专利名称：一株青霉菌株及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株青霉菌株及其应用。
背景技术：
当前世界正陷于能源危机，要改变现状，需要寻找新的替代型能源，燃料乙醇 作为一种清洁可再生能源已在许多国家使用。
淀粉是植物重要的能量储存形式(Steven Ball, Han-Ping Guan, Martha James. From glycogen to amylopectin: a model for the biogenesis of the plant starch granule[J]. Cell, 1996， 86:349-352.)，对于多种生物体具有重大的意义。淀粉 可以供给生物生命所需的能量，淀粉的降解产物可以制成各种各样的产品，应用于 人类社会的各个方面。我国是农业大国，做好淀粉的综合利用工作，对国计民生和 社会安定等多方面具有极大的促进作用。淀粉是葡萄糖的聚合物，直链淀粉 (amylose)是以ct-1， 4糖苷键连接而成的没有分枝的线形分子，支链淀粉 (amyl叩ectin)在线形分子上存在少数以a -1， 6糖苷键连接的支链(N. K. Matheson， R.A.Caldwell. Modeling of a (1-4) chain arrangements in a (1-4) (1-6) glucans: The action and outcome of P—amylase and尸5"ewo^/z cv as 5^wtzeri amylase on ana (1—4) (1—6) glucan model [J]. Carbohydrate Polymers, 2008， 72:625—637.)。 淀粉酶不是单一的某一种酶，而是能够降解淀粉的酶的统称，依据淀粉酶的作 用方式可以将其分为外切型和内切型两大类。内切型淀粉酶能切开淀粉分子内部的 a-l， 4和ct-l， 6糖苷键，包括a-淀粉酶、普鲁兰酶和麦芽六糖酶等。外切型淀 粉酶包括P -淀粉酶、a -葡萄糖苷酶和葡萄糖淀粉酶等(N. S. Reddy， Annapoorna Ni咖agadda， K. R. S. Sambasiva Rao. An overview of the microbial a -amylase family [J]. African Journal of Biotechnology, 2003，2(12):645-648; Marc J E C， Van der Maarel， Bart v肌der Veen. Properties and applications of starch-converting enzymes of the a-amylase family[J]. Journal of Biotechnology, 2002， 94:137-155.)。 a -淀粉酶(a-1， 4-D-Glucanohydrolase; EC3. 2. 1. l)从 淀粉分子内部水解a-l， 4糖苷键，不能水解a-1， 6糖苷键，水解a-1， 4糖苷 键的先后次序是无规律的。a -淀粉酶水解淀粉的终产物随酶的性质不同而不同
水解直链淀粉的最终产物一般含有麦芽低聚糖、麦芽糖和葡萄糖中的一种或几种； 水解支链淀粉的最终产物除a-极限糊精外，还可能含有麦芽低聚糖、麦芽糖和葡 萄糖中的一种或几种。普鲁兰酶(Amylopullulanase; EC: 3.2.1.41)水解淀粉内 部a-1， 6糖苷键，起脱支链作用。麦芽六糖酶(Maltotetraose-forming alpha-amylase; EC: 3. 2. 1. 98)每次催化释放6个葡萄糖单位。3-淀粉酶(P -amylase; EC: 3. 2. 1. 2)从淀粉分子的非还原性末端开始，水解相间隔的a-1， 4 糖苷键，每次作用释放出一个麦芽糖分子；不能水解a-l， 6糖苷键，遇此键即停 止水解作用。