专利名称：一种制备蜜环菌硒多糖的培养基及生产方法
技术领域：
本发明属于微生物发酵生产领域，具体涉及一种固态发酵合成蜜环菌硒多糖的培养基以 及生产方法。
背景技术：
蜜环菌(Armillaria鹏llea)是天麻的共生菌，其菌丝中含有胞内多糖、萜类化合物 、酯类化合物、氨基酸等多种营养物质，具有定惊、熄风、健脑、增强人体免疫力、抗肿瘤 等多种药理活性。蜜环菌多糖具有抗肿瘤活性，治疗机体免疫系统受伤的癌症，能使正常小 鼠的糖耐量增强，凋节小鼠免疫细胞及免疫分子来增强小鼠的免疫功能。硒是生命必需的微 量元素，是谷胱甘肽过氧化物酶的主要活性成分，硒能构成若干氧化酶的活性中心，可增强 机体的执氧化能力和对相关疾病的抵执能力，某些癌症、肿瘤、心血管疾病、大骨节病和艾 滋病等都与体内缺W有关。这说明了ffl与人体健康的直接关系。硒的存在形式有无机硒和有 机硒两种，常见的无机硒有亚晒酸钠和硒酸钠，有机栖士要是晒蛋白和硒多糖。无机硒具有 蓄积性毒性和致突变作用，使用时剂量难以控制，而有机硒的毒性低，副作用小，不但能够 更好地发挥硒的作用，而目在激发免疫反应卜.比无机硒显著，冈此，利用食药用菌将无机硒 和多糖结合转化为硒多糖，将使食药用菌的生理和药理功能得到优化，并能提供可行的生产 硒多糖的方法。富硒蜜环菌的培养及其产品的研究与开发，可以满足人们预防心脑血管及肿 瘤疾病的需要，对于人们预防心脑血管及肿瘤疾病、维护健康具有重要作用，将产生重大的 经济效益和社会效益。唐巧玉等(唐巧玉,周毅峰,秦恩华，等.硒对蜜环菌的作用规律及其 在多糖中的IR累.食品与发酵工业，2007， 33 (10) ; 96-98;唐巧玉，秦息华.硒对蜜环菌 多糖和蛋白质质量分数的影响.湖北民族学院学报(自然科学版
)http://acad. cnki. net./ktis55/oldNavi,/B:ticlge. aspx' LinkType二BaseLink&DBCode二cjfd&TableN ame=cjfdbaseinfo&Fielcl=BaseID&,Value=HBXZ&NaviLink=%e6%bg%96%e5%8c%97%e6%b0%91%e6%97%
),2007， 25 (1) s 94-96;
唐巧玉，毅峰，杨林，等.蜜环菌对硒的耐受能力及硒对其多糖产率的影响.食用菌，2007， 3: 4-5)采用液体发酵研究了蜜环菌对硒的积累，结果表明，当无机硒浓度为20mg/L.以上时， 蜜环菌菌丝体生长将受到抑制，也就是说，液体发酵过程屮.当无机硒浓度超过20mg/L培养 基，菌丝体将受到毒害，并且硒多糖中硒含量至多为90 ug,/g，培养时间在15天以上。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的固态发酵合成蜜环菌硒多糖的培养基，其原料廉价易得 、配制简单、能提高蜜环菌硒多糖的产量和硒多糖中硒的富集量。
本发明的第二个目的是提供一种新的固态发酵合成蜜环菌硒多糖的生产方法，其产量高 、硒多糖中硒的富集量也高，质量稳定、原料廉价、生产效率高、方法简单易行。
本发明的目的是通过以下方案实现的。
制备蜜环菌硒多糖的培养基由以下成分组成5-15wt。/。麸皮、50-85wt。/。大米、4-18wt。/。红 薯、0. 4-2wt。/。大豆，55-65wt。/。水，无机硒30-45 y g/g培养基。无机硒为亚硒酸盐或硒酸 盐，优选亚硒酸钠。
所述蜜环菌硒多糖的生产工艺包括以下步骤
1) 制备液体种子
经蜜环菌菌种分离、斜面菌种培养、液体培养，获得液体种子；
