截短的人乳头瘤病毒11型l1蛋白的制作方法

专利名称：：截短的人乳头瘤病毒11型l1蛋白的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种截短的人乳头瘤病毒11型Ll蛋白，及由其组成的类病毒颗粒，含该类病毒颗粒的疫苗及其在预防尖锐湿疣或HPV(特别是HPVll)感染中的用途。
背景技术：
：人乳头瘤病毒HPV(HumanPapillomavirus)属乳头多瘤空泡病毒科(Papovaviridae)乳头瘤病毒属，为无包膜DNA病毒。病毒基因组为双链闭环DNA，大小约为7.2~8kb，具有8个开放框。基因组按功能的不同可以分为三个区域①早期区(E)，约4.5kb，编码El、E2、E4E76个与病毒复制，转录及转化有关的非结构蛋白；②晚期区(L)，约2.5kb，编码主要衣壳蛋白Ll和次要衣壳蛋白L2;③长调控区(LCR)，位于L区末端与E区起始端之间，长约800900bp，不编码任何蛋白，含DNA复制、表达调控元件。病毒颗粒直径为45~55nm，核衣壳呈20面体对称，有72个壳微粒，由L1及L2组成。目前已知的HPV约有90多种亚型，在人群中主要引起皮肤，粘膜的疣状病变。根据其与肿瘤发生的关系又可分为3组①低或无致癌风险组，包括HPV6、11、39、41、42、43;②中度致癌风险组，包括HPV31、33、35、51、52;③高度癌风险组，包括HPV16、18、45、56。根据流行病学调查肛生殖器粘膜的HPV例如HPV6，11的感染仅次于衣原体和滴虫病而居于第三位，是一种常见的性传播疾病。而其申由HPV6，11引起的病变占了总数的90%左右。在美国，女性生殖道HPV感染的高峰在15-25岁，并与感染者的性行为关系密切。在我国，女性HPV的感染率的高峰期在20-29岁之间，感染率为1606.1/10万。35岁以上的妇女HPV感染率逐渐降低。但是由于HPV感染大多是亚临床感染，感染率难以准确估计，但美国CDC的估计一生中累计HPV感染风险大约10%。此外由于釆集大样本男性标本困难，且男性感染HPV造成后果没有女性严重，所以关于男性感染的资料较少。不过据估计，男性的感染率应当接近女性。而在美国，可见的尖锐湿疣见于1%的性活动期成年男性。因此，开发安全有效的HPV6，11疫苗是预防性传播疾病有效的有效手段。HPVLl蛋白为主要衣壳蛋白，分子量为55~60kDa，是HPV疫苗主要靶蛋白。在多种表达系统中表达的HPVL1蛋白无需L2蛋白辅助即可形成在形态结构与天然病毒颗粒相似的类病毒颗粒(Virus-LikeParticle,VLP)。该种类病毒颗粒为二十面体立体对称结构，由72个L1蛋白的五聚体組成。其保留了病毒颗粒的天然表位，具有较强的免疫原性，可诱导针对同型HPV病毒的中和抗体。(Kirnbauer，R，，F.Booy，"1992ProcNatlAcadSciUSA89(24):12180-4.)并且，类病毒颗粒并不带有病毒核酸，无潜在致癌危险，具有良好的安全性。因此，VLP疫苗已成为HPV疫苗发展的主要方向。HPVVLP疫苗研制的关键是能够大量高效制备VLP样品。目前较为常用的表达系统可以分为真核表达系统及原核表达系统。常用的真核表达系统有痘病毒表达系统、昆虫杆状病毒表达系统、酵母表达系统。在真核表达系统中所表达的HPVL1蛋白天然构象破坏少，能自发的形成VLP，往往只需进行简单的密度梯度离心即可得到纯化的VLP，为纯化工作提供极大的便利。但是由于真核表达系统的表达量低，培养成本高，给大规模工业化生产带来了极大困难。目前已上市HPV疫苗Gardasil釆用了酿酒酵母表达系统，其表达量低，生产成本高，因此该产品价位偏高，影响其广泛应用。原核表达系统;冲利用大肠杆菌表达系统表达HPVL1蛋白已有才PL道。例如有报道利用大肠杆菌表达HPV16Ll蛋白(Banks,L.，G.Matlashewski，"".(1987).JGenVirol68(Pt12):3081-9)。但是由于大肠杆菌所表达的HPVL1蛋白大多失去其天然构象，不能产生针对HPV的保护抗体。或者上述蛋白虽然通过包含体纯化，复性等步骤也可得到HPVVLP(Kelsall，S.R.andJ.K.Kulski(1995).JVirolMethods53(1):75-90),但是在复性过程中蛋白损失量大，得率低，难以在大规模生产上应用。HPVLl蛋白虽然也可以在大肠杆菌中以正确构象可溶性地表达，溶解于菌体的裂解上清中，但是表达量较低，而且上清中杂蛋白种类多且量大，要从中纯化出目的蛋白难度相当大。虽然也有文献报道通过GST融合表达的方式可以增加上清中Ll蛋白的表达量，而且有助目的蛋白的纯化(Li，M.，T.P.Cripe，etal.(1997).JVirol71(4):2988-95.)，但融和蛋白的切割往往需要价格昂贵的酶，依然无法应用于大规模生产。因此，本领域仍然需要具有低成本，能够诱导产生针对HPV保护性抗体的HPVL1蛋白及由其组成的类病毒颗粒，从而使大规模工业化生产尖锐湿疣疫苗成为可能。
发明内容本发明的目的是提供一种新的HPV11L1蛋白，及由其组成的类病毒颗粒及含该类病毒颗粒的疫苗。本发明人经研究出人意料地发现，在大肠杆菌表达系统能得到可以诱导针对HPVll的中和抗体的截短HPV11L1蛋白，该截短的HPV11L1蛋白经纯化后得到高产率，纯度至少50%的HPVL1蛋白。纯化后的HPVL1蛋白经进一步处理得到可诱导针对HPVll保护性抗体的类病毒颗粒，本发明基于以上发明现已完成。因此，本发明第一方面涉及一种(与野生型HPVllLl蛋白相比)N端截短了3个、4个、5个或6个氨基酸的HPVllLl蛋白。优选该截短蛋白具有序列1、2、3、或4，优选序列1。本发明再一方面涉及编码本发明截短蛋白的多核苷酸以及含有该多核苷酸的栽体。""本发明再一方面涉及包含上述载体的细胞。本发明还涉及包含上述截短蛋白或多核苷酸或载体或细胞的组合物o本发明再一方面涉及一种HPVll类病毒颗粒，其中该类病毒颗粒包含N端截短了3个、4个、5个或6个氨基酸的HPV11Ll蛋白例如具有序列1、2、3、或4的HPV11Ll蛋白，或者由N端截短了3个、4个、5个或6个氨基酸的HPV11L1蛋白例如具有序列1、2、3、或4的HPVllLl蛋白组成或形成。本发明再一方面涉及一种获得HPVllLl蛋白的方法，其包括在大肠杆菌表达系统中表达截短的HPV11L1基因片段，然后将含有该截短蛋白的裂解上清进行纯化处理。在一个优选实施方案中，获得HPVllLl蛋白的方法包括a)在大肠杆菌表达系统中表达截短的HPV11Ll基因片段，b)将表达了截短HPV11Ll蛋白的大肠杆菌在盐浓度100mM-600mM中破碎，分离得到上清液，c)用水或低盐溶液将b)上清液中盐浓度降至100mM或以下，最低至0，收集沉淀，d)将c)中沉淀在150mM-2500mM盐溶液中重新溶解，同时加入还原剂，分离得到溶液，其中含纯度至少50。/。的截短HPV11Ll蛋白。更一般性地，本发明还涉及一种获得HPVLl蛋白例如本发明HPV11Ll蛋白的方法，其包括a)在大肠杆菌表达系统中表达编码HPVL1蛋白的HPVLl基因，b)将表达了HPVLl蛋白的大肠杆菌在盐浓度100mM-600mM中破碎，分离得到上清液，c)用水或低盐溶液将b)上清液中盐浓度降至lOOmM或以下，最低至0，收集沉淀，d)将c)中沉淀在150mM-2500mM盐溶液中重新溶解，同时加入还原剂，分离得到溶液，其中含纯度至少50%的HPVLl蛋白。本发明还涉及一种预防尖锐湿疣或HPV感染的疫苗，其包含本发明的HPV11Ll蛋白类病毒颗粒。优选该疫苗还包含至少一种选自HPV18L1蛋白类病毒颗粒，HPV6L1蛋白类病毒颗粒，HPV16L1蛋白类病毒颗粒，HPV31L1蛋白类病毒颗粒，HPV33L1蛋白类病毒颗粒，HPV45L1蛋白类病毒颗粒，HPV52L1蛋白类病毒颗粒，HPV58L1蛋白类病毒颗粒的类病毒颗粒。该疫苗通常还包含疫苗用赋形剂或载体。优选地，所述疫苗含有HPV6类病毒颗粒和HPV11类病毒颗粒，特别是，含有具有SEQIDNO:7所示氨基酸序列的蛋白质的HPV6类病毒颗粒和含有具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的蛋白质的HPVll类病毒颗粒。更优选所述疫苗还含有HPV16类病毒颗粒和HPV18类病毒颗粒，特别是含有具有SEQIDNO:8所示氨基酸序列的蛋白质的HPV16类病毒颗粒和含有具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的蛋白质的HPV18类病毒颗粒。在一个特别优选的实施方案中，所述疫苗包含含有具有SEQIDN0:7所示氨基酸序列的蛋白质的HPV6类病毒颗粒，含有具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的蛋白质的HPVll类病毒颗粒，含有具有SEQIDNO:8所示氨基酸序列的蛋白质的HPV16类病毒颗粒和含有具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的蛋白质的HPV18类病毒颗粒。本发明进一步涉及本发明HPVllLl蛋白或其类病毒颗粒在制备用于预防尖锐湿疣或HPV感染疫苗中的用途。本发明还涉及一种预防尖锐湿疣或HPV感染的方法，其包括将含预防有效量的本发明HPVllLI蛋白疫苗给予需预防尖锐湿疣或HPV感染的人或动物。本发明还涉及一种获得HPVllLI蛋白类病毒颗粒的方法，其包括e)将纯度至少50%的截短HPVllLI蛋白进一步通过色谱层析纯化，f)将e)步骤中得到的HPVllLl蛋白去除还原剂。本发明还涉及一种制备用于预防尖锐湿疣或HPV感染疫苗的方法，其包括将上述类病毒颗粒与任选的一种或多种选自HPV6,16，18，31，33，45，52，和5^的HPV型别的类病毒颗粒及疫苗用载体或者赋形剂混合。本发明中相关术语的说明及解释根据本发明，术语"大肠杆菌表达系统"是指由大肠杆菌(菌林)与载体组成，其中大肠杆菌(菌林)来源于市场上可得到的，在此举例但不限于GI698，ER2566，BL21(DE3)，B834(DE3)，BLR(DE3)。根据本发明，术语"载体"一词指的是，可将某编码蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运栽工具。