专利名称：：新品种鲤鱼的选育方法
技术领域：
：本发明涉及一种鱼类新品种的选育方法。技术背景鲤鱼是我国乃至世界最大的水产养殖鱼种，目前主要是采用群体选育、种内杂交或雌核发育等手段进行鲤鱼的养殖和培育。群体选育是以表型选择为主，在育种前由于不清楚选育对象的遗传组成，所以易产生近亲交配，导致鲤鱼经济性状和生产性能下降，从而出现经济性状衰退的现象。鲤鱼种内杂交随机性大，选育优良品种的概率低，而且也容易发生近亲交配，导致鲤鱼经济性状和生产性能下降。
发明内容本发明的目的是为解决目前鲤鱼养殖和培育中群体选育方法存在易产生近亲交配，导致经济性状和生产性能下降；种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，也容易发生近亲交配的问题，而提供的一种新品种鲤鱼的选育方法。本发明新品种鲤鱼按以下步骤选育一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。本发明步骤一中表型性状挑选公式为Xn=i±2S，公式中Xn为亲本的表型性状测定值，义为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差。步骤二检测亲本间的遗传信息a.提取繁殖亲本DNA;b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息。本发明方法在选育鲤鱼新品种的过程中始终利用分子标记检测亲本与子代的遗传组成，从而可避免近亲交配，而且鲤鱼新品种的性状按所设定的方向发展，优良新品种的出现概率高，其经济性状和生产性能显著提高。具体实施方式具体实施方式一本实施方式新品种鲤鱼按以下步骤选育一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。本实施方式可根据需求进行设计，如选择培育鳞被、生长速度快、饲料转化率高、肉质好等性状的鲤鱼新品种。本实施方式还可以根据选育目标对外观与体型等不可量化的表型性状进行挑选。本实施方式步骤三中繁殖亲本所分成的繁殖群体个数越多越好，可提供更多的选择，并提高出现优良新品种的数量及机会。本实施方式将经济性状的优势基因型一代一代地富集起来，从而实现选育出经济性状优异、生产性能高、遗传性状稳定的鲤鱼新品种的目标。具体实施方式二本实施方式与具体实施方式一的不同点是步骤一中表型性状挑选公式为Xn^C士2S，公式中Xn为亲本的表型性状测定值，义为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差。其它步骤及参数与实施方式一相同。由选择强度可知1倍S则选择强度最高，2倍S则选择强度中等，3倍S则选择强度最低，因此本实施方式将大于表型性状平均值+二倍标准差和小于表型性状平均值-二倍标准差的鲤鱼个体舍去。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一的不同点是步骤二检测亲本间的遗传信息a.提取繁殖亲本DNA;b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息。其它步骤及参数与实施方式一相同。本实施方式中要对提取过DNA的繁殖亲本进行标记，可采用电子标记、常规标记方法(剪取背鳍、系不同颜色的塑料管等其它物理标记方法)或分池饲养。本实施方式也可以不使用全部30对微卫星引物，而只选用其中部分的微卫星引物(但必须多于25对微卫星引物)进行PCR扩增。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式三的不同点是步骤b中每对微卫星引物的PCR反应总体积为25pL由18piLPCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、lpL微卫星引物、lUTaq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmo1pH值为8.3的Tris，Cl、1.25mmo1KC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP和余量的去离子水组成。其它步骤及参数与实施方式三相同。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式三的不同点是步骤b中PCR反应程序为94。C预变性3min，94。C变性30sec，退火30s，72。C延伸30s,循环38次，最后72'C延伸5min。其它步骤及参数与实施方式三相同。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式三的不同点是步骤b中选用的30对微卫星引物及其退火温度如表1所示。其它步骤及参数与实施方式三相同。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>具体实施方式七本实施方式与具体实施方式三的不同点是步骤d中使用的亲缘分析软件为POPGENEN软件和PHYLIP软件。其它步骤及参数与实施方式三相同。具体实施方式八本实施方式与具体实施方式三的不同点是步骤CPCR扩增产物先在电压为200V的条件下凝胶电泳2h，然后GoldView染色，再以溴酚蓝为凝胶上样液凝胶电泳，之后用凝胶成像仪记录电泳结果并用图谱分析软件进行数字化处理。其它步骤及参数与实施方式三相同。本实施方式所用的凝胶为浓度为2%的琼脂糖凝胶。具体实施方式九本实施方式与具体实施方式三或八的不同点是步骤C中使用的图谱分析软件为Gel-pro4.5软件。其它步骤及参数与实施方式三或八相同。具体实施方式十本实施方式新品种鲤鱼按以下步骤选育步骤一、根据新品种生长速度快、体重大的设计要求对国家换新良种场的400尾镜鲤亲鱼进行表型性状挑选，挑选公式为Xn=5C±2S，公式中Xn为亲本的体长、体重表型性状测定值，灭为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差，将大于表型性状平均值+二倍标准差和小于表型性状平均值-二倍标准差的鲤鱼个体舍去，复合要求的鲤鱼作为繁殖亲本。步骤二、检测亲本间的遗传信息a.提取繁殖亲本DNA对繁殖亲本进行常规物理标记，标记的同时一对一的剪取鳍条0.080.12克，放到有与繁殖亲本标记相同的离心管(可放入冰箱待用或直接用于提取DNA);向离心管中加入0.5mL裂解液(每升裂解液中含有浓度为0.5%(W/V)的十二垸基肌氨酸钠5g、蛋白酶K200mg和浓度为0.5mol/L的EDTA200mL)后在5(TC条件下消化lh，消化液再放入68。