专利名称：香菇多肽的制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及食品技术领域，尤其是香菇多肽的制备方法和用途。
背景技术：
香菇是世界第二大食用菌，在我国民间素有“山珍”之称。据分析，干香菇食用部分占72%，每IOOg食用部分中含蛋白13g、脂肪1. Sg、碳水化合物Mg、粗纤维7. Sg、灰分 4. 9g、钙 124mg、磷 415mg、铁 25. 3mg、维生素 BIO. 07mg、维生素 B21. i:3mg、尼克酸 18. 9mg。香菇含有香菇多糖、香菇多肽等活性成分，具有很高的药用价值，国内外许多专家学者很注重对香菇多糖研究，为了追求高纯度的香菇多糖，香菇多肽在制备香菇多糖的过程中往往被丢弃浪费。香菇多肽(Lentinan简称LNT)系从真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的的蛋白多糖。肽链由天冬氨酸、组氨酸等18种氨基酸组成，多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、木糖等，平均分子量约为50万道尔顿。香菇多肽是香菇中的主要生物活性物质，是理想的免疫促进剂，具有提高人体免疫力、抑制肿瘤、降低转氨酶、护肝以及降低胆固醇等作用。 目前对于香菇多肽的报道比较少，CN101709320A中报道利用纤维素酶及蛋白酶对香菇多肽进行提取，此方法比较简单，所得的香菇多肽无论从纯度还是分子量都无法控制。
发明内容
本发明针对不足，提出一种香菇多肽的制备方法，得到纯度高、分子量小的香菇多肽。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案一种香菇多肽的制备方法，包括以下步骤①、将干香菇子实体粉碎，加入8 16倍重量的水，搅拌均勻，加热至80°C 100°C，维持30min 120min，降温至室温；②、步骤①水溶液进行超声波处理，调pH值至8. 0 9. 0,按每kg干香菇加入 1. 0 6. 0万国际单位比活力的胰酶或蛋白酶，于40°C 50°C水解120 MOmin ；③、调节步骤②水解液pH值至4. 0 6. 0，按每kg干香菇加入1. 0 6. 0万国际单位比活力的木瓜酶或蛋白酶，40°C 50°C水解300 500min ；酶灭活，降至室温；④、调步骤③灭活后的水解液PH值至6. 0 7. 5，加热至90°C 100°C，保持 60min MOmin，降至室温，离心过滤，收集滤液；⑤、向步骤④滤液中按碳重量与滤液体积比为0. 5% 2. 0%加入活性碳脱色，过滤，滤液为淡黄色澄清液体；滤液经5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集超滤液；干燥，得到香菇多肽。优选的，步骤②超声波处理的条件为IOOOW 4000W、30min 120min。优选的，步骤③酶灭活条件为100°C，5 15min。优选的，步骤⑤脱色条件为80 100°C，搅拌20min 60min ；脱色和过滤为重复多次操作。优选的，步骤⑤超滤液过葡聚糖凝胶柱、离子交换树脂或大孔吸附树脂除杂后再干燥。优选的，所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。与现有技术相比，本发明通过超声波、酶解、超滤及过柱纯化等方法提纯香菇多肽，产品纯度高达60%以上，香菇多肽分子量控制在5000道尔顿以下，产品功能效果明显， 具有调节血脂及抗疲劳作用。本发明通过对香菇进行双酶水解，将大分子蛋白质水解成小分子多肽，然后用分子截留为5000道尔顿的超滤膜进行超滤，滤过液再过柱纯化，可得纯度高、分子量小的香菇多肽。这种方法具有如下优点1、不加入试剂发酵，香菇直接经双酶酶解等生产工艺提取香菇多肽等活性物质， 具安全无污染、少投入生产设备、减少生产环节等优点。2、香菇直接经双酶酶解、超滤、纯化等生产工艺提取香菇多肽，最大限度地将香菇蛋白质水解成各种小分子多肽。所得的香菇多肽分子量小、纯度高，产品功能更明显。3、此制备工艺简单易行，反应条件温和，收率高，稳定性好，而且周期短，对制备设备及场所要求也很低，适合于大规模工业化生产。本发明还提供了上述制备方法得到的香菇多肽，分子量小于5000道尔顿；以及该香菇多肽在制备抗疲劳的药物、食品或保健品中的应用。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。