P-淀粉酶水解直链淀粉时产物全部为麦芽糖，水解支链淀粉时产物 为麦芽糖和P-极限糊精。a-葡萄糖苷酶(a-glucosidase; EC 3. 2. 1. 20)作用 于淀粉分子的非还原性末端，每次作用释放出一个异头碳为a -构型的葡萄糖分子。 葡萄糖淀粉酶(Glucoamylase; EC: 3. 2. 1. 3)俗称糖化酶，作用于淀粉分子的非还 原性末端，每次作用释放出一个异头碳为e-构型的葡萄糖分子，不仅能水解a-l， 4糖苷键，还能微弱水解a-l， 6糖苷键，因此葡萄糖淀粉酶能把直链淀粉和支链 淀粉全部水解为葡萄糖。
以淀粉为原料生产燃料乙醇一般分为如下几步去除杂质、原料粉碎、原料降 解和醪液调节、发酵、蒸馏和后加工(章克昌，吴佩琮.酒精工艺手册[M].北京 中国轻工业出版社，2000.)。在传统工艺中，由于原料降解和微生物发酵产酒精两 步工序所需的环境条件不同，为了能高效生产，这两步工序是分开进行的，这就是 所谓的"两步法"(Lee R Lynd, Paul J Weimer, Willem H van Zyl. Microbial cellulose utilization fundamentals and biotechnology[J]. Microbiology and Molecular Biology Reviews, 2002, 66(3) :506 - 577.)。有的学者提出改进的工艺，
是将原料降解和微生物发酵产酒精这两步工序合并成一步的"一步法"，即"同步 糖化发酵，，(Per Sassner， Guido Zacchi. Integration options for high energy efficiency and i.mproved economics in a wood-to-ethanol process [J]. Biotechnology for Biofuels， 2008， 1 (4) : 1-11.)。相对于"两步法"工艺，"同步 糖化发酵"工艺主要有四个优点①可发酵性糖(原料降解的产物) 一产生就被发 酵微生物利用，其浓度可以一直维持在较低水平，消除了产物的反馈抑制，使得原 料的降解能更高效地进行；②可发酵性糖一旦产生就被发酵微生物利用，使得杂菌 没有可利用的碳源，可以一定程度抑制杂菌生长；③在较低温度下进行原料的降解， 节省了传统维持降解所用温度所需的费用，节省了生产成本；④縮减了单独原料降
解的工序，提高了设备利用率(Sudip Roy， Ravindra D Gudi， K V Venkatesh， et al. Optimal control strategies for simultaneous saccharification and fermentation of starch[J]. Process Biochemistry, 2001， 36:713 - 722; Karin 0 hgren， Renata Bura， Gary Lesnicki. A comparison between simultaneous saccharif ication and fermentation and separate hydrolysis and fermentation using steam- pretreated corn stover[J]. Process
Biochemistry, 2007， 42:834-839.)。虽然淀粉"同步糖化发酵"生产酒精工艺具有 良好的应用前景，但由于酵母菌发酵产酒精需要酸性低温条件，目前仍缺乏可以在 酸性低温条件高效发挥作用的淀粉酶。商业用的糖化酶来自于黑曲霉，最适作用温 度是6(TC，在酵母菌发酵温度(约3(TC)时，糖化酶只有在6(TC活力的三分之一， 尽管也能将该糖化酶用于淀粉同步糖化发酵工艺生产酒精，但糖化酶效率低下，这 是淀粉"同步糖化发酵"生产酒精高成本的原因之一。
