专利名称：白藜芦醇二聚体用于制备降血糖药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物领域，具体涉及一种白藜芦醇二聚体的医药用途。
背景技术：
糖尿病(diabetes mellitus)是一种以慢性血葡萄糖(简称血糖)水平增高为特征的代谢病 群。主要特点是血糖过高、糖尿、多尿、多饮、多食、消痩、疲乏。糖尿病是最常见的慢性 病之一。随着人们生活水平的提高，人口老龄化以及肥胖发生率的增加，糖尿病的发病率呈 逐年上升趋势。目前，全国有糖尿病患者2000多万人，糖耐量低减者近2000万人，糖尿病 患者总数位居全球第二。如果不加以控制，到2025年我国糖尿病患者可能达到6000万人。
糖尿病分为I型糖尿病和II型糖尿病。II型糖尿病也叫成人发病型糖尿病，多在35~40 岁之后发病，占糖尿病患者90%以上。II型糖尿病病人体内产生胰岛素的能力并非完全丧失， 有的患者体内胰岛素甚至产生过多，但胰岛素的作用效果却大打折扣，因此患者体内的胰岛 素是一种相对缺乏。可以通过某些口服药物刺激体内胰岛素的分泌。目前，常用的II型糖尿
病治疗药物有磺酰脲类药物；双胍类药物；a-糖苷酶抑制剂；噻唑烷二酮类药物；非磺酰 脲类的胰岛素促进分泌剂；其它药物等。其中a-糖苷酶抑制剂主要是阿卡波糖和伏格列波糖。 阿卡波糖其降糖作用的机制是抑制小肠壁细胞和寡糖竞争，而与a-葡萄糖苷酶可逆性地结合， 抑制酶的活性，从而延缓碳水化合物的降解，造成肠道葡萄糖的吸收缓慢，降低餐后血糖的 升高。但是作为a-糖苷酶抑制剂，阿卡波糖的对a-葡萄糖苷酶抑制活性并不算高，因此糖尿 病人需每天服用大量的阿卡波糖制剂，极为不便。
结构式I的化合物，英文名R"似-veniferin，为白藜戶醇二聚体，是利用苦瓜过氧化物 酶对白藜芦醇进行生物转化而得的产物，其结构式如下
<formula>formula see original document page 3</formula>^ra似-veniferin是1977年从葡萄中分离得到的天然产物，在近几年的研究中，从葡萄 科、莎草科等植物中均分得此化合物。(P. Longcake, and P丄Pryce. 33， 151 (1977); H.
Kurihara, J. Kawabata, S. Ichikawa, and J. Mizutani. jgn'c.历o/. CT ew, 54， 1097-1099 (1990))目前，对lt匕l七 合物活性的报道仅限于较强的抗氧化作用，其余活性未见报道。此外，也有学者利用生物转 化的方法得到此化合物，产率一般为20%左右。
发明内容
本发明公开了结构式I的rrara-veniferin的一种医药用途，即其用于制备降血糖药物的用 途。试验证明，白藜芦醇二聚体具有优异的降血糖功能，可用于制备降血糖药物、降血糖保 健品食品和降血糖食品等。
体外活性测试发现，fr"朋-veniferin对a-糖苷酶抑制能力为阿卡波糖的254倍。 所述药物或保健食品可以制备成粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。 所述食品是在淀粉制品、乳或乳制品、豆制品、烘焙制品中添加白藜芦醇二聚体后制成。 "a朋-veniferin可在市场购得，或参考文献制备， 一般的制备方法是利用苦瓜过氧化物酶 对白藜芦醇进行生物转化，转化产物经硅胶柱色谱(200-300目)，用氯仿甲醇(10: 1)冲 洗，再经过制备HPLC分离，得到frara-veniferin，得率为37%。经HPLC-DAD检测，纯度为 98%。<formula>formula see original document page 4</formula>
具体实施例方式
实施例1
a-葡萄糖苷酶活性测定