实施例1取干香菇子实体2000. 0kg，粉碎，加入32. OL的水，搅拌均勻，加热至100°C，加热时间为120min，降温至室温。超声波处理，处理条件为4000W、120min。用IOmo 1/L的NaOH 溶液调节PH值至9. 0，加入12. 0万国际单位(比活力)的胰酶，搅勻后，维持pH至9. 0， 500C的条件水解，水解MOmin。用6. Omo 1/L的HCl溶液调pH至6. 0，加入12. O万国际单位(比活力)的木瓜酶，搅勻后，维持pH至6. 0，500C的条件水解，水解500min。酶解结束后加热升温至100°C，保温15分钟进行酶灭活，降温至室温。用10mol/L的NaOH溶液调pH至7. 5，加热至100°C，保持MOmin，降至室温，离心过滤，收集滤液26. 0L。在滤液加入活性碳520. Og，在温度为100°C条件下搅拌脱色60min， 过滤，重复以上操作，离心过滤，得淡黄色澄清液体25. 4L。澄清液体用5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集滤过液22. 0L。将葡聚糖凝胶颗粒加入10倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝胶颗粒充分溶涨 3小时，装入凝胶柱中，用水平衡；滤过液过葡聚糖凝胶柱(或离子交换树脂、大孔吸附树脂等)，用水洗脱，收集洗脱液12. 0L。冷冻干燥或喷雾干燥，得香菇多肽粉68. 32g。检验结果多肽91.36% (参照标准:GB18186-2000)；
平均分子量小于3000道尔顿(参照标准JY/T024-1996)实施例2取干香菇子实体2000. Okg,粉碎，加入16. OL的水，搅拌均勻，加热至80°C，加热时间为30min，降温至室温。超声波处理，处理条件为1000W、30min。用lOmol/L的KOH溶液调节PH值至8.0，加入2.0万国际单位(比活力)的胰酶，搅勻后，维持pH至8.0，40°C的条件水解，水解120min。用6. Omol/L的H2SO4溶液调pH至4. 0，加入2. 0万国际单位(比活力)的木瓜酶，搅勻后，维持PH至4.0，40°C的条件水解，水解300min。酶解结束后加热升温至100°C，保温15分钟进行酶灭活，降温至室温。用10mol/L的KOH溶液调pH至6. 0，加热至90°C，保持60min，降至室温，离心过滤，收集滤液12. 0L。在滤液加入活性碳60. Og,在温度为80°C条件下搅拌脱色20min，过滤，重复以上操作，离心过滤，得淡黄色澄清液体11. 0L。澄清液体用5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集滤过液10. 0L。将葡聚糖凝胶颗粒加入10倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝胶颗粒充分溶涨 3小时，装入凝胶柱中，用水平衡；滤过液过葡聚糖凝胶柱(或离子交换树脂、大孔吸附树脂等)，用水洗脱，收集洗脱液8. 0L。冷冻干燥或喷雾干燥，得香菇多肽粉61. 08go检验结果多肽90.82% (参照标准:GB18186-2000)；平均分子量小于3000道尔顿(参照标准JY/T024-1996)实施例3取干香菇子实体2000. Okg,粉碎，加入24. OL的水，搅拌均勻，加热至85°C，加热时间为80min，降温至室温。超声波处理，处理条件为1000W、30min。用lOmol/L的KOH溶液调节PH值至8.5，加入4.0万国际单位(比活力)的蛋白酶，搅勻后，维持pH至8.5，45°C的条件水解，水解170min。用4. Omol/L的H2SO4溶液调pH至5. 0，加入5. 0万国际单位(比活力)的蛋白酶，搅勻后，维持PH至5.0，45°C的条件水解，水解350min。酶解结束后加热升温至95 °C，保温20分钟进行酶灭活，降温至室温。用8mol/L的KOH溶液调pH至6. 8，加热至92°C，保持160min，降至室温，离心过滤，收集滤液14. 0L。在滤液加入活性碳70. Og,在温度为80°C条件下搅拌脱色20min，过滤，重复以上操作，离心过滤，得淡黄色澄清液体12. 0L。澄清液体用5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集滤过液11. 2L。将葡聚糖凝胶颗粒加入11倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝胶颗粒充分溶涨 3小时，装入凝胶柱中，用水平衡；滤过液过葡聚糖凝胶柱(或离子交换树脂、大孔吸附树脂等)，用水洗脱，收集洗脱液8. 0L。冷冻干燥或喷雾干燥，得香菇多肽粉61. ISgo检验结果多肽91.32% (参照标准:GB18186-2000)；平均分子量小于3500道尔顿(参照标准JY/T024-1996)试验实施例香菇多肽抗疲劳作用1.试验动物昆明雄性小鼠，2. 5 3. 0月龄，体重(20士2)g。
