2HPO4分析纯，国产；生物素VB，国产。
奶牛饲料酵母培养物添加剂按以下方法步骤制备(1)培养基的配制，其中固体培养基的配制马铃薯200g、葡萄糖2g、琼脂2g、水1L，备用；液体培养基的配制马铃薯200g、葡萄糖2g、水1L，备用；固体菌种培养基的配制豆粕81％，麸皮15％，葡萄糖2.4％，尿素0.5％，K2HPO41.09％，生物素0.01％；(2)斜面菌种的培养将保藏号CGMCC No.2013的酿酒酵母菌株WY238接种于步骤(1)PDA斜面固体培养基上于28℃的培养箱中培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏备用；(3)液体菌种的制备在无菌操作下，取一环酵母菌株WY238斜面菌种接入60ml步骤(1)PDA液体菌种培养基中，于28℃，转速220转/分的摇床中，培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；(4)固体菌种放大培养将步骤(1)固体菌种放大培养基与水按1∶1比例混匀，放入灭菌锅中121℃，0.1Mpa，灭菌30分钟，取出自然冷却；按固体培养基重1％吸取液体菌种，接入同等量的无菌水中于室温中放置1个小时后接入固体培养基；拌匀后放入30℃的培养间中，培养72小时后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量产品的制备将步骤(1)固体菌种批量产品培养基以1∶1的比例加水搅拌均匀，在121℃，0.1Mpa，灭菌30分钟，取出冷却备用；按制备菌剂重量的1％称取步骤(4)的固体菌种，放入无菌水中活化菌种一小时后接入固体培养基，拌匀；放入培养间，关闭门窗，料厚1.5-2厘米，前期室温控制在28℃-30℃，待料温上升至40℃以上时，打开门窗、地上洒水或利用电风扇把料温控制在40℃至50℃，培养72小时后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，装袋即成产品。
实施例2(本发明产品的配方与制备方法2)本实施例固体菌种放大培养基与固体菌种批量产品培养基，均按豆粕86％，麸皮7.45％，葡萄糖3.5％，尿素1％，K2HPO42％，生物素0.05％的比例进行配比，其余制备方法均同于实施例1；实施例3(本发明产品的配方与制备方法3)批量产品制备时的固体菌种培养基，按豆粕88.5％，麸皮3％，葡萄糖4％，尿素1.4％，K2HPO43％，生物素0.10％的比例进行配比外，其余制备方法均同于实施例1；试验例4(本发明产品与现有产品的应用效果对比试验)选择健康的荷斯坦泌乳牛33头，按年龄、胎次、泌乳天数与日产奶量相近的进行随机区组设计，分成试验I组、试验II组及CK，每组11头，CK为对照组。预试期各组奶牛产奶量差异不显著(p＞0.05)，详见表1。
表1供试牛的基本情况

试验在浙江东兴实业有限公司伊康乳业分公司的奶牛场内进行，于2006年10月21日开始，预试期10天，11月1日进入正试期，2007年1月1日结束，试验期60天。
三组营养水平完全相同(见表2)。正试期开始后，其它条件不变，试验I组、试验II组的日粮是在对照组日粮的基础上分别添加实施例2的酵母培养物120g/头·日和250g/头·日，添加的酵母培养物与TMR混合后，每天一次性饲喂。对照组日粮中不添加任何抗生素或药物添加剂。各组TMR配方完全相同，并且同一车搅拌完成。
表2试验奶牛日粮配方及营养水平

试验牛的饲养管理和生活环境完全相同，并有专人饲养、挤奶。牛只编号后在开放式固定槽位栓系饲养，固定料桶饲喂，自由饮水。每天分早、中、晚三次定量定位饲喂，三次机械挤奶，每次挤奶后由专人负责称量记录；每5天收集奶样(每天三次奶的混合)测定乳脂率、乳糖率、乳蛋白率、总固体、非脂乳固体；TMR(Total Mixed Ration)喂量每次饲喂前由专人负责称量上槽，以组为单位每天记录每组牛的采食量，并取样测定含水量以计算每头牛每天的平均干物质采食量。
实验结果表3添加YC对奶牛干物质采食量和日增重的影响

注在任意三个均数后用相同字母，表示三者差异不显著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差异显著(p＜0.05)。
表4试验前后及试验各组产奶量的比较

注在任意三个均数后用相同字母，表示三者差异不显著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差异显著(p＜0.05＝。
表5添加YC对试验期乳成分的影响

