专利名称：一种新型虫草菌及其人工栽培虫草的方法
技术领域：
生物技术
背景技术：
虫草类真菌指能以昆虫的活体或尸体为寄主来完成其生活史的一类真菌。全世界报道 虫草己有400余种，我国报道近120种，约占世界总数的四分之一。虫草属Confyce;w (Fr.) Link.是一种营腐寄生菌。冬虫夏草寄生于蝙蝠蛾幼虫，这种虫被感染此菌后，就会得病死 亡，到一定的时侯从虫体头上长出子座(即虫草)。根据最新的真菌分类系统，虫草类真 菌隶属于子囊菌门(^scwwjcoto )，核菌纲(/、TO朋附j;cetes )，肉座菌目(/fy;wcretffes )，麦角 菌科(aaw'";p"flcefle )。现已报道的冬虫夏草无性型主要有虫草多毛孢(/^^^//" Z e/wY0，中 国被毛孢(州rswfe〃a w'"era/"、蝙蝠蛾拟青霉CPae"7om少c" /2印/a//)、 中国拟青霉 (尸ae"7om^c^Z"e ")、 蝙蝠蛾被孢霉(Mwriere/Za Ae/ i'a//)、 虫草头孢霉(Cep/w/ay; w/固 w'"em^)、蝙蝠蛾柱霉(5fc)他/icfe附/j印ia/e)、中国弯颈霉(7b/;;;wc/c^Mm i7> emis)、中国金孢 霉(C7w7TO^wWM7n w'"ms的、葡萄穗霉属CStoc/ y6oroa)等。虫草的人工栽培是极其复杂的 生理过程，它受品种、昆虫、气侯、环境等特殊要求，栽培技术受以下因素影响。1、栽 培条件虫草菌最主要来源于寄主昆虫，昆虫目前主要靠野生采集，人工繁殖这种昆虫
还有一定的困难，它制约了人工栽培的进展。2、菌种虫草的栽培首先要有优良的纯菌 种，目前全国的品种很多， 一是要选择纯度高、无杂菌、无老化的菌种；二是要选择感染 力强，菌种有较强的生命力，能对昆虫迅速感染得病死亡的品种；三是要选择适应范围广， 特别是对环境湿度变化和其它杂菌感染要有一定的抵抗能力的品种。3、栽培方式 一种 是利用昆虫栽培出与野生一样的虫草；另一种是用大米合成培养基、PDA培养基或其它固 体培养基直接培养子实体。
发明内容
本发明的目的是提供一种菌株6eafefowow7to/n X丄.Jiang, sp. nov. FCHC47, 并利用该菌株进行虫草栽培的方法。
本发明所涉及的菌株分离自一株来源于长白山余脉大青沟风景区采集的虫草，寄主为 鳞翅目大蚕蛾科的柞蚕蛹(Antherea pemyi Guerin-Meneville)的菌株历r;n/te/to 6eafc/"/woM"to'" X丄.Jiang, sp. nov. FCHC47，保藏单位简称CCTCC，保藏号为M 207152。本发明的特点是首次分离出 一株///rawfe〃" 6etf^/M附o""to/" X丄.Jiang， sp. nov. FCHC47菌
株。根据微生物分类学，菌物大全，真菌鉴定手册的结果，本发明涉及菌株的形态特征和 18S rDNA基因测序鉴定为///MJ^/to 6eafe/wno冊to/" X丄.Jiang, sp. nov. FCHC47。并发明
了其在人工培养基上进行虫草栽培的方法。该发明的优点是分离出一株新型虫草菌并应用 该菌种进行人工培养子实体和以柞蚕蛹为寄主的虫草的栽培方法，栽培方法简单，栽培条 件易与控制，可进行产业化栽培，提供了一种新型人工培养虫草资源。
图l:人工培养子实体图片。
图2:柞蚕蛹为寄主培养全草图片。
具体实施方式
实施例1
1. /f/rwrfe〃a 6eafc/wmoMWtoz'" X丄.Jiang， sp. nov. FCHC47菌株的分离纯化
采集长白山余脉大青沟风景区的虫草，寄主为鳞翅目大蚕蛾科的柞蚕蛹(Antherea pemyi Guerin-Meneville)，从僵虫体表切下子座，用0.1%升汞溶液，用无菌水清洗表面药 液，置于切取无菌部位组织块压入培养基(土豆200g，蔗糖20g，蛋白胨lg，酵母膏3g， K2HP04 1.5g， MgS04 0.5g， VBi适量)中；培养条件为22-24°C,培养时间为7-10天。待 培养基表面出现星芒状虫草菌落时，挑取单个菌落置试管斜面培养基培养。该菌株在培养 基(土豆200g，蔗糖20g，蛋白胨lg，酵母膏3g， K2HP041.5g， MgS04 0.5g， VBt适量) 上25。C， 15天菌落直径2.2 3.0cm，正面褐色至白色，绒毛状，中间具有放射状突起；背 面为棕褐色。菌丝无色，宽约2.0 3.5^m。分生孢子透明，无分隔，卵形或者拟卵形，聚 集成团，外面被粘液包被，2.7 4.2x6.3 9.9pm。分生孢子梗，瓶形向上逐渐变细长，最 宽部直径3.4 5.5nm，长度38.4 59拜。该菌株的18S rDNA基因测序结果为AACGGAGACCTTGTTACGACTTTTACTTCCAAT