载体可以通过转化，转导或者转染宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。举例来说，载体包括质粒；噬菌体；柯斯质粒等等。根据本发明，术语"截短的HPV11L1蛋白基因片段"是指在野生型HPV11Ll蛋白基因(cDNA)的5，端或3，端去掉编码一个或者多个氨基酸的核苷酸，其中野生型HPV11Ll蛋白基因全长序列举例但不限于NCBI数据库中如下序列M14119.1,AF335603.1,AF335602,1，等。"截短的HPV11Ll蛋白"是指在野生型HPV11Ll蛋白的N端和/或C端去掉一个或者多个M酸后的蛋白质，其中野生型HPV11Ll蛋白的例子有但不限于NCBI数据库中M14119.1，AF335603.1，AF335602.1，等所编码的全长L1蛋白。才艮据本发明，术语"疫苗用赋形剂或载体"是指选自一种或多种，包括但不限于pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂。例如，pH调节剂举例但不限于磷酸盐緩沖液，表面活性剂包括阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂。举例但不限于Tween-80。佐剂举例但不限于氢氧化铝，氟氏完全佐剂。离子强度增强剂举例但不限于氯化钠。根据本发明，术语"色傳层析"包括但不限于离子交换色谱(例如阳离子交换色镨)、疏水相互作用色语、吸附层析法(例如羟基磷灰石色谱)、凝胶过滤(凝胶排阻)层析、亲和层析法。根据本发明，本发明的截短HPV11L1蛋白优选如下获得将表达有截短HPV11L1蛋白的大肠杆菌在盐浓度为100-600mM，优选200-500mM的緩冲液中进行破碎，分离破碎溶液，得到止清液，用水或低浓度盐(通常低于破碎用的盐浓度)降低所得上清液中盐浓度至盐浓度lOOmM-謹,分离盐浓度低至100Mm-0的上清液中的沉淀；将沉淀在含还原剂及盐浓度150-2000mM优选200mM以上的溶液中重新溶解，分离，得到纯度至少为50%，优选至少70%，更优选至少800/。的截短HPV11L1蛋白溶液。根据本发明，在本发明获得的截短HPV11L1蛋白的方法中，緩冲液是指可在一定范围内维持pH值稳定的溶液，包括但不限于，Tris緩沖液，磷酸盐緩冲液，HEPES緩冲液，MOPS緩冲液等等。根据本发明，所述原核宿主细胞破碎包括但不限于通过匀浆器破碎、均质才几破碎、超声波处理、研磨、高压挤压、溶菌酶处理中的一项或者多项方法来实现；根据本发明，在本发明获得的截短HPV11L1蛋白的方法中，所用的盐包括但不限于是中性盐，特別是碱金属盐、铵盐、盐酸盐、硫酸盐，硫酸盐，碳酸氩盐，磷酸盐或磷酸氢盐，特别是NaCl、KC1、NHX1、(冊4)2S04中的一种或几种。优选NaCl。所用的还原剂包括但不限于DTT，2-巯基乙醇。所用量包括但不限于lOmM-lOOmM。根据本发明，本发明的截短HPV11L1蛋白类病毒颗粒如下获得将上述纯度至少50%的截短HPVL1蛋白溶液通过例如色镨层析进一步分离，得到纯化的截短HPV11L1蛋白溶液。去除纯化的截短HPV11L1蛋白溶液中的还原剂，得到截短HPV11L1的类病毒颗粒。去除还原剂的方式包括但不限于本领域已知技术，例如，透析，超滤或者层析等。根据本发明，本发明的截短HPVL1蛋白优选具有序列1。根据本发明，本发明的疫苗可采用患者可接受的形式，包括但不限于口服或者注射，优选注射。根据本发明，本发明疫苗优选单位剂型使用，其中单位剂型中截短HPV11L1蛋白类病毒颗粒的量为5Pg-8(mg，优选20Pg-40ixg。有益效果目前HPV类病毒颗粒的制备所釆用的表达系统可以分为真核表达系统和原核表达系统。在真核表达系统中所表达的HPVL1蛋叙氛然构象破坏少，能自发的形成VLP，往往只需进行简单的纯化过程即可获得具有正确构象的VLP。但目前真核表达系统所采用的杆状病毒表达系统及酵母表达系统均有表达量低，培养成本高等缺陷，给大规模工业化生产带来了极大困难。在原核表达系统中，大肠杆菌表达系统具有培养成本低，表达量大的优点。但在大肠杆菌表达系统中表达的HPVLl蛋白往往失去正确天然构象，以包含体形式表达于沉淀中。目前对表达于包含体中蛋白进行复性依然是一个世界性难题。复性困难，效率低下，使得从包含体中获得有正确构象的VLP在大规模生产中难以实施，只能局限于小规模的实验室研究中。虽然HPVLl也可以正确构象可溶性形式表达于大肠杆菌裂解上清中，但是表达量低下，而且要从大肠杆菌裂解上清中种类繁多的可溶性蛋白纯化出HPVL1蛋白也相当困难，往往需要借助融合表达及亲和层析等手段进行纯化，以上手段往往需要昂贵的酶，难以进4亍工业化生产。本发明在大肠杆菌表达系统中表达N端截短HPV11Ll蛋白，并且采用温和的手段选择性沉淀表达在大肠杆菌裂解上清中的HPV11Ll蛋白，进一步采用含盐緩冲液重溶HPVllLl蛋白，使得在保持HPVllLl蛋白正确构象前提下使其纯度有了显著提高且重溶后的目的蛋白可以直接进行离子交换层析及疏水交换层析纯化获得纯蛋白。通过以上步骤获得纯化后的截短HPV11Ll截短蛋白可以组装为类病毒颗粒，具有良好的免疫原性，可以诱导高滴度的针对HPV11的中和抗体，预防HPVll对人体的感染，是一种良好的疫苗形式。此外，本发明中采用的截短HPVllLl蛋白在保留全长HPV11Ll蛋白的抗原性及颗粒组装能力的同时，易于在大肠杆菌表达系统中表达，所釆用的纯化方法无需使用昂贵的酶，成本低廉。而且目的蛋白在纯化过程中构象没有经过剧烈的变性复性过程，损失小，可应用于大规模工业化生产。在参考下列详述和附图后，本发明的这些和其它方面将是显然的。此处公开的所有参考文献在此均完整引用作为参考。图1显示了在本发明方法步骤a)-d)过程中不同阶段HPV11N4C-L1蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。1，裂解上清；2，经过切向流沉淀的HPV11N4C-L1;3,经重悬液重悬的HPV11N4C-Ll。结杲显示，HPV11N4C-L1蛋白在通过沉淀，复溶的步骤之后，纯度达到了约70%左右。图2显示了步骤d)中所得的HPV11N4C-L1进一步经本发明步骤e)纯化后的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。1，经本发明步骤e)纯化所得HPV11N4C-L1上样10jul;2，经本发明步骤e)纯化所得HPV11N4C-L1上样20p1。结果显示，经过步骤e)纯化的HPV11N4C-L1蛋白纯度达到了98%左右。图3显示了步骤f)中所得的HPV11N4C-Ll类病毒颗粒透射电镜观察(50，000倍)结果。视野中可见大量半径为25nm左右的类病毒颗粒，颗粒大小与理论大小相符，均匀一致。图4显示了步骤f)中所得的HPV11N4C-Ll类病毒颗粒的动态光散射观测结果。HPV11N4C-L1类病毒颗粒的水化分子动力学半径为27.19nm,颗粒组装百分比为96.7%。图5显示了HPV11N4C-L1类病毒颗粒接种兔后不同阶段血清中和抗体滴度。图中箭头所示为免疫时间。在加强后一至二个月后，中和抗体的滴度能达到105的较高水平。图6显示了实施例5中HPV6/11二价疫苗接种小鼠后不同时间的血清中HPV6,HPV11中和抗体滴度变化情况。免疫程序为0，2W(周)。第一次免疫后，HPV6，HPV11中和抗体滴度即有明显上升，在经过一次加强免疫后，抗体的滴度即能达到1x104-1x105。图7显示了实施例5中HPV6/11/16/18四价疫苗接种小鼠后不同时间的血清中HPV6，HPV11，HPV16，HPV18中和抗体滴度变化情况。免疫程序为0，2W(周)。第一次免疫后，HPV6，HPV11，HPV16，HPV18中和抗体滴度即有明显上升，在经过一次加强免疫后，抗体的滴度即能达到1x105-1x106。，图8显示了在本发明方法步骤a)-e)中N端分别截短了3个、5个、或6个氨基酸的HPV11Ll蛋白HPV11N3C-Ll、HPV11N5C-Ll、HPV11N6C-L1(其氨基酸序列分别见SEQIDNO:2、3、4)的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳结果。1，分子量Marker;2，经本发明步骤a)-e)纯化所得HPV11N3C-L1上样10jnl;3,经本发明步骤a)-e)纯化所得HPV11N5C-Ll上样10pl;4，经本发明步骤e)纯化所得HPV11N6C-L1上样lOjLi1;结果显示，N端截短了3个、5个、或6个氨基酸的HPV11Ll蛋白HPV6N2C-L1、HPV11N3C-L1、HPV11N5C-L1经过步骤a)-e)处理，蛋白纯度均达到了95%左右。图9显示了经过步骤a)-f)所得的N端分别截短了3个、5个、或6个氨基酸的HPV11Ll蛋白HPV11N3C-L1、HPV11N5C-L1、HPV11N6C-L1类病毒颗粒透射电镜观察(50,000倍)结果。1,经过步骤a)-f)所得的HPV11N3C-L1类病毒颗粒；2，经过步骤a)-f)所得的HPV11N5C-L1类病毒颗粒；3经过步骤a)-f)所得的HPV11N6C-L1类病毒颗粒；结果显示，视野中可见大量半径为25nm左右的类病毒颗粒，颗粒大小与理论大小相符，均匀一致。图10显示了经过步骤a)-f)所得的N端分别截短了3个、5个、或6个氨基酸的HPV11Ll蛋白HPV11N3C-L1、HPV11N5C-L1、HPV11N6C-Ll类病毒颗粒的动态光散射观测结果。1，经过步骤a)-f)所得的HPV11N3C-L1类病毒颗粒动态光散射观测结果；2，经过步骤a)-f)所得的HPV11N5C-L1类病毒颗粒动态光散射观测结果；3，经过步骤a)-f)所得的HPV11N6C-Ll类病毒颗粒动态光散射观测结果；结果显示，HPV11N3C-L1、HPV11N5C-L1、HPV11N6C-L1类病毒颗粒的水化分子动力学半径25nm左右，颗粒组装百分比在80%以上。