专利名称：一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法
技术领域：
一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法。本发明为一种通过外源添加谷胱 甘肽从而提高乳酸乳球菌酸胁迫抗性的方法，主要包括外源谷胱甘肽的添加和 乳酸乳球菌的培养，属于生物工程技术领域。
背景技术：
乳酸乳球菌是一类使用广泛的益生菌，在食品发酵行业被广泛应用。由于 乳酸乳球菌自身产乳酸，在实际发酵过程中，其产生的酸胁迫环境对菌体生长 产生抑制作用。同时，在酸奶制品的货架保存期，以及作为益生菌被食用后所
经历的胃液消化过程，都将使乳酸乳球菌要经历远低于最适生长pH的酸环境， 从而影响其生命力。
研究发现，乳酸乳球菌胞内谷胱甘肽含量的增加能显著提高其对于酸胁迫 的耐受能力，但部分乳酸乳球菌本身不具备合成谷胱甘肽的能力，或合成谷胱 甘肽的能力较弱。通过在培养液中外源添加一定量的谷胱甘肽，提高乳酸乳球 菌胞内谷胱甘肽浓度，从而提高乳酸乳球菌对于酸胁迫条件的适应能力。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法，从而提高乳 酸乳球菌对于酸胁迫条件的适应能力。
本发明的技术方案的详细描述 一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法， 通过乳酸乳球菌的前处理过程和乳酸乳球菌的培养过程，在乳酸乳球菌的培养
过程之前在培养液中添加3.2 mmol/L的谷胱甘肽，从而显著提高乳酸乳球菌菌 体在发酵过程、传统保藏条件以及体内酸环境的存活率。 所述的提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法
(1) 乳酸乳球菌的前处理过程
a) 挑乳酸乳球菌单菌落接种到LM17培养液中，30°C静置培养过夜；
b) 将步骤a)所得培养液按1% v/v接种至20 mL的LM17培养液中，在培养 零时刻添加谷胱甘肽至终浓度3.2 mmol/L;
(2) 乳酸乳球菌的培养过程-
c) 将步骤b)所得培养液置于30°C静置培养19 h至稳定中后期，10000 rpm 离心5min收集菌体。
相关培养基-LM17培养基5g/L胰蛋白胨，5g/L大豆胨，5g/L牛肉膏，2.5 g/L酵母 膏，0.5g/L抗坏血酸，0.25 g/LMgS(V7H20, lg/L蔗糖，15g/L乳糖，19 g/L 磷酸甘油二钠，pH调节至6.9。
本发明的有益效果 一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法，主要包括外 源谷胱甘肽的添加和乳酸乳球菌的培养。通过整套方法，可以在2-4天内快速的 得到具有酸胁迫耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳酸乳 球菌在酸胁迫条件下的生存力，减少了乳酸乳球菌在传统保藏条件下的死亡率。 此外，由于谷胱甘肽对人畜安全无害并具有保健作用，这一思路可以用于奶制 品工业发酵剂的制作过程。
具体实施例方式
实施例1
按照上文所述方法，在添加3.2 mmol/L谷胱甘肽的LM17培养液中，按1% (v/v)接种量接入活化的乳酸乳球菌乳脂亚种SK1生物加工过程，第2巻第2 期，2004.5，30。C静置培养至稳定中后期(19h)， 10000 rpm离心5 min收集菌 体。在pH4.0下胁迫10h后考察细胞存活率。与未添加谷胱甘肽的对照组相比， 细胞在pH4.0下的存活率由0.71%提高至11.13%，存活率提高15.7倍。
实施例2
按照上文所述方法，在添加3.2 mmol/L谷胱甘肽的LM17培养液中，按1% (v/v)接种量接入活化的乳酸乳球菌乳脂亚种SKll， 30°C静置培养至稳定中后期 (19 h)， 10000rpm离心5min收集菌体。在pH2.5下胁迫30 min后考察细胞存 活率。与未添加谷胱甘肽的对照组相比，细胞在pH2.5下的存活率提高至对照 组的17.5倍。
权利要求
1、一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法，其特征是通过乳酸乳球菌的前处理过程和乳酸乳球菌的培养过程，在乳酸乳球菌的培养过程之前在培养液中添加3.2mmol/L的谷胱甘肽，从而显著提高乳酸乳球菌菌体在发酵过程、传统保藏条件以及体内酸环境的存活率。
2、 根据权利要求1所述的提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法，其特征是(1) 乳酸乳球菌的前处理过程a) 挑乳酸乳球菌单菌落接种到LM17培养液中，30。C静置培养过夜；b) 将步骤a)所得培养液按1% Wv接种至20 mL的LM17培养液中，在培养 零时刻添加谷胱甘肽至终浓度3.2 mmol/L;(2) 乳酸乳球菌的培养过程c) 将步骤b)所得培养液置于30°C静置培养19 h至稳定中后期，10000 rpm 离心5min收集菌体。
全文摘要
一种提高乳酸乳球菌抵御酸胁迫的方法，属于生物工程技术领域。本发明为一种通过外源添加谷胱甘肽从而提高乳酸乳球菌酸胁迫抗性的方法。主要包括外源谷胱甘肽的添加和乳酸乳球菌的培养。通过整套方法，可以在2-4天内快速的得到具有酸耐受能力的目的菌。谷胱甘肽的外源添加，有效提高了乳酸乳球菌在酸胁迫条件下的存活率，减少了乳酸乳球菌在发酵过程、传统保藏条件以及体内酸环境下的死亡率。此外，由于谷胱甘肽对人畜安全无害并具有保健作用，这一思路可以用于奶制品工业发酵剂的制作过程。
文档编号C12N1/36GK101451117SQ20081024270
公开日2009年6月10日 申请日期2008年12月15日 优先权日2008年12月15日
发明者堵国成, 廖鲜艳, 娟 张, 峰 薛, 坚 陈 申请人:江南大学