发明内容
本发明的目的是提供一株青霉菌株及其应用。
本发明所提供的青霉(尸e/^'cj77i鹏)菌株，名称为1-95，已于2008年08 月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址 为北京市朝阳区大屯路)，保藏号为CGMCC No. 2645。
本发明还提供了利用该菌株生产淀粉酶的方法。
本发明所提供的生产淀粉酶的方法，是发酵青霉(尸e/n'^7h'咖印.)1-95 CGMCC No. 2645，得到淀粉酶。
发酵青霉l-95可采用如下培养基:每升培养基中含有8-12g可溶性淀粉、2-3g (NH4)2S04、 2-4gKH2P04、 4-6g胰蛋白胨、0. 1-0. 3gMgS(V 7H20、 0. 10-0. 15g CaCl2、 0. 020-0. 030g FeS04* 7H20; pH5-6。优选采用如下培养基每升培养基中含有10g 可溶性淀粉、2.5g (NH》2S04、3gKH2P04、5g胰蛋白胨、0.2gMgS(V 7H20、 0. 13gCaCl2、 0. 0255g FeS(V 7H20; pH5. 5。
发酵青霉可采用真菌的常用培养温度，优选28。C。在2『C，发酵的第九天， 淀粉酶产量达到最高。
以上方法制备得到的淀粉酶也属于本发明的保护范围。该淀粉酶在pH3. 5-6. 5 均有活性，优选pH4.5-5.5，最适pH值为5.0;该淀粉酶在15-7(TC温度下均有活 性，优选35-5(TC，最适温度为45"C。
本发明所提供的青霉(尸e/LZ'w7h'鹏)1-95 CGMCC No. 2645和淀粉酶均可应用 于酒精生产中。
本发明所提供的青霉(尸e/w'd7h'Mz ) 1-95 CGMCC No. 2645可通过发酵得 到淀粉酶，该淀粉酶的最适pH值为5.0，最适温度为45"C。与现有的淀粉酶比较， 本发明的淀粉酶的最适作用条件更接近酵母菌的发酵条件。所以将本发明所提供的 青霉(尸e/w'cj7W朋7 sp. ) 1-95 CGMCC No. 2645或发酵该菌得到的淀粉酶应用于同 步糖化发酵产酒精工艺中，有望解决糖化酶效率低下造成的淀粉"同步糖化发酵" 生产酒精高成本的问题。
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。
图1为菌株1-95在分离平板上的形态。
图2为菌株1-95在分离平板上的淀粉降解圈。
图3为菌株1-95在PDA平板上的形态。
图4为菌株1-95在光学显微镜下的形态。
图5为青霉1-95淀粉酶在不同pH条件下的活力曲线。
图6为青霉1-95淀粉酶在不同温度条件下的活力曲线。
图7为青霉1-95淀粉酶的温度耐受性分析。
图8为青霉1-95淀粉酶水解淀粉的产物分析。
图9为青霉1-95淀粉酶在发酵产酒精过程中的酒精含量和残糖含量。
具体实施例方式
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。以下实施例中所用 的DNA聚合酶等生化试剂购自SIGMA，各种药品均为国产分析纯。 实施例l、青霉(尸e/w'cW"'MZ7印.)1-95 CGMCC No. 2645的获得 一、菌株的获得
1、 土壤样品的采集
拨开上层土，釆集约5cm处的松软泥土。 土壤样品采集地广西壮族自治区梧 州市农村。
2、 菌株的分离和初步筛选
用去离子水配制固体琼脂培养基(诸葛斌，诸葛健.生淀粉糖化酶高产菌的选育 [J].微生物学通报，2001,28 (6) : 60-64.)，每升培养基中含有10g可溶性淀粉、3gNaN03、 lgKH2P04、 0. 5g KC1、 0. 5g MgS(V 7H20、 0. Olg FeS(V 7H20、 25g琼脂; pH5. 5。将配制好的培养基在15磅/英寸2的压力下湿热灭菌20分钟。