序列序列l(SEQIDNO:1):1MSDSTVYVPPPNPVSKVVATDAYVKRT,61GYQYRVFKVVLPDPNKFALPDSSLFDPTTQ121DDVENSGGYGGNPGQD證NVGMDYKQTQL181PLELITSVI()DGDMVDTGFGAMNFADLQTN241FPYLRKEQMFARHFFNRAGTVGEPVPDDLL301FNKPYWLQKAQGHNNGICWGNHLFVTVVDT361EEFDLQFIFQLCSITLSAEVMAYIHTMNPS421CQKPTPEKEKQDPYKDMSFWEVNLKEKFSS481AVSKPSTAPKRKRTKTKKYHASSSRLLARL雨CTGLECMVGCAPPLGKSDVPLDICGVKGG證SSVTRST丽LCAVLE躍FGLSELDQFPLGRKVGHPYYSIKKVNKTVVPKVSVGRGQPLGVGVSGHPLLNKYEHWGKGTQCSNTSVQNGDCPTVCKYPDYLQMAADPYGDRLASSIYVHTPSGSLVSSEAQLSVSKSATYTNSDYKE體HVPPPNGTLEDTYRYVQSQAITFLLQSGYRGRTSARTGIKRP序列2(SEQIDNO:2):1MPSDSTVYVPPPNPVSKVVATDAYVKRTNI61SGYQYRVFKVVLPDPNKFALPDSSLFDPTTFYHASSSRLLQRLVWACTGLAVGHPYYSIKKVMTVVPKVEVGRGQPLGVGVSGHPLLNK121YDDVENSGGYGGNPGQDNRVN簡DYKQTQLCMVGCAPPLGEHWGKGTQCSNTSVQNGDC181PPLELITSVIQDG丽DTGFG細FADLQT服SDVPLDICGTVCKYPDYLQMAADPYGDR241LFFYLRKEQMFARHFFNRAGTVGEPVPDDLLVIGG舰SSVASSI刑TPSGSLVSSEAQ301LFNKPYWLQKAQGHNNGICTGNHLFVTVVDTTRSTNMTLCASVSKSATYTNSDYKEYMRH361VEEFDLQFIFQLCSITLSAEVMAYIHTMNPSVLEDWNFGLSPPPNGTLEDTYRYVQSQAI421TCQKPTPEKE卿PYKDMSFWEVMLKEKFSSELDQFPLGRKFLLQSGYRGRTSARTGIKR481PAVSKPSTAPKRKRTKTKK序列3(SEQIDNO:3):1mdswvpppnpvskvvatda徴rtnifyhasssrllavghpyysif:kvnktvvpkvsg61YQYRVFKVVLPDPNKFALPDSSLFDPTTQRL爆CTGLEVGRGQPLGVGVSGHPLLMYDmDVENSGGYGGNPGQDNRVNVGMDYKQTQLCMVGCAPPLGEHWGKGTQCSNTSVQNGDCPP181LELITS，G耐DTGFGAMNFADL(JTNKSDVPLDICGTVCKYPDYLQMAADPYGDRLF241FYLRKEQMFARHFFimAGTVGEPVPDDLLVKGG丽SSVASSIYVHTPSGSLVSSEAQLF301NKPYWLQKAQGHNNGICWGNHLFVTVVDTTRSTNMTLCASVSKSATYTNSDYKEYMRHVE361EFDLQFIFQLCSITLSAEVMAYI画NPSVLB卿FGLSPPPNGTLEDTYRYVQSQAITC421QKPTPEK卿DPYKDMSFWEVNLKEKFSSELDQFPLGRKFLLQSGYRGRTSA薦KRPA481VSKPSTAPKRKRTKTKK序列4(SEQIDNO:4):lMSTVYVPPPNPVSKVVATDAYVKRTNIFYHASSSRLLAVGHPYYSIKKVNKTVVPKVSGY61QYRVFKVVLPDPNKFALPDSSLFDPTTQRLVWACTGLEVGRGQPLGVGVSGHPLLNKYDD121VENSGGYGGMPGQD丽跳MDYKQ丁QLCMVGCAPPLGEHTCKGTQCSNTSVQNGDCPPL181ELITSVIQDGDMVDTGFGAMNFADLQTNKSDVPLDICGTVCKYPDYLQMAADPYGDRLFF241YLRKEQMFARHFF歸GTVGEPVPDDLLVKGG丽SSVASSIYVHTPSGSLVSSEAQLFN301KPYWLQKAQG,GICWG冊LFVTVVDTTRS孺TLCASVSKSATYTNSDYKEYMRHVEE361FDLQFIFQLCSITLSAEVMAYIHTMNPSVLE,FGLSPPPNGTLEDTYRYVQSQAITCQ421KPTPEKEKQDPY隨SFTOVNLKEKFSSELDQFPLGRKFLLQSGYRGRTSARTGIKRPAV481SKPSTAPKRKRTKTKK序列5(SEQIDNO:5):1ATGTGGCGGCCTAGCGACAGCACAGTATATGTGCCTCCTCCCAACCCTGTATCCAAGGTT61GTTGCCACGGATGCGTATGTTAAACGCACCAACATATTTTATCACGCCAGCAGTTCTAGA121CTCCTTGCTGTGGGACATCCATATTACTCTATCAAAAAAGTTAACAAAACAGTTGTACCA181AAGGTGTCTGGATATCAATATAGAGTGTTTAAGGTAGTGTTGCCAGATCCTAACAAGTTT241GCATTACCTGATTCATCTCTGTTTGACCCCACTACACAGCGTTTAGTATGGGCGTGCACA301GGGTTGGAGGTAGGCAGGGGTCAACCTTTAGGCGTTGGTGTTAGTGGGCATCCATTGCTA361AACAAATATGATGATGTAGAAAATAGTGGTGGGTATGGTGGTAATCCTGGTCAGGATAA丁421AGGGTTAATGTAGGTATGGATTATAAACAAACCCAGCTATGTATGGTGGGCTGTGCTCCA481CCGTTAGGTGAACATTGGGGTAAGGGTACACAATGTTCAAATACCTCTGTACAAAATGGT541GACTGCCCCCCGTTGGAACTTATTACCAGTGT丁ATACAGGATGGGGACATGGTTGATACA601GGCTTTGGTGCTATGAATTTTGCAGACTTACAAACCAATAAATCGGATGTTCCCCTTGAT661ATTTGTGGAACTGTCTGCAAATATCCTGATTATTTGCAAATGGCAGCAGACCCTTATGGT721gataggttgtttttttatttgcgaaaggaacaaatgtttgctagacacttttttaatagg781GCCGGTACTGTGGGGGAACCTGTGCCTGATGACCTGTTGGTAAAAGGGGGTAATAATAGA841TCATCTGTAGCTAGTAGTATTTATGTACATACACCTAGTGGCTCATTGGTGTCTTCAGAG901GCTCAATTATTTAATAAACCATATTGGCTTCAAAAGGCTCAGGGACATAACAATGGTATT961TGCTGGGGAAACCACTTGTTTGTTACTGTGGTAGATACCACACGCAGTAC1021ctatgtgc'atctgtgtctaaatctgctacatacactaattcagattataaggaatacatg1081CGCCATG"TGGAAGAGTTTGATTTACAGTTTATTTTTCAATTGTGTAGCATTACATTATCT1141GCAGAAGTCATGGCCTATATACACACAATGAATCCTTCTGTTTTGGAGGACTGGAACTTT1201ggtttatcgcctccaccaaatggtacactggaggatacttataga丁atgtacagtcacag1261GCCATTACCTGTCAGAAACCCACACCCGAAAAAGAAAAACAGGACCCCTATAAGGATATG1321AGTTTTTGGGAGGTTAACTTAAAAGAAAAGTTTTCTTATGAATTAGATCAGTTTCCCCTT381GGACGTAAGTTTTTATTGCAAAGTGGATATCGAGGACGGACGTCTGCTCGTACAGGTATA1441AAGCGCCCAGCTGTGTCTAAGCCCTCTACAGCCCCCAAACGAAAACGTACCAAAACCAGA1501AAGTAA序列:6(SEQIDNO:6)1ATGAGCGACAGCACAGTATATGTGCCTCCTCCCAACCCTGTATCCAAGGTTGTTGCCACG61GATGCGTATGTTAAACGCACCAACATATTTTATCACGCCAGCAGTTCTAGACTCCTTGCT121GTGGGACATCCATATTACTCTATCAAAAAAGTTAACAAAACAGTTGTACCAAAGGTGTCT181GGATATCAATATAGAGTG丁TTAAGGTAGTGTTGCCAGATCCTAACAAGTTTGCATTACCT241GATTCATCTCTGTTTGACCCCACTACACAGCGTTTAGTATGGGCGTGCACAGGGTTGGAG301GTAGGCAGGGGTCAACCTTTAGGCGTTGGTGTTAGTGGGCATCCATTGCTAAACAAATAT361GATGATGTAGAAAATAGTGGTGGGTATGGTGGTAATCCTGGTCAGGATAATAGGGTTAAT421GTAGGTATGGATTATAAACAAACCCAGCTATGTATGGTGGGCTGTGCTCCACCGTTAGGT481GAACATTGGGGTAAGGGTACACAATGTTCAAA丁ACCTCTGTACAAAATGGTGACTGCCCC541CCGTTGGAACTTATTACCAGTGTTATACAGGATGGGGACATGGTTGATACAGGCTTTGGT601GCTATGAATTTTGCAGACTTACAAACCAATAAATCGGATGTTCCCCTTGATATTTGTGGA661ACTGTCTGCAAATATCCTGATTATTTGCAAATGGCAGCAGACCCTTATGGTGATAGGTTG721TTTTTTTATTTGCGAAAGGAACAAATGTTTGCTAGACACTTTTTTAATAG咖CGGTACT781GTGGGGGAACCTGTGCCTGATGACCTGTTGGTAAAAGGGGGTAATAATAGATCATCTGTA841GCTAGTAGTATTTATGTACATACACCTAGTGGCTCATTGGTGTCTTCAGAGGCTCAATTA901T丁TAATAAACCATATTGGCTTCAAAAGGCTCAGGGACATAACAATGGTATTTGCTGGGGA961AACCACTTGTTTGTTACTGTGGTAGATACCACACGCAGTACAAATATGACACTATGTGCA1021TCTGTGTCTAAATCTGCTACATACACTAATTCAGATTATAAGGAATACATGCGCCATGTG1081GAAGAGTTTGATTTACAGTTTATTTTTCAATTGTGTAGCATTACATTATCTGCAGAAGTC1141ATGGCCTATATACACACAATGAATCCTTCTGTTTTGGAGGACTGGAACTTTGGTTTATCG1201CCTCCACCAAATGGTACACTGGAGGATACTTATAGATATGTACAGTCACAGGCCATTACC1261TGTCAGAAACCCACACCCGAAAAAGAAAAACAGGACCCCTATAAGGATATGAGTTTTTGG1321GAGGTTAACTTAAAAGAAAAGTTTTCTTATGAATTAGATCAGTTTCCCCTTGGACCTAAG1381TTTTTATTGCAAACTGGATATCGAGGACGGACGTCTGCTCGTACAGGTATAAAGCGCCCA1441GCTGTGTCTAAGCCCTCTACAGCCCCCAAACGAMACGTACCAAAACCAGAAAGTAA下面结合实施例对本发明进一步举例描述。这些实施例是非限制性的。实施例1:具有序列1的截短HPVllLl蛋白的表达用做模板之HPVllLl基因片段的制备HPV11Ll基因全长由上海博亚公司合成。所合成的基因片段全长为1506bp，其序列为序列5。在此人工合成的HPV11L1基因全长片段的基础上制备本发明截短HPVllLl蛋白之模板。截短HPVllLl基因的非融合表达载体的构建以前一步骤所合成的HPV11L1全长基因片段用做再次PCR反应的模板。以11N4F:5，-CATATgAGCGACAGCACAGTATATGTG-3，(SEQIDN0:10)为正向引物，其5，端引入限制性内切酶Ndel位点，Ndel位点序列为CATATG，ATG为大肠杆菌系统中的起始密码子；6CR:5'-GTCGACTTACTTTCTGGTTTTGGTACGTTT_3'(SEQIDNO:11)为反向引物，其5，端引入限制型内切酶SalI位点。在PCR热循环仪(BiometraT3)按照如下条件进行PCR反应:<table>complextableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>扩增得到1.5kb左右大小特异的DNA片段。将该PCR产物与商售的pMD18-T栽体(TAKARA/^司生产)连接，经Ndel/Sall酶切鉴定，得到插入截短HPV11L1基因的阳性克隆pMD18-T-HPV11N4C-L1。在上海博亚生物工程公司，利用M13(+)/(-)引物，测得pMD18-T-HPV11N4C-L1质粒中插入的目的核苷酸序列为序列6(SEQIDNO:6)。其编码的氨基酸序列即为序列l(SEQIDNO:1):该序列对应的蛋白质为为N端被截短4个氨基酸、C端未被截短的HPV11LI蛋白，命名为HPV11N4C-L1。将上迷的pMD18-T-HPV11N4C-L1质粒，经Ndel/Sall酶切，获得截短的HPV11N4C-L1基因片段。再将该片段与经Ndel/Sa11酶切的非融合表达载体pT0-T7(罗文新等，生物工程学报，2000，16:53-57)相连接，Ndel/Sall酶切鉴定得到插入Ll蛋白基因的阳性表达克隆pTO-T7-HPV11N4C-L1。取1|aL的pT0-T7-HPV11N4C-Ll质粒(0.15mg/ml)转化40pL的氯化钙法制备的感受态大肠杆菌ER2566(购自新英格兰生物实验室公司)，涂布于卡那霉素(终浓度25mg/mL，下同)抗性的固体LB培养基，37t;静置培养10-12小时至单菌落清晰可辨。挑取单个菌落，挑取单菌落至含4mL卡那霉素抗性的液体LB培养基之试管，37"C220传/分振荡培养10小时，从中取lmL菌液于-70匸冻干保存。HPV11N4C-L1的大量表达从-70X:中取出带有重组质粒pT0-T7-HPVll^HC-Ll的大肠杆菌冻干菌种，用少量无菌水溶解，接入卡那霉素抗性的50mLLB培养基中。200rpm、37"C培养大约8小时，而后将其转接入10瓶500mLLB培养基中，每瓶接入5mL菌液，200rpm、30t:摇瓶培养过夜，作为种子液。LB培养基配方蛋白胨10g酵母抽提物5gNaCl:10g将以上成分份溶解于lOOOmL去离子水中，用NaOH调节pH值至7.2，121"C灭菌30min，冷却至50X:。采用上海保兴生物公司50L发酵罐进行大规模培养。校正发酵罐PH电极，配制30LLB培养基装入发酵罐，原位121匸灭菌30min，校正溶氧电极，以灭菌后未通气前为零点，以发酵时通气后未接种前初始搅拌速度lOOrpm时为100%。补料准备配制浓度为30。/。(20g蛋白胨、10g酵母骨溶至100ml)的蛋白胨和酵母骨混合物，50%葡萄糖(50g溶至100ml)，121匸灭菌20min。次曰将10瓶种子液共5L接入发酵罐中，设定温度37匸，PH值7.0，手动调节搅拌速度及通气量，维持溶氧在40%以上。流加补料将50%葡萄糖和30%蛋白胨和酵母骨混合物按溶质质量比2:1的比例混合。流加速度如下100%为25ml7min第一小时5%;第二小时10%;第三小时20%;第四小时40%;第五小时以后60%。当菌浓度达到OD,頭大约10左右时将培养温度降至25"C，加入4gIPTG诱导培养4小时。终浓度大约为60左右(OD6。。nra)下罐，离心收集菌体，获得表达有HPV16N30C-L1蛋白的菌体重大约2.7kg。实施例2:纯度约70%的HPV11N4C-L1的获得按lg菌体对应10mL裂解液(20mMTris緩冲液pH7.2，300mMNaCl)的比例重悬菌体，采用APV均质机(AnInvensysGroup产品)以600bar压力破碎菌体5次。JA-14转头13500rpm(30000g),离心15min，留取上清，通过10。/。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，此时上清中HPV11N4C-L1的纯度约为10%。采用CENTRASETTE5切向流装置(PALL产品)对上清进行透析，所用膜包截留分子量为30kDa，透析液为10mM磷酸緩沖液pH6.O緩冲液，透析体积为三倍上清体积，运行时压力为0.5psi，流速为500mL/min，切向流速为200mL/min。透析充分后，JA-10转头(BeckmanJ25高速离心机)9500rpm(12000g)，20min离心收获沉淀，用1/10上清体积的lOmM磷酸緩冲液pH8.0，10mMDTT,300mMNaCl重悬沉淀，搅拌30min。JA-14转头(BeckmanJ25高速离心机)，13500rpm(30000g)，离心20min，离心得上清，使用0.22"孔径滤膜过滤样品，以该样品进行下一步的阳离子交换色谱纯化。取150juL过滤后样品，加入6XLoadingBuffer30|iL。混匀，于80*C水浴10min后取10pL于10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶中以120V电压电泳120min。随后以考马斯亮兰染色显示电泳条带，电泳结果见图1。通过SDS-PAGE分析可知HPV11N4C-L1蛋白在通过沉淀、复溶的步骤之后，目的蛋白得到了纯化和富集，纯度达到了约70%左右。实施例3:HPV11N4C-L1的色i普纯化HPV11N4C-L1的阳离子交换色i瞽纯化仪器系统GEHealthcare原AmershanPharmacia公司生产的AKTAexplorer100型制备型液相色i普系统。层析介质SPSepharose4FastFlow。柱体积5.5cmx20cm。緩沖液20血M磷酸緩冲液pH8.0，10mMDTT20mM磷酸緩冲液pH8.010mMDTT2MNaCl。流速.'25mlVmin检测器波长280nm样品为3L纯度约为70%HPV11N4C-L1溶液洗脱程序为200mMNaCl洗脱杂蛋白，800mMNaCl洗脱目的蛋白，收集500mMNaCl洗脱产物，共获得HPV11N4C-L1纯化样品700mL。HPV11N4C-L1的CHT-II(鞋基磷灰石色镨)纯化仪器系统GEHealthcare原AmershanPharmacia公司生产的AKTAexplorer100型制备型液相色谱系统。层析介质CHT-II(购自Bio-RAD)柱体积5.5cmx20cm緩冲液10mM磷酸緩冲液pH7.0，10mMDTT，0.5MNaCl。流速20mL/min。检测器波长280nin。样品为SPSepharose4FastFlow500mMNaCl洗脱产物洗脱程序为直接收取含目的蛋白的穿透收集穿透产物，获得纯化的HPV11N4C-L1样品300mL。取经本实施例方法纯化的HPV11N4C-L1样品150juL，加入6XLoadingBuffer30uL混匀，于80X:水浴10min后取于10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶中以120V电压电泳120min。随后以考马斯亮兰染色显示电泳条带，电泳结果见图2。由电泳结果可知，目的蛋白浓度约为0.3mg/ml，SDS-PAGE考染纯度大于98%。实施例4:HPV11N4C-L1类病毒颗粒的组装仪器系统为PALL生产的CENTRASETTE5切向流系统；膜包截留分子量为30kDa;样品为实施例3所得HPV11N4C-L1300ml。