2.供试样品上述实施例1、2和3的样品。3.试验方法将40只小鼠随机分为4组，每组10只，每天灌胃给药1次，以蒸馏水为空白组，实施例1、2和3的样品分别以40，80，160mg/kg的剂量，连续灌胃给药30d。然后测定小鼠的负重游泳试验时间、血乳酸值、肝糖原及血清尿素氮，实验结果如下表1和表2 :表1香菇多肽对小鼠负重游泳时间的影响
权利要求
1.一种香菇多肽的制备方法，包括以下步骤①、将干香菇子实体粉碎，加入8 16倍重量的水，搅拌均勻，加热至80°C 100°C，维持30min 120min，降温至室温；②、步骤①水溶液进行超声波处理，调pH值至8.0 9. 0，按每kg干香菇加入1. 0 6. 0万国际单位比活力的胰酶或蛋白酶，于40°C 50°C水解120 MOmin ；③、调节步骤②水解液PH值至4.0 6. 0，按每kg干香菇加入1. 0 6. 0万国际单位比活力的木瓜酶或蛋白酶，40°C 50°C水解300 500min ；酶灭活，降至室温；④、调步骤③灭活后的水解液PH值至6.0 7. 5，加热至90°C 100°C，保持60min 240min,降至室温，离心过滤，收集滤液；⑤、向步骤④滤液中按碳重量与滤液体积比为0.5% 2. 0%加入活性碳脱色，过滤， 滤液为淡黄色澄清液体；滤液经5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集超滤液；干燥，得到香菇多肽。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤②超声波处理的条件为1000W 4000W、30min 120min。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤③酶灭活条件为100°C，5 15min。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤⑤脱色条件为80 100°C，搅拌 20min 60min ；脱色和过滤为重复多次操作。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤⑤超滤液过葡聚糖凝胶柱、离子交换树脂或大孔吸附树脂除杂后再干燥。
6.如权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
7.—种如权利要求1所述制备方法制得的香菇多肽，其特征在于该香菇多肽的分子量小于5000道尔顿。
8.如权利要求7所述香菇多肽在制备抗疲劳的药物、食品或保健品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种香菇多肽的制备方法，包括以下步骤①将干香菇子实体粉碎，加入8～16倍重量的水，加热至80℃～100℃，维持30min～120min，降至室温；②超声波处理，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的胰酶或蛋白酶，水解120～240min；③调水解液pH值至4.0～6.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的木瓜酶或蛋白酶，水解300～500min；酶灭活，降至室温；④水解液pH值至6.0～7.5，加热至90℃～100℃，保持60min～240min，降至室温，离心过滤，收集滤液；⑤按碳重量与滤液体积比为0.5％～2.0％加入活性碳脱色，过滤，滤液为淡黄色澄清液体；经5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集超滤液；干燥，得到香菇多肽。本发明制得的香菇多肽粉纯度为50％以上，具有抗疲劳作用。
文档编号A23J3/14GK102224879SQ20111015520
公开日2011年10月26日 申请日期2011年6月9日 优先权日2011年6月9日
发明者申健 申请人:申健