根据微生物分类学，菌物大全，真菌鉴定手册的结果，本发明涉及菌株的形态特征和 18S rDNA基因测序鉴定为///ry^e〃fl 6eafe/wmoMWto/" X丄.Jiang, sp. nov. FCHC47。
2. 制备菌种
将液体培养基(土豆200g，蔗糖20g，蛋白胨lg，酵母膏3g， K2HP04 1.5g， MgSO40.5g， VB!适量，配制1000ml)分装于500ml三角瓶中，每瓶加培养液200ml，灭菌后接种，24°C 摇瓶培养10天，获得栽培用菌种。
3. 虫草子实体人工培养
大米合成培养基配方培养液(蔗糖1%， K2HPO40.15%， MgSO40.05%，蚕蛹粉1%， lOOOml)，优质大米。
配置时，用500ml罐头瓶装30g大米，加入45mL培养液。灭菌后凉至25"C，按照无菌操 作规程接种，然后放入培养室培养。避光培养10天。待菌丝布满米饭培养基表面时，采用 2rC光照培养，继续培养30-40天。
4. 采收子实体生长至5-7厘米，轻轻完整采收，采收后即风干或低温烘干。
实施例2
1. 制备菌种
///>"57^e//a 6eafe/w附otOTtoz." X.L.iang, sp. nov. FCHC47菌株在PDA培养基上活化后，接 种于无菌培养基液体培养基(土豆200g，蔗糖20g，蛋白胨lg，酵母膏3g， K2HP041.5g， MgS04 0.5g， VBi适量，配制1000ml，分装于500ml三角瓶中，每瓶加培养液200ml， 封口灭菌)，24'C摇瓶培养10天，获得栽培用菌种。
2. 接种和培养
将栽培用菌种按无菌操作注射于新鲜柞蚕蛹体内，每只柞蚕蛹接种约0.1ml，接种后将 蛹体放入500ml玻璃广口瓶中，每瓶8只虫体，聚丙烯薄膜封口。至于22'C避光15天， 蛹体僵化后移入培养室，然后至于2(TC光照培养。1000Lux每天光照10小时。空气相对湿 度85% 90%。诱导子实体原基产生，培养40-45天。
3. 采收子实体生产至6-8厘米，完整采收，采收后即风干或低温烘干，获得虫草全株。
权利要求
1、一种虫草菌(Hirsutella beakdumountain X.L.Jiang，sp.nov.FCHC47)，该菌种由中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏单位简称CCTCC，保藏号为M 207152。
2、与Mraz^//a 6ea;b^附ow"ZaZ" X丄.Jiang, sp. nov. FCHC47菌株的18SrDNA核酸序列ACTTTTACTTCCAAT具有90%的同源性.
3、 一种虫草菌CKirawfe〃fl[ 6eafefo附owwto/w X丄.Jiang, sp. nov. FCHC47)用于在大米合/j义i咅 养基配方上生产虫草子实体。(大米合成培养基配方培养液蔗糖1%， K2HPO40.15%， MgS04 0.05%，蚕蛹粉1%，配成母液添加于优质大米,配置时，用500ml罐头瓶装30g大米，加入45mL 母液)。
4、 一种虫草菌(历rawfe〃a 6eafa/wwo训to/n X丄.Jiang， sp. nov. FCHC47)用于在柞蚕蛹为寄主通过喷洒接种，培养虫草。
全文摘要
本发明所涉及的菌株分离自一株来源于长白山余脉大青沟风景区采集的虫草，寄主为鳞翅目大蚕蛾科的柞蚕蛹(Antherea pernyi Guerin-Meneville)的菌株，并发明了其在人工培养基上进行虫草栽培的方法。该发明的优点是分离出一株新型虫草菌并应用该菌种进行人工培养子实体和以柞蚕蛹为寄主的虫草的栽培方法，栽培方法简单，栽培条件易与控制，可进行产业化栽培，提供了一种新型人工培养虫草资源。
文档编号C12R1/645GK101560472SQ20081009230
公开日2009年10月21日 申请日期2008年4月14日 优先权日2008年4月14日
发明者蓉 李, 江晓路 申请人:中国海洋大学