样品的浓缩调节系统切向流速为50mL/min,浓缩样品至总体积为800mL。样品的复性以10L复性緩冲液(20mMPBpH6.0，2mMCaC12，2mMMgCl2，0.5MNaCl，0.003%Tween-80)充分交换样品緩冲液。切向流装置运行时压力为0.5psi，切向流速度为10mL/min，待复性緩沖液交换完后，改为储存緩冲液(20LPBS:20mMPBpH6.5，0.5MNaCl)进行交换，交换体积为20L。运行时压力为0.5psi，切向流速为25mL/min。待所有液体交换完毕后，使用PALL0.20pm滤器无菌过滤样品，即得HPV11N4C-Ll类病毒颗粒，将其置于4匸保存备用。实施例5:HPV11N4C-L1类病毒颗粒的形态学检测HPV11N4C-L1类病毒颗粒透射电镜观察仪器为日本电子公司生产的100kV透射电镜，放大倍数为100，000倍。HPV11N4C-L1类病毒颗粒经2。/fl磷鴒酸pH7.0负染，固定于喷炭的铜网上进行观察。结果如图3，可见实施例4所得样品大量半径为25nm左右的类病毒颗粒，大小均匀，呈现为空心形态。HPV11N4C-L1类病毒颗粒动态光散射观察仪器为美国ProteinSolutions/>司生产的DynaProMS/X型动态光散射仪(含温度控制器)，使用算法为Regulation算法。样品为实施例4所得样品。样品经0.22pm滤膜过滤后进行测量。测量结果见图4。结果显示HPV11N4C-LlVLP的水化分子动力学半径为27.19nm。颗粒組装百分比为96.7%HPV11假病毒中和细胞模型的建立由于HPV难以在体外进行培养，而且HPV宿主特异性强，难以在人以外的宿主上繁殖，缺乏合适的动物模型。因此，为了能对HPV疫苗的免疫保护性进行快速评估，需要建立有效体外中和实验模型。假病毒(pseudovirions)体外感染模型利用了HPVVLP可非特异包装核酸的特性，通过在细胞内表达HPV的L1和L2蛋白，通过包裹细胞内的游离体病毒DNA或外源导入的报告质粒组成HPV假病毒。(Yeager，M.D，Aste-Amezaga，M.etal(2000)Virology(278)570-7)具体方法有重组病毒表达系统法及多质粒共转染方法。本发明釆用的多质粒共转染方法，并且针对HPV系统采取了如下的改进建立了对293FT细胞的优化的磷酸钾转染方法，可获得高达90%以上的转染效率，有利于进行较大规模的生产。获得了密码子优化的HPV结构蛋白的表达质粒，其可在哺乳动物细胞中高效表达HPVLl和L2基因，有利于高效组装假病毒。HPV假病毒的构建用CsCl密度梯度离心方法分别纯化带有HPV11Ll基因的质粒pllLlh、带有HPV11L2基因的质粒pllL2h、及带有绿色荧光蛋白基因的质粒pN31-EGFP(以上质粒由NIH的JohnT.Schi1ler教授馈赠)。CsCl密度梯度离心纯化质粒的方法参照《分子克隆第三版》。简言之将质粒转化大肠杆菌DH5ot，挑取单菌落接种到500mLLB培养基中，371C摇瓶培养16小时。9000g离心5min，收集菌体。每1000mL菌液收获的菌体，依次加入40mL溶液I(50mM葡萄糖，25mMTris-Cl(pH8.0)，10mMEDTA(pH=8.0))和2mLRNaseA(1jig/jiL)，40mL溶液II(0.2MNaOH，1%SDS)，48mL溶液III(5M乙酸钾60.OmL,冰乙酸11.5mL，去离子水28.5mL)。在冰上放置10迈in后，15000g，4匸离心20min，取上清与0.6倍体积的异丙醇混合，15000g离心30min,弃去上清，用70%乙醇洗沉淀1次，用TE'溶解沉淀，测定DM含量。在DNA溶液中溶入CsCl(每克DNA对应1.OlgCsCl),再溶入100uL10mg/mL的溴化乙锭溶液，用BeckmanNVT65转子，62000rpm，20匸离心10hr。用注射器针头收集闭环DNA区带，用等体积的异戊醇重复抽提4次。加入3倍体积的水和8倍体积的无水乙醇，20000g，4。C离心30min，收集DNA沉淀。75%酒精洗涤1次，用lmLTE溶解DNA沉淀。测定DNA溶液的浓度，分装成小份储存于-20t:。纯化后的pllLlh、pllL2h、pN31-EGFP用磷酸钙方法共转染培育于10cm细胞培养皿中的293FT细胞(Invitrogen)。.磷酸钓转染方法将pllLlh、pllL2h、pN31-EGFP各40ug加入lmL的HEPES溶液(每50mL去离子水含有pH=7.3的1MHepes125uL，4'C储存)和lmL的0.5mol/LCaCl2溶液的混合溶液，混合后逐滴加入2mL2xHeBS溶液(0.28MNaCl(16.36g)，0.05MHEPES(11.9g)，1.5mMNa2HPO4(0.213g)，溶解于lOOOmL去离子水，pH=6.96,-70t:储存)中，室温下静置lmin后将混合液加入培养有293FT细胞的10cm细胞培养亚中，6hr后弃去原培养液，加入lOmL完全培养液(invitrogen公司产品)。转染48hr后，弃去培养基，用PBS洗2次，将细胞刮下收集细胞，细胞计数，每108个细胞用lmL裂解液(0.25%Brij58，9.5mMMgCl2)重悬。裂解完成后，5000g离心10min，收集上清，加入5MNaCl(终浓度为850mM)，即为假病毒液，分装为小份后置于-20^C保存。将293FT细胞(Invitrogen)铺于96孔细胞培养板中(1.5x107孔)。5hr后进行中和实验，将待测的血清样品分别用10。/。DMEM进行连续倍比稀释，然后取50juL分别与50pL稀释于10。/。DMEM的上文制备的假病毒液(moi-O.1)混合。4t;孵育lh后分别加入预铺有293FT细胞的96孔细胞培养板中，37C培养72h后先用荧光观察确定各样品大概的中和滴度，再用流式细胞仪(EPICSXL,美国BeckmanCoulter公司)检测各孔细胞的感染率，计算单抗或多抗血清的准确中和滴度。感染率为细胞样品在阳性区中的细胞数量百分率减去未感染的对照细胞样品在阳性区的数量百分率。感染抑制率=(1-阻断孔的感染率/未阻断孔的感染率)x100%。抗体中和滴度的定义为达到高于50%感染抑制率的最大稀释倍数。经50倍稀释后能达到50%以上感染抑制率的单抗或多抗被视为具有中和能力。HPV11VLP疫苗免疫动物的免疫保护性评价兔普通级，雌性，6~8周龄，购自广西省疾病预防与控制中心，并在该中心饲养。实施例4所制备的HPV11N4C-L1类病毒颗粒初免与等量桶氏完全佐剂混合，加强免疫则与等量福氏不完全佐剂混合进行制备，免疫方式为肌肉注射，初次免疫剂量为100ug/只，此后分别于4，IO周各加强一次，加强免疫剂量为50ug/只。自免疫后，每周抽取外周静脉血，分离血清，保存待检。以上述假病毒中和细胞模型实验评估上述抗血清的中和效价，如图5所示。结果表明，本发明实施例4获得的HPV11N4C-L1类病毒颗粒混合配制成为疫苗，具有良好的免疫原性，可在动物体内诱导高滴度的中和抗体，可作为预防HPV感染的疫苗。HPV6/11二价疫苗免疫小鼠的免疫保护性评价免疫动物4-5周龄SPF级BALB/c小鼠4只，按本发明实施例l-4所述类似方法制备HPV6N5C-Ll类病毒颗粒。将上述2种类病毒颗粒HPV6N5C-L1和HPV11N4C-Ll按1:2(重量比)的比例混合，使得混合后的上述两种类病毒颗粒的浓度为40，80jLig/ml。之后，对于初免，再加入等体积的福氏完全佐剂与之混合均匀。加强免疫则与等体积福氏不完全佐剂混合进行制备。免疫方式为肌肉注射，初次免疫剂量为HPV6N5C-L1类病毒颗粒10jlig/只，HPV11N4C-L1类病毒颗粒20pg/只。此后分别于2周加强一次，加强免疫剂量为HPV6N5C-Ll类病毒颗粒20pg/只，HPV11N4C-L1，类病毒颗粒40|11g/只。自免疫后，每周抽取外周静脉血，分离血清，按实施例5所述方法分别检测免疫小鼠中针对HPV6，HPV11假病毒颗粒的中和抗体滴度。检测结果如图6所示，结果表明，由本发明实施例1-4所述方法获得的HPV6N5C-Ll,HPV11N4C-Ll两种类病毒颗粒混合而制备的HPV6、HPV11二价疫苗具有良好的免疫原性，可在动物体内诱导高滴度的针对HPV6，HPV11的中和抗体，可作为预防HPV6/HPV11感染的有效疫苗(除了实施例中所釆用的福氏佐剂外，该疫苗也可由本发明所制备的HPV16N5C-L1，HPV11N4C-L1两种类病毒颗粒与商用或自制的氢氧化铝或磷酸铝佐剂混合而成)。上述的HPV6N5C-L1类病毒颗粒的Ll氨基酸序列为(SEQIDNO:7):MetAspSerThrValTyrValProProProAsnProValSerLysVal1-"r51015ValAlaThrAspAlaTyrValThrArgThrAsnliePheTyrHisAla202530SerSerSerArgLeuLeuAlaValGlyHisProTyrPheSerlieLys354045ArgAlaAsnLysThrValValProLysValSerGlyTyrGinTyrArg505560ValPheLysValValLeuProAspProAsnLysPheAlaLeuProAsp65SerSerLeuPheAsp85GlyLeuGluValGly100HisProPheLeuAsn115GlyAsnProGlyGin130GinThrGinLeuCys145TrpGlyLysGlyLys165CysProProLeuGlu180ValAspThrGlyPhe195LysSerAspValPro210AspTyrLeuGinMet225PheLeuArgLysGlu245GlyGluValGlyGlu260GlyAsnArgThrSer275GlySerLeuValSer290LeuGinLysAlaGin305LeuPheValThrVal325CysAlaSerValThr340GluTyrMetArgHis355LeuCysSerlieThr370MetAsnProSerVal385ProAsnGlyThrLeu405lieThrCysGinLys420LysAsnLeuSerPhe70ProThrThrGinArg90ArgGlyGinProLeu105LysTyrAspAspVal120AspAsnArgValAsn135MetValGlyCysAla150GinCysThrAsnThr170LeulieThrSerVal185GlyAlaMetAsnPhe200lieAsplieCysGly215AlaAlaAspProTyr230GinMetPheAlaArg250ProValProAspThr265ValGlySerSerlie280SerGluAlaGinLeu295GlyHisAsnAsnGly310ValAspThrThrArg330ThrSerSerThrTyr345ValGluGluTyrAsp360LeuSerAlaGluVal375LeuGluAspTrpAsn390GluAspThrTyrArg410ProThrProGluLys425TrpGluValAsnUu7580LeuValTrpAlaCysThr95GlyValGlyValSerGly110GluAsnSerGlySerGly125ValGlyMetAspTyrLys140ProProLeuGlyGluHis155160ProValGinAlaGlyAsp175lieGinAspGlyAspMet190AlaAspLeuGinThrAsn205ThrThrCysLysTyrPro220GlyAspArgLeuPhePhe235240HisPhePheAsnArgAla255LeulielieLysGlySer270TyrValAsnThrProSer285PheAsnLysProTyrTrp300lieCysTrpGlyAsnGin315320SerThrAsnMetThrLeu335ThrAsnSerAspTyrLys350LeuGinPheliePheGin365ValAlaTyrlieHisThr380PheGlyLeuSerProPro395400TyrValGinSerGinAla415GinLysProAspProTyr430LysGluLysPheSerSer435440445GluLeuAspGinTyrProLeuGlyArgLysPheLeuLeuGinSerGly450455460TyrArgGlyArgSerSerlieArgThrGlyValLysArgProAlaVal465470475480SerLysAlaSerAlaAlaProLysArgLysArgAlaLysThrLysArg485490495HPV6/11/16/18四价疫苗免疫小鼠的免疫保护性评价免疫动物4-5周龄SPF级BALB/c小鼠4只。按本发明实施例l-4所述类似方法制备HPV6N5C-L1，HPV11N4C-L1，HPV16N30C-L1，和HPV18N65C-Ll类病毒颗粒。将上述4种类病毒颗粒HPV6N5C-L1，HPV11N4C-L1,HPV16N30C-L1，HPV18N65C-L1按1:2:2:1(重量比)的比例混合，使得混合后的上述四种类病毒颗粒的浓度为40，80，80，40ng/ml。之后，对于初免，再加入等体积的福氏完全佐剂与之混合均匀。加强免疫则与等体积福氏不完全佐剂混合进行制备。免疫方式为肌肉注射，初次免疫剂量为HPV6N5C-Ll，HPV18N65C-L1类病毒颗粒各10jug/只，HPV11MC-Ll，HPV16N30C-L1类病毒颗粒各20jug/只。此后分别于2周加强一次，加强免疫剂量为HPV6N5C-L1，HPV18N65C-L1类病毒颗粒各20|ig/只，HPV11N4C-L1,HPV16謂C-L1类病毒颗粒各40ng/只。自免疫后，每周抽取外周静脉血，分离血清，按实施例5所述方法分别检测免疫小鼠中针对HPV6，HPV11，HPV16，HPV18假病毒颗粒的中和抗体滴度。检测结果如图7所示，结果表明，由本发明实施例1-4所述方法获得的HPV6N5C-L1，HPV11N4C-L1，HPV16N30C-L1，HPV18N65C-Ll四种类病毒颗粒混合而制备的HPV6、HPVll、HPV16、HPV18四价疫苗具有良好的免疫原性，可在动物体内诱导高滴度的针对HPV6，HPV11，HPV16，HPV18的中和抗体，可作为预防HPV6/HPV11/HPV16/HPV18感染的有效疫苗(除了实施例中所采用的福氏佐剂外，该疫苗也可由本发明所制备的HPV6N5C-L1HPV11N4C-L1，HPV16N30C-Ll，HPV18N65C-L1四种类病毒颗粒与商用或自制的氢氧化铝或磷酸铝佐剂混合而成)。上述的HPV16N30C-L1类病毒颗粒的Ll氨基酸序列为(SEQIDNO:8):LeuProProValProValSerMetLeu1LysValHisAla35lieLys50LeuGin65GlyPheProVal20GlyLysTyrProCysSerGluAla5SerThrAspThrSerArgProAsnAsn55ArgValAspThr85TrpAlaCysValGly100GlylieSerGlyHis115AlaSerAlaTyrAla130SerMetAspTyrLys145ProlieGlyGluHis165ValAsnProGlyAsp180GinAspGlyAspMet195ThrUuGinAlaAsn210lieCysLysTyrPro225AspSerLeuPhePhe245LeuPheAsnArgAla260TyrlieLysGlySer275PheProThrProSer290AsnLysProTyrTrp305CysTrpGlyAsnGin325ThrAsnMetSerLeuPhe70SerValProThrGluLeu40AsnArgPheGluValTyr25LeuLyslieTyrTyrValAlalieHisAsn90GlyAla135GinThr150TrpVal105LeuLeuAsn120AsnAlaGlyGinLeuCysValGlyPro10AlaValLeuLeuProArgLysValCysSerLysGly170ProLeuGlu185ThrGlyLys215AspTyr230TyrAsp200SerGluVallieLysGlyGlyLeuAlaPheProMetGluArgArg250ValGlyAsp265ThrAlaAsnSer280SerMetValThrGly295LeuGinArgAlaGin310LeuPheValThrVal330CysAlaAlalieSerArgGlyVal60Pro75AspGlyLeuThrHis45ProAspThrGinAsn30ProLysProGinlieTyrValAsnArg95LeuAsp140LeulieAsp125AsnArgPro110AspThr155ProLeuGlyCyslieGlyThrGluCys15TyrPheSerLysLeuGlyGluCysLysValLeu220ValSer235GinAla205AsplieAsn190MetAspAsn175ThrValAsnLeuMetValGluPheCysProPheThrTyrArgVal255AspAspPro270SerSerAsnAla285AspAlaGinlieSer300GlyHisAsnAsnGly315ValAspThrThrArg335ThrSerGluThrThrTyrProGlyPhe80ValValAsnliePro160AlalieThrSerGly240HisLeuTyrPhelie320SerTyr340345350LysAsnThrAsnPhe355LeuGinPheliePhe370MetThrTyrlieHis385PheGlyLeuGinPro405PheValThrSerGin420ProLysGluAspPro435LysGluLysPheSer450PheLeuLeuGinAla465LysArgArgLysLysLysAlaThr485ArgLys500LysGluTyrLeuArg360GinLeuCysLyslie375SerMetAsnSerThr390ProProGlyGlyThr410AlalieAlaCysGin425LeuLysLysTyrThr440AlaAspLeuAspGin455GlyLeuGluAlaLys470ProThrThrSerSer490LeuHisGlyGluGluTyrAsp365ThrLeuThrAlaAsplie380lieLeuGluAspTrpAsn395400LeuGluAspThrTyrArg415LysHisThrProProAla430PheTrpGluValAsnLeu445PheProLeuGlyArgLys460ProLysPheThrLeuGly475480ThrSerThrThrAlaLys495NO:Met1ArgHisVal50Tyr65GlyTrpGlySer上述的HPV18N65C-LI类病毒颗粒的LI氨基酸序列为(SEQID9):AspAsnThrValTyrArgValAla35ProGinLeuAlaProVal20GlyAlaTyrProSerAsnSerGlyArgAsp85CysAla100SerGlyLeu115HisAlaAla130SerValAspTyr1455ThrSerGlyValThrGlyHisThrLysAsnAspArgGly55Phe70SerValProThrAspLeu40AsnArglieGluValTyr25LeuLysValTyrValThrGinGinAsn90Glylie105TyrAsnPhe120SerAsnValSer135GinThrGinUu150Leu10ThrValAspLeuProArgLysGluCysProArgGlylie60Pro75GluGlyLeuProThrAsn45ProAspThrGinProSer30ProLysProGinSerlieTyrValAsnArg95Pro110AspAspThr125AspValArgAsp140lieLeuGlyCys155Val15PhePheSerLysLeuGlyGluAsnAlaAlaTyrArgAlaPhe80ValValSerValPro160AlalieGlyGluHis165LeuSerGinGlyAsp180GluAspGlyAspMet195ThrLeuGinAspThr210lieCysLysTyrPro225AspSerMetPhePhe245PheTrpAsnArgAla260TyrlieLysGlyThr275SerProSerProSer290AsnLysProTyrTrp305CysTrpHisAsnGin325ThrAsnLeuThrlie340TyrAspAlaThrLys355AspLeuGinPhelie370ValMetSerTyrlie385AsnPheGlyValPro405ArgPheValGinSer420AlaGluAsnLysAsp435LeuLysGluLysPhe450LysPheLeuValGin465ArgLysArgSerAla485ArgValArgValArg500TrpAlaLysGlyThr170CysProProLeuGlu185ValAspThrGlyTyr200LysCysGluValPro215AspTyrLeuGinMet230CysLeuArgArgGlu250GlyThrMetGlyAsp265GlyMetArgAlaSer280GlySerlieValThr295LeuHisLysAlaGin310LeuPheValThrVal330CysAlaSerThrGin345PheLysGinTyrSer360PheGinLeuCysThr375HisSerMetAsnSer390ProProProThrThr410ValAlalieAlaCys425ProTyrAspLysLeu440SerLeuAspLeuAsp455AlaGlyLeuArgArg470ProSerAlaThrThr490AlaArgLysAlaCysLysSerArgPro175LeuLysAsnThrValLeu190GlyAlaMetAspPheSer205LeuAsplieCysGinSer220SerAlaAspProTyrGly235240GinLeuPheAlaArgHis255ThrValProGinSerUu270ProGlySerCysValTyr285SerAspSerGinLeuPhe300GlyHisAsnAsnGlyVal315320ValAspThrThrArgSer335SerProValProGlyGin350ArgHisValGluGluTyr365lieThrLeuThrAlaAsp380SerlieLeuGluAspTrp395400SerLeuValAspThrTyr415GinLysAspAlaAlaPro430LysPheTrpAsnValAsp445GinTyrProLeuGlyArg460LysProThrlieGlyPro475480AlaSerLysProAlaLys495上述的HPV6N5C-L1类病毒颗粒的Ll氨基酸序列显示如上(SEQIDNO:7)。实施例6:依据本发明实施例1-5所采用的技术，制备具有序列2，3，4的截短HPV11L1蛋白，以上截短蛋白均可纯化得到纯度达到98%以上的蛋白，组装为半径25nm左右的类病毒颗粒。结果见图8、图9和图10。序列表<110〉厦门大学〈120>截短的人乳头瘤病毒11型L1蛋白<130〉IDC080069<歸11<170>Patentlnversion3.2〈210〉1<211〉498<212>PRT<213〉人工<400>1MetSerAsp1ValValAlaSer35LysLys50ArgVal65AspSerThrGlyAla20SerValPheSerSerThrSerAsnLysLeu85GluGlyHis115TyrGlyGly130TyrLysGin145GluHisTrpLeu100ProLeuAsnThrThr5AspArgLysValPheValLeuProGinLysGlyAspCys180AspMetValAspThr195ThrAsnLysSerAsp210TyrProAspTyrLeu225PhePheTyrLeuArg245ArgAlaGlyThrValValAlaLeuThr55Val70AspTyrTyrLeu40ValLeuProArgLysValVal25AlaValProThrGlyProPro10LysArgValGlyProLysAspProGly165ProProThrGin90GlyArgGlyGinPro105AsnLysTyrAspAsp120GlyGinAspAsnArg135LeuCysMetValGly150GlyThrGinCysSer170LeuGluLeulieThr185GlyPheGlyAlaMet200ValProLeuAsplie215GinMetAlaAlaAsp230LysGluGinMetPhe250GlyGluProValProProThrHisVal60Asn75ArgLeuValAsnAsnPro45SerLysLeuGlyProlie30TyrGlyPheValValPheTyrTyrAlaTrp95GlySerLys15TyrHisSerlieGluTyrLeuPro80AlaCysVal110AsnSerGlu125AsnValGlyValGlyMetLeuGinVal140CysAlaProPro155AsnThrSerVal175SerVallieGinAsp190AsnPheAlaAspLeu205CysGlyThrValCys220ProTyrGlyAspArg235AlaArgHisPhePhe255AspAspLeuLeuValSerGlyAspGly160AsnGlyGinLysLeu240AsnLys260265270GlyGlyAsnAsnArg275ProSerGlySerLeu290TyrTrpLeuGinLys305AsnHisLeuPheVal325ThrLeuCysAlaSer340TyrLysGluTyrMet355PheGinLeuCysSer370HisThrMetAsnPro385ProProProAsnGly405GinAlalieThrCys420ProTyrLysAspMet435SerSerGluLeuAsp450SerGlyTyrArgGly465AlaValSerLysPro485SerSerValAlaSer280ValSerSerGluAla295AlaGinGlyHisAsn310ThrValValAspThr330ValSerLysSerAla345ArgHisValGluGlu360lieThrLeuSerAla375SerVal390ThrLeuGinLysLeuGluAspGluAspThr410ProThrPro425TrpGluValSerPhe440GinPheProLeuGly455ArgThrSerAlaArg470SerThrAlaProLys490SerlieTyr285GinLeuPhe300AsnGlylie315ThrArgSerValHisAsnLysCysTrpThrAsn335AsnSerThrTyrThr350PheAspLeuGinPhe365GluValMet380TrpAsn395TyrGluAsnArgLysPheTyrAlaTyrGlyUuValGin415LysGinArg460ThrGly475ArgLeu445LysPheGlu430LysGluLysLyslieArgLeuLeuLysArgThrLys495ThrProGly320MetAsplielieSer400SerAspPheGinPro480ThrLysLys<210>2〈211>499<212>PRT<213>人工<400〉2MetProSerAspSerThrValTyrValProProProAsnProValSer151015LysValValAlaThrAspAlaTyrValLysArgThrAsnliePheTyr202530HisAlaSerSerSerArgLeuLeuAlaValGlyHisProTyrTyrSer354045lieLysLysValAsnLysThrValValProLysValSerGlyTyrGin505560TyrArgValPheLysValValLeuProAspProAsnLysPheA1bLeu65707580ProAspSerSerLeu85CysThrGlyLeuGlu100SerGlyHisProLeu115GlyTyrGlyGlyAsn130AspTyrLysGinThr145GlyGluHisTrpGly165AsnGlyAspCysPro180GlyAspMetValAsp195GinThrAsnLysSer210LysTyrProAspTyr225LeuPhePheTyrLeu245AsnArgAlaGlyThr260LysGlyGlyAsnAsn275ThrProSerGlySer290ProTyrTrpLeuGin305GlyAsnHisLeuPhe325MetThrLeuCysAla340AspTyrLysGluTyr355liePheGinLeuCys370lieHisThrMetAsn385SerProProProAsn405SerGinAlalieThr420AspProTyrLysAsp435PheAspProThrThr90ValGlyArgGlyGin105LeuAsnLysTyrAsp120ProGlyGinAspAsn135GinLeuCysMetVal150LysGlyThrGinCys170ProLeuGluLeulie185ThrGlyPheGlyAla200AspValProLeuAsp215LeuGinMetAlaAla230ArgLysGluGinMet250ValGlyGluProVal265ArgSerSerValAla280LeuValSerSerGlu295LysAlaGinGlyHis310ValThrValValAsp330SerValSerLysSer345MetArgHisValGlu360SerlieThrLeuSer375ProSerValLeuGlu390GlyThrUuGluAsp410CysGinLysProThr425MetSerPheTrpGlu440GinArgLeuValTrpAla95ProLeuGlyValGlyVal110AspValGluAsnSerGly125ArgValAsnValGlyMet140GlyCysAlaProProLeu155160SerAsnThrSerValGin175ThrSerVallieGinAsp190MetAsnPheAlaAspLeu205lieCysGlyThrValCys220AspProTyrGlyAspArg235240PheAlaArgHisPhePhe255ProAspAspLeuLeuVal270SerSerlieTyrValHis285AlaGinLeuPheAsnLys300AsnAsnGlylieCysTrp315320ThrThrArgSerThrAsn335AlaThrTyrThrAsnSer350GluPheAspLeuGinPhe365AlaGluValMetAlaTyr380AspTrpAsnPheGlyLeu395400ThrTyrArgTyrValGin415ProGluLysGluLysGin430ValAsnLeuLysGluLys445PheSerSer450GinSerGly465ProAlaValThrLysLysGluLeuAspGinPheProLeuGlyArg455460TyrArgGlyArgThrSerAlaArgThr470475SerLysProSerThrAlaProLysArg485490LysPheLeuLeuGlylieLysArg480LysArgThrLys495〈210>3<211〉497<212〉PRT<213>人工<400>3MetAspSerThrVal15ValAlaThrAspAlaSerLys50Val65SerSer35ValPheSerLeuPro20SerArgAsnLysLysValLeuThrValAspGlyAsnGlyLeuGlyLeuPhe85GlyLeuGluVal100HisProLeuLeu115GlyGlyAsnPro130LysGinThrGin145HisTrpGlyLys165AspCysProProLeu180MetValAspThrGly195AsnLysSerAspVal210ProAspTyrLeuGin225PheTyrLeuArgLys245TyrValProProTyrValLysArg25LeuAlaValGly40ValValProLys55LeuProAspPro70ProThrThrGin90ArgGlyGinPro105LysTyrAspAsp120GinAspAsnArg135CysMetValGly150ThrGluPheGinLeuPro10ThrHisValAsnArgLeuValValCysAsnCysSer170lieThrSer185AlaMetAsnGly200LeuAsplieCysPro215MetAlaAlaAspPro230GluGinMetPheAla250AsnAsnProSer60Lys75LeuGlyGluProlieTyr45GlyPheValValValPhe30TyrTyrAlaTrpSerTyrSerGinLeuAla95ValGly110SerGlyLysVal15HisAlalieLysTyrArgProAsp80CysThrSerGlyGlyTyrAspTyrAsn125AsnValGlyMet140AlaProProLeuGlyGlu155160ThrSerValGinAsnGly175VallieGinAspGlyAsp190PheAlaAspLeuGinThr205GlyThrValCysLysTyr220TyrGlyAspArgLeuPhe235240ArgHisPhePheAsnArg255AlaGlyThrValGlyGluProValProAspAspLeuLeuValLysGly260265270GlyAsnAsnArgSerSerValAlaSerSerlieTyrValHisThrPro275280285SerGlySerLeuValSerSerGluAlaGinLeuPheAsnLysProTyr290295300TrpLeuGinI>ysAlaGinGlyHisAsnAsnGlylieCysTrpGlyAsn305310315320HisLeuPheValThrValValAspThrThrArgSerThrAsnMetThr325330335LeuCysAlaSerValSerLysSerAlaThrTyrThrAsnSerAspTyr340345350LysGluTyrMetArgHisValGluGlu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s150TrpAlaLysGlyThr170CysProProUuGlu185ValAspThrGlyTyr200LysCysGluValPro215AspTyrLeuGinMet230CysLeuArgArgGlu250GlyThrMetGlyAsp265GlyMetArgAlaSer280GlySerlieValThr295LeuHisLysAlaGin310LeuPheValThrVal330CysAlaSerThrGin345PheLysGinTyrSer360PheGinLeuCysThr375HisSerMetAsnSer390ProProProThrThr410ValAlalieAlaCys425ProTyrAspLysLeu440SerLeuAspLeuAsp455AlaGlyLeuArgArg470ProSerAlaThrThr125AspValArgAspAsnVal140lieLeuGlyCysAlaPro155160AlaCysLysSerArgPro175LeuLysAsnThrValLeu190GlyAlaMetAspPheSer205LeuAsplieCysGinSer220SerAlaAspProTyrGly235240GinLeuPheAlaArgHis255ThrValProGinSerUu270ProGlySerCysValTyr285SerAspSerGinLeuPhe300GlyHisAsnAsnGlyVal315320ValAspThrThrArgSer335SerProValProGlyGin350ArgHisValGluGluTyr365lieThrLeuThrAlaAsp380SerlieLeuGluAspTrp395400SerLeuValAspThrTyr415GinLysAspAlaAlaPro430LysPheTrpAsnValAsp445GinTyrProUuGlyArg柳LysProThrlieGlyPro475480AlaSerLysProAlaLys485490495ArgValArgValArgAlaArgLys500<210>10<211〉27<212>腿<213>人工序列<400>10catatgagcgacagcacagtatatgtg27<210〉11<211>30<212>DM<213>人工序列<400>11gtcgacttactttctggttttggtacgttt30权利要求1.N端截短了3个、4个、5个或6个氨基酸的HPV11L1蛋白。2.权利要求l的蛋白，其具有序列1、2、3、或4，优选序列1。3.编码权利要求l-2任一项的蛋白的多核苷酸。4.包含权利要求3的多核苷酸的载体。5.包含权利要求4的载体的细胞。6.包含权利要求1或2的蛋白的组合物。7.—种HPV11类病毒颗粒，其中该类病毒颗粒含有权利要求1或2的蛋白或者由权利要求1或2的蛋白形成。8.—种制备HPVLl蛋白例如权利要求1或2的蛋白的方法，其包括a)在大肠杆菌表达系统中表达编码HPVL1的HPVLl基因，b)将表达了HPVLl蛋白的大肠杆菌在盐浓度100mM-600mM中破碎，分离得到上清液，c)用水或低盐溶液将b)上清液中盐浓度降至100mM或以下，最低至0，收集沉淀，d)将c)中沉淀在150mM-2500mM盐溶液中重新溶解，同时加入还原剂，分离得到溶液，其中含纯度至少50%的HPVLl蛋白。9.一种用于预防尖锐湿疣或HPV感染的疫苗，其包含(l)权利要求7的HPV11类病毒颗粒，(2)可有可无的至少一种(例如2、3、4种)选自6，16，18，31，33，45,52，和58型别的HPV类病毒颗粒(例如HPVLl类病毒颗粒)，及(3)疫苗用赋形剂或载体优选地，所述疫苗含有HPV6类病毒颗粒和HPV11类病毒颗粒，特别是，含有具有SEQIDN0:7所示氨基酸序列的蛋白质的HPV6类病毒颗粒和含有具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的蛋白质的HPV11类病毒颗粒，更优选还含有HPV16类病毒颗粒和HPV18类病毒颗粒，特别是含有具有SEQIDN0:8所示氨基酸序列的蛋白质的HPV16类病毒颗粒和含有具有SEQIDNO:9所示氨基酸序列的蛋白质的HPV18类病毒颗粒。10.权利要求1-2任一项的蛋白或权利要求7的类病毒颗粒在制备用于预防尖锐湿疣或HPV感染的疫苗中的用途。11.一种预防尖锐湿疣或HPV感染的方法，其包括将含预防有效量的权利要求1-2任一项的HPV11LI蛋白或权利要求7的类病毒颗粒的疫苗或预防有效量的权利要求9的疫苗给予需要预防尖锐湿疣或HPV感染的人。12.获得HPVllLI蛋白类病毒颗粒的方法，其包括e)将纯度至少50%的权利要求1或2的HPV11LI蛋白进一步通过色镨层析纯化，f)将e)步骤中得到的HPV11Ll蛋白去除还原剂。13.制备用于预防尖锐湿疣或HPV感染疫苗的方法，其包括将权利要求7的类病毒颗粒与任选的一种或多种选自HPV6,16，18,31，33，45，52，和58的HPV型别的类病毒颗粒及疫苗用载体或者赋形剂混合。全文摘要本发明涉及一种截短的人乳头瘤病毒11型L1蛋白，及由其组成的类病毒颗粒，含该类病毒颗粒的疫苗及其在预防尖锐湿疣或HPV感染中的用途。文档编号C12N15/37GK101343314SQ200810111389公开日2009年1月14日申请日期2008年5月29日优先权日2007年5月29日发明者夏宁邵,军张,李少伟,杨春燕,晋王,颖顾申请人:厦门大学;北京万泰生物药业股份有限公司