2) 固体培养基的配制
将5-15wt。/。麸皮、50-85wt。/。大米、4-18wt。/。红薯、0. 4-2wt。/。大豆，分别用水浸润透，然后 混合，按照30-45 y g/g培养基添加无机硒(无机硒为亚硒酸盐或硒酸盐，优选亚硒酸钠)， 使混合物含水为55-65wt。/。，用高压灭菌锅12rC蒸40分钟，冷却；
3) 接种培养
将高压灭菌锅蒸熟的培养基冷却至35-4(TC ，按培养基重量的10-20%接种液体种子， 23-27。C恒温、培养10-20天，菌索呈灰白色为止。
营养基质在液体深层发酵中从液体基质到细胞内部相对容易，但菌体对营养基质的耐受 能力不强，而固态发酵的形式则提高了菌体对营养基质的耐受能力，本发明中蜜环菌能够耐 受的无机硒浓度为30-45y g/g培养基，大大提高了蜜环菌对无机硒的耐受能力和富集效果。 而且现代固态发酵容易控制，没有影响环境污染的废物产生，是解决能源危机、治理环境污 染的重要手段之一。
蜜环菌富硒的以往技术中，大多用液体发酵培养，培养基成分复杂，产硒多糖的量不大 ，硒多糖中硒的富集量不高，产量不稳定，操作复杂，而且培养基的成分成本较高。本发明 将麸皮、大米、红薯、大豆进行优化组合作为发酵培养基的主要原料，利用了取材容易、价 格较低的农副产品，原料来源广，营养丰富，少数几种成分即能够满足蜜环菌生长的要求， 可以降低成本，适应于大规模生产。本发明整个培养过程简单易行，成本低，硒多糖的产量稳定，制备的硒多糖-含量达到 S-lSmg/g培养物，硒多糖中li含量为lS0-加0yg/g。为固态发酵合成蜜环菌硒多糖提供了一
条新的途径，应用前景十分看好。
唐巧玉等(:唐巧玉,周毅峰,秦恩华j等./r西对蜜环菌的作用规律及其在多糖中的积累.食
品与发酵工业，2007， 33 (10) : 96-98;唐巧玉，秦恩华.硕对蜜环菌多糖和蚩白质质量分
数的影响.湖北民族学院学报(自然科学版
)http ://acad. cnki. net,/kns55/oldNavi,/Bridge. aspx' LinkType二BaseLink&DB['ode二cjfd&TableN aira =cjfc]baseinfo&Field=Bas3lD&Value=HBXZ&feviLink=%e6%b，6'%e5%8c%97%e6%bffi91%e6%97% 8f%e5%ad%a6%e9%99%a2%e5%ad%a6%e6%8a%a5(%e8%87%aa%e7%84%b6%e7%sJ%91%e5%ad%a6%e7%89%88 ),2007， 25 (1) : 94-96;唐巧玉，周毅峰，杨
林，等.蜜环菌对硒的耐受能力及硒对其多糖产率的影响.食用菌，2007，3: 4-5)采用液体发 酵研究了蜜环菌对硒的积累，结果表明，3无机ffi浓度为加mg/L以上时，蜜环菌菌丝体生长 将受到抑制，并日.硒多糖屮硒含量至多为90 tig/g，培养时间在15天以匕
具体实施例方式
以K实施例旨在进一歩说明本发明，而不是限制本发明。 实施例h蜜环菌硒多糖的生产
1) 种子液的制备(见专禾'.ZL200410047034, 2 "蜜环茼酒生产方法") 1. 1菌种分离
蜜环菌分离于湖南省怀化市天麻的菌索， 1.2斜面菌种培养
将分离纯化的菌株接种于斜面，25-26nc恒fi培养至菌索基本达到试管底部，菌索灰白色。
1. 3斜面培养基为2%白砂糖，，麸皮汁，(1 2 蛋白胨；0. 1%酵母粉，0. 075% MgSO 4. 7H20， 0.15% KH2P04，加水溶解定,至适量体积，pH自然，琼脂2%。