根据Pierre等(C. Pierre, R. Roland, D, Tremblay. /C7/w O em， 24, 208-211 (19780)的方法，以对硝苯基p-D-吡喃半乳糖苷(PNPG)为底物，测定a-葡萄糖苷酶活性。反应系统为1(^1 lU/mla-D-葡萄糖苷酶(用KH2PCVK2HP04缓冲溶液配审i」，pH=6.8)加入100pl缓冲液37°〇温育10min， 再加入卯pl0.01mol/LPNPG37。C温育10min， 410nm酶标仪测定吸收。其中酶活力单位定 义在37°0， PH6.8条件下，lmin内水解PNPG释放lnmol对硝基酚(PNP)所需的酶量。 抑制a-葡萄糖苷酶活性测定不同浓度的试样加入10^illU/mlcc-D-葡萄糖苷酶(用 KH2P04-K2HP04缓冲溶液配制，pH=6.8)，加入50 pl缓冲液37。C温育10分钟，再加入90 pl 0.01mol/LPNPG于37'C温育10 min， 410 nm酶标仪测定吸收。抑制剂活力单位定义为在相 同条件下降低1个酶活力单位所需的抑制剂量。
阳性对照阿卡波糖(acarbose)加入IO pl 1U/ml a-D-葡萄糖苷酶(用KH2P04-K2HP04 缓冲溶液配制，pH=6.8)，加入50pl缓冲液37。C温育10min，再加入90 pl 0.01 mol/L PNPG 于37"C温育10min， 410nm酶标仪测定吸收。
空白对照样品溶剂体积加入50 缓冲液37。C温育10分钟，再加入90 ^ 0.01 mol/L PNPG 于37。C温育10min， 410 nm酶标仪测定吸收。缓冲液0.067 mol/L KH2P04-Na2HP04， PH6.8。
抑制率的计算
抑制率={[ (A-B) — (C-D) ] / (A-B)} X 100
A:410nm时测得的吸光度(无测试物)；B: 410nm时测得的吸光度(既无测试物也无酶)；
C410nm时测得的吸光度(同时有测试物和酶)；D: 410nm时测得的吸光度(有测试物)
样品名样品浓度 (ug/ml)酶的吸 光度(底 物+酶)酶液空 白(底 物)样品吸 光度(样 品+酶+ 底物)样品空 白(样品 +底物)抑制率ic50
0.01147606801015063032. 40%
加ra-veniferin0. 1014760680552065065. 40%1.59
1. 0014760680107072097. 50%
0. 01147606801125045023. 30%
阿卡波糖0. 1014760680605046046.50%398.08
1.00147606805720■62. 80%
试验结果见上表:
将/rara-veniferin进行ct-葡萄糖苷酶抑制活性筛选，同时使用阿卡波糖(acarbose)作为 阳性对照。采用恒定浓度lmg/ul (样品平行测三次，取平均值)，依照上述方法进行测试， frara-veniferin抑制率为97.50%。
IC5o测试结果
对初筛后显示有a-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物进一步测试，采用每个化合物发挥抑制
作用的浓度范围内的五个不同浓度，进行ot-葡萄糖苷酶抑制活性测试，计算IC5()值，fmra-veniferin的IC5o值为1.57pM，而阿卡波糖的IC5o值为398.08pM。
测试结果证明，/m似-veniferin与临床上常用的a-葡萄糖苷酶抑制剂相比，活性强200倍 以上。
权利要求
1、结构式I化合物用于制备降血糖药物的用途。
2、 权利要求l的结构式I化合物用于制备降血糖保健食品的用途。
3、 权利要求1的结构式I化合物用于制备降血糖食品的用途。
全文摘要
本发明涉及医药领域，具体公开了一种白藜芦醇二聚体的医药用途，药理研究证明其具有明显抑制α-葡萄糖苷酶作用，可用作降血糖药物、降血糖保健食品或降血糖食品。
文档编号A23L1/30GK101433534SQ20081024399
公开日2009年5月20日 申请日期2008年12月22日 优先权日2008年12月22日
发明者翔 万, 孔令义, 王小兵, 丽 马 申请人:中国药科大学