专利名称：家族性乳腺癌遗传风险检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种家族性乳腺癌遗 传风险检测试剂盒。
背景技术：
乳腺癌是乳腺导管上皮细胞在各种内外致癌因素的作用下，细胞失去正常特性而 异常增生，以致超过自我修复的限度而发生癌变的疾病，临床以乳腺肿块为主要表现。乳腺 癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，有发病率高、具侵袭性、但病程进展缓慢、自然生存期长 等特点。乳腺癌是主要危害妇女身体健康的疾病，男性也可患乳腺癌，但男性患乳腺癌的 机会比女性要少100倍。乳腺癌的好发部位以乳房外上占多数。早期乳腺癌可无任何自觉 症状，病变晚期可出现乳腺肿块，质地硬韧，边界不甚清晰，无包膜感，推之移动性小，多数 无明显疼痛，乳头出现回缩、偏位，乳头溢流黄水或血水，癌性湿疹样改变。乳腺癌不但有损妇女体态，而且严重影响生活质量，甚至导致死亡。近年来随着乳 腺癌发病率的增高，乳房保护运动(粉红丝带运动)在各地兴起，人们对乳腺癌的关注越来 越多，迫切需要更加灵敏、有效的乳腺癌风险检测和治疗指导手段。乳腺癌分为家族性乳腺癌和散发性乳腺癌，家族性乳腺癌具有很强的遗传性，可 通过遗传基因进行传布。主要的遗传基因有CYPlAl基因和CYPlBl基因。
发明内容
本发明提供一种家族性乳腺癌遗传风险检测试剂盒。该试剂盒包括检测CYPlAl基因上rs4646903位点、CYPlBl基因上Leu432Val位 点多态性的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲 液、去离子水。本试剂盒中所述的特异性荧光探针对对于本领域普通技术人员来说是能够轻易 完成设计的，特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例步骤1:DNA模板的抽取用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。步骤2 荧光定量PCR反应使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总 体积10 μ 1，包含浓度为20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX荧光定量PCR反应缓冲液、0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6μ 125mMMgCl2 溶液、0. 025 μ l(5units/y l)Taq DNA聚合酶、 20 μ M的有义引物和反义引物各0. 225 μ 1、10 μ M的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针各 0. 25 μ 1，去离子水 5. 325 μ 1。在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50°C、2分钟，95°C、10分钟，进行60个循环 的95°C、30秒，60°C、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。步骤4:基因型分析根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示 的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因 型。
权利要求
1. 一种家族性乳腺癌遗传风险检测试剂盒，，包括特异性引物对及特异性荧光探针对， Taq酶，dNTP混合液，MgC12溶液，荧光定量PCR反应缓冲液和去离子水，其特征在于所述 的特异性引物对及特异性荧光探针对是针对检测CYPlAl基因上rs4646903位点、CYPlBl基 因上Leu432Val位点多态性设计的。
全文摘要
本发明公开了一种家族性乳腺癌遗传风险检测试剂盒，包括检测CYP1A1基因上rs4646903位点、CYP1B1基因上Leu432Val位点多态性的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。
文档编号C12Q1/68GK102108380SQ20091020048
公开日2011年6月29日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者冯哲民, 贺宪民, 邹祖烨 申请人:上海主健生物工程有限公司