1.4液体种于的制作将斜面菌种接^在液体潘养基2%白砂糖，3%麸皮汁，0.2%蛋白胨 ，0. W,酵母粉，O. 075%MgS04.7H20, 0. 15% KH2P04,加水溶解定容至适量体积，pH自然。26°C 、2C0转/分恒温振荡培养15天，获得液体种子。
2) 固体培养基的配制
将5-15wtW麸皮、50-85wtft大米、4-18wtWt薯、0. 4-2wt劣大豆，分别用水浸润透，然后 混合，按照30-45wg/g培养基添加亚硒酸钠，使混合物含水为55-65机％，分装在广口玻璃瓶
中，每瓶装量为1-2 kg (按千重u'算)，封口，用高压灭菌锅12rc蒸40分钟，冷却。
3) 接种培养
将高压灭菌锅蒸熟的培养基冷却至35-4(TC ，按培养基重量的10-2OK接种液休种子， 23-27'C恒温、-咅养IO-20天，茼索呈灰白色为止，-般生长至容器底部。4)经常规方法检测硒多糖含量达到5-15mg/g培养物，硒多糖中硒含量为150-200 y g/g
权利要求
1.一种制备蜜环菌硒多糖的培养基，其特征在于，由以下成分组成5-15wt％麸皮、50-85wt％大米、4-18wt％红薯、0.4-2wt％大豆，55-65wt％水，无机硒30-45μg/g培养基。
2 根据权利要求l所述的培养基，其特征在于，所述的无机硒是亚硒 酸盐或硒酸盐。
3 根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述的无机硒是亚硒酸钠。
4 一种蜜环菌硒多糖的生产方法，其特征在于，包括以下步骤1) 制备液体种子经蜜环菌菌种分离、斜面菌种培养、液体培养，获得液体种子；2) 固体培养基的配制将5-15wt。/。麸皮、50-85wt。/。大米、4-18wt。/。红薯、0. 4-2wt。/。大豆，分别用水浸润透，然 后混合，按照30-45yg/g培养基添加无机硒，最后使混合物含水为55-65wt。/。，用高压灭菌锅 121。C蒸40分钟，冷却；3) 接种培养将高压灭菌的培养基冷却至35-4(TC，按固体培养基重量的10-20%接种液体种子， 23-27。C恒温、培养10-20天，菌索呈灰白色为止。
5 根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，所述的无机硒是亚 硒酸盐或硒酸盐。
6 根据权利要求4或5所述的培养基，其特征在于，所述的无机硒是亚硒酸钠。
全文摘要
本发明公开了一种制备蜜环菌硒多糖的培养基及生产方法，包括以下步骤1)制备液体种子；2)固体培养基的配制将5-15wt％麸皮、50-85wt％大米、4-18wt％红薯、0.4-2wt％大豆，分别用水浸润透，然后混合，按照30-45μg/g培养基添加无机硒，使混合物含水为55-65wt％，用高压灭菌锅121℃蒸40分钟，冷却；3)接种培养将高压灭菌锅蒸熟的培养基冷却至35-40℃，按培养基重量的10-20％接种液体种子，23-27℃恒温、培养10-20天，菌索呈灰白色为止。本发明方法生产蜜环菌硒多糖产量高、硒多糖中硒的富集量高、原料廉价、质量稳定、生产效率高、方法简单易行；制备的硒多糖含量达到5-15mg/g培养物，硒多糖中硒含量为150-200μg/g，为固态发酵合成蜜环菌硒多糖提供了一条新的途径。
文档编号C12P19/04GK101671709SQ20091030820
公开日2010年3月17日 申请日期2009年10月12日 优先权日2009年10月12日
发明者肖和艾, 胡汝晓, 谭周进 申请人:谭周进