注在任意三个均数后用相同字母，表示三者差异不显著(p＞0.05)，用不同字母表示三者差异显著(p＜0.05)。
小结3.1日粮中添加酵母培养物能显著提高奶牛日增重，酵母培养物通过维持瘤胃pH稳定，从而增加纤维消化菌、乳酸利用菌等有益微生物的数量，提高饲料纤维消化率，增加可用营养素，提高日增重。与对照组相比，试验I组、试验II组的日增重分别增加8.59％和15.04％，与对照组差异显著。结果说明，添加酵母培养物能提高奶牛日增重，促进奶牛体重的恢复，添加量为250g/头·日的试验II组效果更好。
3.2从试验结果可知，添加酵母培养物对奶牛产奶量有一定影响。试验期奶牛处于产奶中后期，产奶量呈逐渐下降的趋势，对照组产奶量的下降幅度为8.42％，而添加酵母培养物的试验I组、试验II组的下降幅度分别为2.02％和0.86％，与对照组有显著差异，说明添加酵母培养物能延长奶牛的泌乳高峰期，延缓产奶量的下降，从而增加奶牛的产奶量；试验期内试验I组、试验II组的产奶量分别比对照组提高6.97％和8.20％，差异显著，而日喂250g/头·日的试验II组的效果更佳。
3.3添加酵母培养物对对提高奶牛的乳成分，特别是乳脂率有一定的促进作用。试验I组、试验II组的乳脂率分别比对照组提高3.78％和5.23％，这可能是因为使用YC后，牛瘤胃中帮助消化的有益细菌增加，纤维分解菌和乳酸利用菌的数量增加，改善了牛瘤胃内的代谢，促进了纤维素等消化，增加了乳脂的合成原料，从而增加牛乳乳脂率。对其它乳成分的影响不大。
权利要求
1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Meyen ex Hansen)菌株WY238，其菌株保藏号为CGMCC No.2013。
2.一种奶牛饲料酵母培养物添加剂，该添加剂可用下述方法制得(1)培养基的配制，其中a)斜面培养基的配制马铃薯葡萄糖固体培养基，备用；b)液体菌种培养基的配制马铃薯葡萄糖液体培养基，备用；c)固体菌种培养基的配制豆粕80-93％，麸皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，备用；(2)斜面菌种的培养将保藏号CGMCC No.2013的酿酒酵母菌株WY238接种于步骤(1)斜面培养基上，于28℃培养箱中培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏备用；(3)液体菌种的制备在无菌操作下，取一环酿酒酵母菌株WY238斜面菌种接入60ml步骤(1)液体菌种培养基中，于28℃，转速220转/分，摇床培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；(4)固体菌种放大培养将固体培养基与水按1∶1比例混匀，放入灭菌锅中121℃，0.1Mpa，灭菌30分钟取出自然冷却；按固体培养基重1％吸取液体菌种，活化1个小时后接入固体培养基；拌匀后放入30℃培养间，培养72小时后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量产品的制备固体培养基按步骤(4)同样比例条件加水拌匀、灭菌至冷却；按制备菌剂重量的1％称取步骤(4)的固体放大菌种，活化一小时后接入固体培养基；放入培养间，关闭门窗，料厚1.5-2厘米，前期室温控制在28℃-30℃，待料温上升至40℃以上后，控制在40℃至50℃，培养72小时后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，装袋后制成奶牛饲料酵母培养物添加剂。
3.一种制备权利要求1所述添加剂的方法，其特征在于按以下步骤(1)培养基的配制其中a)斜面培养基的配制马铃薯葡萄糖固体培养基，备用；b)液体菌种培养基的配制马铃薯葡萄糖液体培养基，备用；c)固体菌种培养基的配制豆粕80-93％，麸皮3-15％，葡萄糖2-5％，尿素0.5-1.5％，K2HPO41-3％，生物素0.01-0.10％，备用；(2)斜面菌种的培养将保藏号CGMCC No.2013的酿酒酵母菌株WY238接种于步骤(1)斜面培养基上，于28℃培养箱中培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏备用；(3)液体菌种的制备在无菌操作下，取一环酿酒酵母菌株WY238斜面菌种接入60ml步骤(1)液体菌种培养基中，于28℃，转速220转/分，摇床培养24小时，取出直接应用或放入冰箱中冷藏，备用；(4)固体菌种放大培养将固体培养基与水按1∶1比例混匀，放入灭菌锅中121℃，0.1Mpa，灭菌30分钟，取出自然冷却；按固体培养基重1％吸取液体菌种，接入同等量的无菌水中于室温活化菌种1小时后接入固体培养基；拌匀后放入30℃的培养间，培养72小时后取出，放入45℃-50℃的烘房中烘干；(5)批量产品的制备固体培养基按步骤(4)同样比例条件加水拌匀、灭菌至冷却；按制备菌剂重量的1％称取步骤(4)的固体放大菌种，放入无菌水中活化菌种一小时后接入固体培养基；放入培养间，关闭门窗，料厚1.5-2厘米，前期室温控制在28℃-30℃，待料温上升至40℃以上时，打开门窗、地上洒水或利用电风扇把料温控制在40℃至50℃，培养72小时后放入45℃-50℃的烘房中烘干，粉碎，装袋即成产品。
全文摘要
本发明公开了一种奶牛饲料酵母培养物添加剂及其制备方法，属于奶牛饲料生物添加剂及其制备技术领域。该添加剂可用以下方法制备以菌株保藏号CGMCC No.2013的酿酒酵母菌株WY238为菌种，经培养基的配制；斜面菌种与液体菌种的培养；固体菌种放大和批量产品的培养等步骤制备而成。本发明产品能较好适应我国目前奶牛饲料的类型及组成；所用原料丰富，价格低廉；产品菌数含量高，质量稳定，能增加奶牛对干物质的采食量0.76％－1.95％，可提高奶牛产奶量6.97％－8.20％，并提高乳脂率3.78％－5.23％，取得较好的饲料添加剂效果。可在添加剂生产与奶牛饲养业推广应用。
文档编号A23L1/16GK101040691SQ200710068199
公开日2007年9月26日 申请日期2007年4月25日 优先权日2007年4月25日
发明者汤江武, 姚晓红, 吴逸飞, 吴新民 申请人:浙江省农业科学院