采用透明圈法(谢广发，夏祖宏.筛选糖化菌的方法-透明圈法[J].中国酿 造.1998(1) :30)进行分离和初步筛选，具体步骤如下
称取0. 5g 土壤样品置于250mL小锥形瓶中，加入49. 5mL灭菌水，180rpm震荡 60min，取悬浊液稀释为10—3、 10—4、 10—5、 10—6、 10—7、 10一8和10—9共7个梯度，各稀 释梯度取5(HtL涂分离平板，28t:恒温培养4天后，观察各平板菌落生长情况，选 择生长真菌单菌落数量为15-20个的稀释度涂大量平板，28。C培养5天后用碘液染 色，挑取有明显淀粉降解圈的真菌菌落稀释涂平板至纯种，并保存纯种。
3、淀粉降解菌的复筛
用去离子水配制液体发酵培养基(张丽苹，徐岩.酸性a -淀粉酶生产菌株的选 育的初步研究[J].工业微生物,2002， 32(4) :11- 14.)，每升培养基中含有10g 可溶性淀粉、2.5g (NH4)2S04、3gKH2P04、5g胰蛋白胨、0.2gMgS(V 7H20、 0. 13gCaCl2、 0.0255g FeS(V 7H20; pH5. 5。将配制好的培养基15磅/英寸2的压力下湿热灭菌 20分钟。
具体的复筛步骤如下
将初筛获得的真菌菌种平板活化后取孢子制成悬液，调孢子浓度为1X107个 /mL，按照1%的接种量接种至液体发酵培养基(500mL三角瓶装液量100mL)。温度 28°C、转速180rpm，震荡培养5天后取粗酶液分别在3(TC和6(TC下测定淀粉酶活 力，从中筛选出淀粉酶活力最强的菌株1-95。
菌株1-95在分离平板上的形态见图1，菌株1-95在分离平板上的淀粉降解圈 见图2。
二、菌株鉴定
生长特征菌株1-95在PDA平板上生长缓慢，28。C培养5天后直径仅1.5cra。 形态特征菌株1-95在PDA平板上生长5天后的形态见图3。菌落生长初期菌 丝为白色，然后慢慢变黄，再分化出分生孢子梗，至分化出分生孢子时菌落变为青 色。菌落初期为松散的绒毛状，至分化出分生孢子时菌落变得致密。用光学显微镜 观察到菌丝有隔，分生孢子梗为扫帚状，共有二轮分生孢子小梗，在第二轮分生孢 子小梗的顶端分化出分生孢子(见图4)。分生孢子为圆形或椭圆形。 参照《真菌鉴定手册》将菌株1-95鉴定为青霉属(尸朋A^'7h'咖)。
通过菌株1-95的生长特征鉴定和形态特征鉴定，确认菌株1-95为青霉属 (尸朋ic^7i咖)。将青霉(尸朋ici77i鹏s; . ) 1-95保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 2645。
实施例2、青霉(尸朋icWh'鹏w. ) 1-95 CGMCC No. 2645生产的淀粉酶的酶 学特性
酶活力定义将可溶性淀粉溶于pH4. 0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，使其终 浓度为0.25% (每100毫升溶液中含有0.25克可溶性淀粉)，3(TC条件下，每小时 释放出相当于1毫克葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。
酶活力测定方法采用DNS(3， 5-dinitrosalicylate)法。3， 5-二硝基水杨酸 (DNS)与还原糖共热后被还原成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，该物质在540 nm 处有特征吸收峰。在一定的浓度范围内，还原糖的量和棕红色物质颜色的深浅程度 成一定的比例关系，因此可以通过测定540 nm的光吸收值对还原糖进行定量
(Miller G L Use of dinitrosalicyclic acid reagent for determination of reducing sugar. Biotechnol Bioeng Symp 1959,5:193-219.)。