C的环境中处理15min;之后用与消化液等体积的提取液(提取液由酚、氯仿和异戊醇组成，酚、氯仿与异戊醇的体积比为25:24:1)抽提2次；然后用无DNA的RNA酶消化其中含有的RNA,并用提取液(同上)抽提2次；再经数次透析(每升透析液中含有50mmo1pH值为8.0Tris'Cl、10mmolEDTA、lOmmolNaCl)直到OD270<0.05;向透析液中加入透析液体积2倍的冰预冷的无水乙醇，经沉淀后离心除上清液，再向沉淀中加入与沉淀等体积的冰预冷的质量浓度为70%乙醇洗涤，并离心除去上清液在室温条件下干燥，再用O.IXTE缓冲液溶解。(或者按现有其它标准方法提取可进行PCR分析所用的DNA样品，样品应置于4'C环境中保存备用)b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增每对微卫星引物的PCR反应总体积为25pL由18pLPCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、lpL微卫星引物、lUTaq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmo1pH值为8.3的Tris*Cl、1.25mmolKC1、0.0375mmolMgCl2、0.25mLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP(4种dNTP每种dNTP在PCR反应缓冲液中的浓度各为0.25mmol/L)和余量的去离子水组成；PCR反应程序为94'C预变性3min，94'C变性30sec，退火30s，72。C延伸30s，循环38次，最后72'C延伸5min;其中选用的30对微卫星引物及其退火温度如表1所示。c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理PCR扩增产物先在电压为200V的条件下凝胶电泳2h，然后GoldView染色，再以溴酚蓝为凝胶上样液凝胶电泳，之后用凝胶成像仪记录电泳结果并用图谱分析软件Gd-pro4.5进行数字化处理。d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算使用的亲缘分析软件为POPGENEN软件和PHYLIP软件进行亲缘分析和计算，获得繁殖亲本的遗传信息(可以根据遗传信息剔除劣质个体)。步骤三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本分成8个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离。(本实施方式中每个雌性亲本在群体中平均有近亲雄鱼2.5个，选择无近亲关系或遗传距离大于三代家系间近亲的遗传距离即遗传距离大于0.20的亲本进行配组，去除掉遗传距离小于0.20且近亲关系重的无法配组的个体。)步骤四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟步骤五、以子代鲤鱼作为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体成为生长速度快、体重大的新品种鲤鱼。本实施方式得到两个新品种鲤鱼。将国家换新良种场的另外400尾镜鲤作为对照组、兴国红鲤作为空白组与本实施方式两个新品种鲤鱼进行对比。在养殖条件相同的情况下，本实施方式两个新品种鲤鱼分别比对照组生长速度平均快18.45%和8.56%，比空白组生长速度平均快131.38%和112.07%;本实施方式两个新品种鲤鱼个体的体重分别比对照组的平均重15%和8%，比空白组平均重120%和110%。序列表<110>中国水产科学研究院黑龙江水产研究所<120>新品种鲤鱼的选育方法<160>60<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座Cca04设计微卫星引物(1)的上游引物<>1atcccttaccgccctgtgt19<210>2<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座Cca04设计微卫星引物(1)的下游引物<400>2agctgaaaaacgctgtcacg20<210>3<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ019设计微卫星引物(2)的上游引物<400>3actgctggctcaggaaca18<210>4<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ019设计微卫星引物(2)的下游引物<400>4agagcaaagatggtagctc19<210>5_<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ037设计微卫星引物(3)的上游引物<400>5cgtggaggcataagggat18<210>6，<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ037设计微卫星引物(3)的下游引物<400>6acgggagcgtac卿aat18<210>7<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ038设计微卫星引物(4)的上游引物<400>7cacagaacgcatcagtaa18<210>8<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ038设计微卫星引物(4)的下游引物<400>8tgtaaaccttcaacctcc18<210>9<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ041设计微卫星引物(5)的上游引物<400>9agaccaccgcagtaacaa18<210>10<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ041设计微卫星引物(5)的下游引物<400>10gactcactcagcaccaga18<210>11<211>17<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ044设计微卫星引物(6)的上游引物<400>11gtacagcgtgacagcat17<210>12<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ044设计微卫星引物(6)的下游引物<400>12aagttcatcggtgtcctc18<210>13<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ046设计微卫星引物(7)的上游引物<400>13aaccctgaactcacaaac18<210>14<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ046设计微卫星引物(7)的下游引物<400>14cacggaaactgagaagac18<210>15<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ049设计微卫星引物(8)的上游引物<400>15gatttgtgctcctcaacc18<210>16<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根据基因座HLJ049设计微卫星引物(8)的下游引物<400>16ctgtcacttctccttcca18<210>17<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ055设计微卫星引物(9)的上游引物<400>17ggtacaacgggaeiccaca18<210>18<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ055设计微卫星引物(9)的下游引物<400>18tgattgacaggcagtggg18<210>19<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ058设计微卫星引物(10)的上游引物<400>19c卿tggcagacaggtaa18<210>20<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ058设计微卫星引物(10)的下游引物<400>20gagcaagtgagggaacag18<210>21<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ060设计微卫星引物(11)的上游引物<400>21'cgatcactggcaagatta18<210>22<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ060设计微卫星引物(11)的下游引物<400>22atggactacacctcaccc18<210>23<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ338设计微卫星引物(12)的上游引物<400>23ga卿atgggtgELgta卿19<210>24<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ338设计微卫星引物(12)的下游引物<400>24actaggatttggaagagc18<210>25<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ372设计微卫星引物(13)的上游引物<400>25tctacttctaccgccact18<210>26<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ372设计微卫星引物(13)的下游引物<400>26gactattcacctgcatctt19<210>27<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ379设计微卫星引物(14)的上游引物<400>27gggg卿cgaga站tgca18<210〉28<211>18<212〉DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ379设计微卫星引物(14)的下游引物<400>28agcaggtctgtgggcaag18<210>29<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ380设计微卫星引物(15)的上游引物<400>29aggcagacgaiaaggtaaa18<210>30<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ380设计微卫星引物(15)的下游引物<400>30ctcgcttctgtaggcatt18<210>31<211>18—<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ383设计微卫星引物(16)的上游引物<400>31ggctcctcctcatcctct18<210>32<211>18<212>D^A<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ383设计微卫星引物(16)的下游引物<400>32gcacttctgcacctttca18<210>33<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ392设计微卫星引物(17)的上游引物<400>33ggctacaaggcaacactg18<210>34<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223〉根据基因座HLJ392设计微卫星引物(17)的下游引物<400>34tgcggttaatgaggtctg18<210>35<211>19<212>DNA<213>人工序列<220〉<223>根据基因座HLJ393设计微卫星引物(18)的上游引物<400>35tgcggtcattactcattcg19<210>36<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ393设计微卫星引物(18)的下游引物<400>36cccagcacctgtttccac18<210>37<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ398设计微卫星引物(19)的上游引物<400>37cattacttgaactatcatcca21<210>38<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ398设计微卫星引物(19)的下游引物<400>38tgtgctgaggattattgg18<210>39<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ400设计微卫星引物(20)的上游引物<400>39aagaagcctcggtcctcc18<210>40<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ400设计微卫星引物(20)的下游引物<400>40aaagcccaaagcscatca18<210>41<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ805设计微卫星引物(21)的上游引物<400>41tctgctgaagggcgaaca18<210>42<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ805设计微卫星引物(21)的下游引物<400>42acgatcacgctgcgacta18<210>43<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ806设计微卫星引物(22)的上游引物<400>43ggtgtcaggctttagtcc18<210>44<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ806设计微卫星引物(22)的下游引物<400>44catctgagttttctccaagt20<210>45<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ809设计微卫星引物(23)的上游引物<400>45atcatcacagccaasgaagt20<210>46<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ809设计微卫星引物(23)的下游引物<400>46tacggacatagtgc卿caa20<210>47<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ817设计微卫星引物(24)的上游引物<400>47gacgatccagcagcaatg18<210>48<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ817设计微卫星引物(24)的下游引物<400>48ctcttcctaaagcctcaaa19<210>49<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ848设计微卫星引物(25)的上游引物<400>49g卿acacggctggatgg18<210>50<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ84S设计微卫星引物(25)的下游引物<400>50gtgggtgtttgaattgagat20<210>51<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ855设计微卫星引物(26)的上游引物<400>51cgaccgaactcagaacac18<210>52<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ855设计微卫星引物(26)的下游引物<400>52gagcaccgcattaacaga18<210>53<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ873设计微卫星引物(27)的上游引物<400>53agtgtcgtttatgcgtatctt21<210>54<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ873设计微卫星引物(27)的下游引物<400>54agctcgcctactcttctact20<210>55<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ878设计微卫星引物(28)的上游引物<400>55agtgg鄉acgtgacagt18<210>56<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ878设计微卫星引物(28)的下游引物<400>56aagc卿gcctgatttga18<210>57<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HU896设计微卫星引物(29)的上游引物<400>57atcaccagtacattcact18<210>58<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ896设计微卫星引物(29)的下游引物<400>58cgtttagcaaaggttagt18<210>59<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ900设计微卫星引物(30)的上游引物<400>59aaggacgacggaaggttt18<210>60<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>根据基因座HLJ900设计微卫星引物(30)的下游引物<400>60acactgacgggtca卿g18权利要求1、新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于新品种鲤鱼按以下步骤选育一、根据新品种性状的设计要求进行表型性状挑选，符合要求的鲤鱼作为繁殖亲本；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组，繁殖亲本至少分成2个繁殖群体，每个繁殖群体中任意一对雌雄个体间的遗传距离应大于家系三代间的遗传距离；四、繁殖群体内自由交配、培育子代鲤鱼性成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到子代鲤鱼群体达到新品种性状设计要求，即得到新品种鲤鱼。2、根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤一中表型性状挑选公式为Xn^C士2S，公式中Xn为亲本的表型性状测定值，5C为鲤鱼群体表型性状的平均值，S为鲤鱼群体表型性状的标准差。3、根据权利要求1所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤二检测亲本间的遗传信息a.提取繁殖亲本DNA;b.繁殖亲本DNA均用30对微卫星引物分别进行PCR扩增；c.利用图谱分析软件对PCR扩增产物进行数字化处理；d.数字化数据导入亲缘分析软件分析计算，获得遗传信息。4、根据权利要求3所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中每对微卫星引物的PCR反应总体积为25pL由18nLPCR反应缓冲液、50ng繁殖亲本DNA、1^L微卫星引物、lUTaq聚合酶和余量的无菌超纯水制成；其中PCR反应缓冲液每升由0.25mmolpH值为8.3的Tris，Cl、1.25mmolKCl、0.0375mmolMgCl2、0.25rnLGelatin、2.5mLTween、2.5mLNP-40、0.02mmoldNTP和余量的去离子水组成。5、根据权利要求3所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中PCR反应程序为94。C预变性3min，94。C变性30sec，退火30s，72。C延伸30s，循环38次，最后72。C延伸5min。6、根据权利要求3所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤b中选用的30对微卫星引物及其退火温度分别为微卫星引物(1)上游引物ATCCCTTACCGCCCTGTGT下游引物AGCTGAAAAACGCTGTCACG退火温度为50°C，微卫星引物(2)上游引物ACTGCTGGCTCAGGAACA下游引物AGAGCAAAGATGGTAGCTC退火温度为53°C，微卫星引物(3)上游引物CGTGGAGGCATAAGGGAT下游引物ACGGGAGCGTACAGAAAT退火温度为53°C，微卫星引物(4)上游引物CACAGAACGCATCAGTAA下游弓l物TGTAAACCTTCAACCTCC退火温度为53°C，微卫星引物(5)上游引物AGACCACCGCAGTAACAA下游引物GACTCACTCAGCACCAGA退火温度为53°C，微卫星引物(6)上游引物GTACAGCGTGACAGCAT下游引物AAGTTCATCGGTGTCCTC退火温度为53°C，微卫星引物(7)上游引物AACCCTGAACTCACAAAC下游引物CACGGAAACTGAGAAGAC退火温度为53°C，微卫星引物(8)上游引物GATTTGTGCTCCTCAACC下游弓l物CTGTCACTTCTCCTTCCA退火温度为54°C，微卫星引物(9)上游引物GGTACAACGGGAACCACA下游引物TGATTGACAGGCAGTGGG退火温度为54°C，微卫星引物(10)上游引物CAGATGGCAGACAGGTAA下游引物GAGCAAGTGAGGGAACAG退火温度为53°C，微卫星引物(11)上游引物CgATCACTGGCAAGATTA下游弓l物ATGGACTACACCTCACCC退火温度为54°C，微卫星引物(12)上游引物GAAGAATGGGTGAGTAAGA下游引物ACTAGGATTTGGAAGAGC退火温度为51°C，微卫星弓l物(13)上游弓l物TCTACTTCTACCGCCACT退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为-微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:微卫星引物退火温度为:下游引物:54°C，(14)上游引物:下游引物-54°C，(15)上游引物:下游引物:54°C，(16)上游引物:下游引物-5rc，(17)上游引物:下游引物:54°C，(18)上游引物:下游引物:54°C，(19)上游引物:下游引物:54°C，(20)上游引物:下游引物:51°C，(21)上游引物:下游引物:48°C，(22)上游引物:下游引物:48°C，(23)上游引物:下游引物:48°C，GACTATTCACCTGCATCTTGGGGAGACGAGAAGTGCAAGCAGGTCTGTGGGCAAGAGGCAGACGAAAGGTAAACTCGCTTCTGTAGGCATTGGCTCCTCCTCATCCTCTGCACTTCTGCACCTTTCAGGCTACAAGGCAACACTGTGCGGTTAATGAGGTCTGTGCGGTCATTACTCATTCGCCCAGCACCTGTTTCCACCATTACTTGAACTATCATCCATGTGCTGAGGATTATTGGAAGAAGCCTCGGTCCTCCAAAGCCCAAAGCACATCATCTGCTGAAGGGCGAACAACGATCACGCTGCGACTAGGTGTCAGGCTTTAGTCCCATCTGAGTTTTCTCCAAGTATCATCACAGCCAAAGAAGTTACGGACATAGTGCAGACAA微卫星引物退火温度为微卫星引物退火温度为微卫星引物退火温度为微卫星引物退火温度为微卫星引物退火温度为微卫星引物退火温度为微卫星引物退火温度为(24)上游引物:下游引物:48°C,(25)上游引物:下游引物::48°C,(26)上游引物:下游引物::48。C，(27)上游引物:下游引物::48°C，(28)上游引物:下游引物::54°C，(29)上游引物:下游引物-:53。C，(30)上游引物:下游引物::50°C。GACGATCCAGCAGCAATGCTCTTCCTAAAGCCTCAAAGAGAACACGGCTGGATGGGTGGGTGTTTGAATTGAGATCGACCGAACTCAGAACACGAGCACCGCATTAACAGAAGTGTCGTTTATGCGTATCTTAGCTCGCCTACTCTTCTACTAGTGGAGGACGTGACAGTAAGCAGAGCCTGATTTGAATCACCAGTACATTCACTCGTTTAGCAAAGGTTAGTAAGGACGACGGAAGGTTTACACTGACGGGTCAAGAG7、根据权利要求3所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤d中使用的亲缘分析软件为POPGENEN软件和PHYLIP软件。8、根据权利要求3所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤cPCR扩增产物先在电压为200V的条件下凝胶电泳2h，然后GoldView染色，再以溴酚蓝为凝胶上样液凝胶电泳，之后用凝胶成像仪记录电泳结果并用图谱分析软件进行数字化处理。9、根据权利要求3或8所述的新品种鲤鱼的选育方法，其特征在于步骤c中使用的图谱分析软件为Gel-pro4.5软件。全文摘要新品种鲤鱼的选育方法，它涉及一种鱼类新品种的选育方法。它解决了目前鲤鱼养殖和培育中群体选育方法存在易产生近亲交配，导致经济性状和生产性能下降；种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，也容易发生近亲交配问题。选育步骤一、表型性状挑选；二、检测亲本间的遗传信息；三、根据遗传信息进行繁殖配组；四、培育子代成熟；五、以子代鲤鱼为新一代繁殖亲本，重复操作步骤一至四，直到鲤鱼达到新品种性状设计要求。本发明方法在选育鲤鱼新品种的过程中始终利用分子标记检测亲本与子代的遗传组成，从而可避免近亲交配，而且鲤鱼新品种的性状按所设定的方向发展，优良新品种的出现概率高，其经济性状和生产性能显著提高。文档编号C12Q1/68GK101120666SQ20071014436公开日2008年2月13日申请日期2007年9月26日优先权日2007年9月26日发明者匡友谊,孙效文,曹顶臣,梁利群,鲁翠云申请人:中国水产科学研究院黑龙江水产研究所