青霉(尸e/7ic^7/〃//7 sp. ) 1-95 CGMCC No. 2645于28°C、 180rpm振荡培养9 天后取发酵液13000rpm离心5min，上清液即为粗酶液。
一、 青霉1-95生产的淀粉酶的酶活力
将粗酶液稀释20倍，作为待测酶液A;将粗酶液稀释20倍，煮沸5min灭活， 作为待测酶液B(空白对照)。
1、 将可溶性淀粉溶于pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液(每 100毫升溶液中含有0.25克可溶性淀粉)。
2、 在350PL淀粉溶液中加入50PL待测酶液30。C反应1小时。
3、 加两倍体积DNS终止反应并煮沸5min显色。
4、 测定540 nm的光吸收值，计算酶活力。 设置三次重复试验，结果取平均值。
待测酶液的酶活力为1.50 U/mL，所以粗酶液的酶活力为30.00 U/mL。
二、 青霉1-95生产的淀粉酶的最适作用pH值
将粗酶液稀释至5倍体积，作为待测酶液A;将粗酶液稀释至5倍体积，煮沸 5min灭活，作为待测酶液B (空白对照)。
1、将可溶性淀粉分别溶于pH3. 5至6. 5 (以0. 5作为pH梯度)的磷酸氢二钠- 柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液，各淀粉溶液中淀粉的终浓度均为0.25% (每100毫 升溶液中含有0.25克可溶性淀粉)。
2、 在350叱淀粉溶液中加入50叱待测酶液3(TC反应15min。
3、 加两倍体积DNS终止反应并煮沸5min显色。
4、 测定540 nm的光吸收值，计算酶活力。 设置三次重复试验，结果取平均值。
将待测酶液的酶活力乘以稀释倍数，得到粗酶液的酶活力。粗酶液的酶活力为 10. 10 U/mL (pH3, 5) 、 30. 00 U/mL (pH4. 0) 、 39. 69 U/mL (pH4. 5) 、 42. 73 U/mL (pH5. 0) 、 37. 56 U/mL (pH5. 5) 、 28. 45 U/mL (p朋.0) 、 15. 08 U/mL (p服.5)。
以最高酶活力作为100%，其他pH值的酶活力折算为相对于最高酶活力的相对 酶活力。以pH值为横坐标，相对酶活力为纵坐标作图，见图5。
结果表明，青霉1-95生产的淀粉酶的最适作用pH约为5. 0。
三、青霉1-95生产的淀粉酶的最适作用温度
将粗酶液稀释至5倍体积，作为待测酶液A;将粗酶液稀释至5倍体积，煮沸 5min灭活，作为待测酶液B (空白对照)。
1、 将可溶性淀粉溶于pH4. 0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液(每 100毫升溶液中含有0.25克可溶性淀粉)。
2、 在350叱淀粉溶液中加入50HL待测酶液，分别在15-7CTC (以5。C作为温 度梯度)反应15min。
3、 加两倍体积DNS终止反应并煮沸5rain显色。
4、 测定540 nm的光吸收值，计算酶活力。 设置三次重复试验，结果取平均值。
将待测酶液的酶活力乘以稀释倍数，得到粗酶液的酶活力。粗酶液的酶活力为 15.45U/mL (15°C) 、 19. 10 U/mL (20°C) 、 22. 81 U/mL (25°C) 、 30. 00 U/mL (30 。C) 、 33.87 U/mL (35°C) 、 35.96 U/mL (40°C) 、 37.25 U/mL (45°C) 、 33.34 U/mL (50°C) 、 25.71U/mL (55°C) 、 17. 09 U/mL (60°C) 、 11. 20 U/mL (65°C)、 5.47 U/mL (70°C)。
以最高酶活力作为100%，其他温度的酶活力折算为相对于最高酶活力的相对 酶活力。以温度为横坐标，相对酶活力为纵坐标作图，见图6。
结果表明，青霉1-95生产的淀粉酶的最适作用温度约为45°C。
四、 青霉1-95生产的淀粉酶的温度耐受性
将粗酶液稀释至4倍体积，作为酶液A;将粗酶液稀释至4倍体积，煮沸5min 灭活，作为酶液B (空白对照)。取若干份酶液A，分别在35'C、 40°C、 45。C和50 。C下保温1-6h;同样，取若干份酶液B，分别在35'C、 40°C、 45。C和5(TC下保温 1-6h。
1、 将可溶性淀粉溶于pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液，各 淀粉溶液中淀粉的终浓度均为0. 25%(每100毫升溶液中含有0. 25克可溶性淀粉)。
2、 每350叱淀粉溶液中加入5(HiL不同温度处理后的酶液，3(TC反应15min。
3、 加两倍体积DNS终止反应并煮沸5min显色。
4、 测定540 nm的光吸收值，计算酶活力。 设置三次重复试验，结果取平均值。
将待测酶液的酶活力乘以稀释倍数，得到粗酶液的酶活力。粗酶液的酶活力为 35。C处理lh:30. 00 U/mL、 2h: 29.96 U/mL、 3h: 30.00 U/mL、 4h: 30.00 U/mL、 5h: 29.38 U/mL、 6h: 29.18 U/mL; 40。C处理lh:23. 81 U/mL、 2h: 21.48 U/mL、 3h: 20.71 U/mL、 4h: 16.84 U/mL、 5h: 14.12 U/mL、 6h: 12.88 U/mL; 45。C处理 lh:5. 64 U/mL、 2h: 2.24 U/mL、 3h: 0 U/mL; 50。C处理lh: 1. 29 U/mL、 2h:0U/mL
以步骤一测定的粗酶液的酶活力作为100%，将不同温度和时间处理后酶液的酶 活力折算为相对酶活力。以温度为横坐标，相对酶活力为纵坐标作图，见图7。
结果表明，青霉1-95生产的淀粉酶在4(TC保温lh后活性开始稍有丧失，在 5(TC保温lh后活性几乎全部丧失，说明该淀粉酶对温度比较敏感。
五、 青霉1-95生产的淀粉酶的淀粉水解产物分析 将粗酶液稀释至5倍体积，作为待测酶液。
1、 将可溶性淀粉溶于pH4.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，得到淀粉溶液，淀 粉的终浓度均为2% (每100毫升溶液中含有2克可溶液淀粉)。
2、 在350PL淀粉溶液中加入50叱待测酶液3(TC反应。
3、 在反应的不同时间取上清液，使得所有反应时间作用产生的产物能够反映 淀粉酶对可溶性淀粉的作用过程；将煮沸5min灭活的上清液作对照。
取10叱上清液样品上样，室温下上行展开5h (展开液配方为正丁醇乙酸 水=4: 2: 1),展层结束后取出薄板吹干，密闭器皿中碘熏显色。结果见图8。图 8中各泳道分别为M:葡萄糖和麦芽糖标样；泳道l:青霉1-95粗酶液；泳道2:
粗酶液与淀粉溶液在3(TC下保温5分钟；泳道3:粗酶液与淀粉溶液在3(TC下保温
15分钟；泳道4:粗酶液与淀粉溶液在3(TC下保温30分钟；泳道5:粗酶液与淀
粉溶液在3(TC下保温60分钟；泳道6:粗酶液与淀粉溶液在3(TC下保温12()分钟； 泳道7:粗酶液与淀粉溶液在3(TC下保温240分钟。
结果表明，青霉1-95生产的淀粉酶作用于可溶性淀粉并没有首先释放出葡萄 糖，而是释放出寡糖，随着作用时间的延长渐渐释放出葡萄糖，最后产物只有葡萄 糖。推测青霉(尸ew'w7h'鹏)l-95生产的淀粉酶里含有a-淀粉酶，但不确定是否 含有其它的淀粉酶。
实施例3、利用青霉(尸e/^cWh'鹏印.)1-95 CGMCC No. 2645发酵产酒精
在A、 B和C三个5L三角瓶中装4000mL高温蒸煮液化之后的木薯醪液(广西平 果凯特生物化工有限公司，总糖含量为17. 17%，液化率(还原糖占总糖的质量分数) 为35%)，降温到3(TC后用盐酸调节pH为4. 0，各添加50mL已活化的耐高温酿酒高 活性干酵母(湖北省宜昌市安琪酵母股份有限公司，产品目录号80000022)。按 照同步糖化发酵时间为64h计算需要添加酶量的理论值，确定添加量。青霉1-95 于28°C、 180rpm振荡培养九天后取发酵液13000rpm离心5min，上清液即为粗酶液。 A、 B、 C三瓶木薯醪液进行如下处理
A瓶(阴性对照)用蒸馏水定容至4500mL;
B瓶(理论值30倍的酶量)
加入粗酶液后，用蒸馏水定容至4500mL，使得B瓶中酶活力为8490 U/mL(30 。C、 pH4. 0);
C瓶(理论值100倍的酶量)加入粗酶液后，用蒸馏水定容至4500mL，使得 C瓶中酶活力为28300 U/mL(30。C、 pH4. 0);
在第16、 32、 48和64小时取发酵液测定酒份，并且在64h时测定发酵液中的 残余总糖量。酒份和残余总糖量的测定依照文献(胡嗣明，张天航.酒精生产分析 检验[M].轻工业出版社，1983.)所述方法进行。设置3次重复试验，结果取平均 值。
结果见图9，图9A为发酵液中的酒份随时间变化的曲线；9B为发酵完成后， 发酵液中的残余总糖量。结果表明添加了淀粉酶的试验组，酒份随着发酵时间的 推移而增加，发酵完成时，A处理未测得到酒份；B处理产生酒份只有2.9; C处理 产生酒份为8. 8。 A处理的残余总糖量为16. 8%，这与木薯液化醪的总糖17. 17%相
差不大，说明由于未添加淀粉酶，木薯液化醪中的糊精未被降解成葡萄糖，酵母不 能利用来产生酒精，所以残余总糖量几乎与发酵开始时相等。B处理的残余总糖含
量为5.3%，说明由于淀粉酶添加不够，木薯液化醪中还有大部分原料未被降解。C 处理残余糖含量是0. 5%，这与工业上的残余总糖量大致相等，说明淀粉原料被利用 得比较彻底。这些数据说明青霉1-95生产的淀粉酶可以在木薯淀粉液化醪的同步 糖化发酵工艺中发挥作用，并具有一定的应用前景。
权利要求
1.青霉(Penicillium sp.)1-95CGMCC No.2645。
2、 一种制备淀粉酶的方法，是发酵青霉(尸朋iciJ7i咖印.)1-95 CGMCC No. 2645， 得到淀粉酶。
3、 如权利要求2所述的方法，其特征在于所述发酵青霉1-95所用的培养基如 下每升培养基中含有8-12g可溶性淀粉、2-3g (NH4)2S04、 2-4g KH2P04、 4-6g胰蛋 白胨、0. l-O. 3gMgS(V 7H20、 0. 10-0. 15g CaCl2、 0. 020-0. 030g FeS04' 7H20; pH5-6。
4、 如权利要求3所述的方法，其特征在于所述发酵青霉l-95所用的培养基如 下每升培养基中含有10g可溶性淀粉、2.5g (NH4)2S04、 3g KH2P04、 5g胰蛋白胨、 0.2g MgS(V 7H20、 0. 13g CaCl2、 0. 0255g FeS04* 7H20; pH5. 5。
5、 权利要求2至4中任一所述方法制备得到的淀粉酶。
6、 权利要求5所述淀粉酶在生产酒精中的应用。
7、 青霉(尸ew'ci77^/i7印，)1-95 CGMCC No. 2645在生产酒精中的应用。
全文摘要
本发明公开了一株青霉菌株及其应用。本发明提供了青霉(Penicillium sp.)1-95 CGMCC No.2645，同时提供了发酵青霉(Penicillium)1-95 CGMCC No.2645得到的淀粉酶。本发明提供的淀粉酶的最适pH值为5.0，最适温度为45℃。与现有的淀粉酶比较，本发明的淀粉酶的最适作用条件更接近酵母菌的发酵条件。所以将本发明所提供的青霉1-95或本发明提供的淀粉酶应用于同步糖化发酵产酒精工艺中，有望解决糖化酶效率低下造成的淀粉“同步糖化发酵”生产酒精高成本的问题。
文档编号C12P7/06GK101372673SQ20081022392
公开日2009年2月25日 申请日期2008年10月9日 优先权日2008年10月9日
发明者冯家勋, 亮 冼, 刘君梁, 唐纪良 申请人:广西大学