专利名称：调味品中大肠菌群分离富集方法
技术领域：
本发明涉及菌群的分离富集方法，特别涉及一种调味品中大肠菌群分离富集方 法。
背景技术：
在食品行业，大肠菌群的含量是一项重要的卫生指标。对于蚝油、黄豆酱等粘稠状 调味品，由于蚝油、黄豆酱等调味品成分复杂，存在干扰菌体生理状态、影响检测结果的物 质，因此，在检测前需要先进行菌体分离富集，以去除干扰物质。目前，在对调味品的大肠菌群进行检测前，对大肠菌群的分离方法包括如下几种 一是在营养琼脂等培养材料上对菌体12小时培养，获得可见单菌落，然后分离菌体，该种 方法的缺点是时间长，有些不可培养菌体难于获得；二是采用免疫学方法分析菌体，该方法 受到食品物料性质等因素影响，对于食品中的痕量微生物难于分离，并且由于免疫学方法 本身的不足，不能分离所有菌体；其他方法如简单的膜过滤方法易于受到食品中小颗粒物 质的影响使分离比较困难；离心沉淀方法易于受到食品中胶体类物质的干扰，难于分离。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种调味品中大肠菌群分离富集方法，分离速度快、分离 效果好。为解决以上技术问题，本发明的技术方案是，一种调味品中大肠菌群分离富集方 法，包括如下步骤1)取调味品样品；2)将样品以无菌生理盐水稀释5 40倍，得到稀释溶液，加入助滤剂；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过28 32 μ m的一级滤膜；4)取滤后液过0. 2 0. 45 μ m的二级滤膜；5)用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上。在此技术方 案中，加入助滤剂，能够促进过滤、去除色素；通过一级过滤，去除大颗粒渣粒，通过二级过 滤，去除干扰物去除小分子干扰物质，达到菌体分离富集。其中，步骤3)中，一级滤膜的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、 聚四氟乙烯中的任一种。其中，步骤4)中，二级滤膜的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、 聚四氟乙烯中的任一种。其中，步骤5)中，洗涤次数为2 3次。其中，步骤2)中，所述助滤剂为吐温-60或吐温-80，所述助滤剂占稀释溶液的重 量百分比为千分之0. 5 千分之2。其中，步骤2)中，将样品利用无菌生理盐水稀释15 20倍。其中，步骤3)中，所述一级滤膜的孔径为30 μ m。
其中，步骤4)中，所述二级滤膜的孔径为0. 3 0. 4 μ m。其中，步骤5)中，所述无菌生理盐水的用量为20 50ml。其中，所述调味品为蚝油或豆酱。
与现有技术相比，本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法，采用分级过滤，逐级 去除干扰物，同时添加助滤剂，对菌体友好，能够快速分离菌体并且不会影响大肠菌群的活 性，保证蚝油、黄豆酱等调味品中大肠菌群的高效快速分离。
图1是本发明调味品中大肠菌群分离富集方法的流程图。
具体实施例方式本发明的基本构思是，将蚝油、黄豆酱等调味品稀释并经多级过滤，同时添加助滤 齐U，使得大肠菌群快速富集、分离。下面结合附图和实施例对本发明进一步描述。参见图1，图1是本发明调味品中大肠菌群分离富集方法的流程图。本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法包括如下步骤Si、取调味品样品；S2、将样品以无菌生理盐水稀释5 40倍，得到稀释溶液，加入助滤剂；S3、将稀释溶液以真空过滤法滤过28 32 μ m的一级滤膜；S4、取滤后液过0. 2 0. 45 μ m的二级滤膜；S5、用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上。下面，以6个具体实施例对本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法进行说明。实施例一1)取蚝油为样品；2)将蚝油样品加无菌生理盐水稀释5倍，得到稀释溶液，在稀释溶液中添加吐 温-60，添加浓度为稀释溶液的千分之1 ；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过30 μ m的一级滤膜，该一级滤膜为聚丙烯滤膜；4)取滤后液过0. 2 μ m的二级滤膜，该二级滤膜为聚氯乙烯滤膜；5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜两次，大肠菌体截留在二级滤膜上。以上分离过程所需时间20分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物较 少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。实施例二1)取黄豆酱为样品；2)将黄豆酱样品加无菌生理盐水稀释10倍，得到稀释溶液，在稀释溶液中添加吐 温-80，添加后的浓度为稀释溶液的千分之2 ；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过32 μ m的一级滤膜，该一级滤膜为聚氯乙烯滤 膜；4)取滤后液过0. 3 μ m的二级滤膜，该二级滤膜为聚丙烯滤膜；5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜三次，大肠菌体截留在二级滤膜上。以上分离过程所需时间15分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物较少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。实施例三1)取黄豆酱为样品；
2)将黄豆酱样品加无菌生理盐水稀释20倍，得到稀释溶液；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过31 μ m的一级滤膜，该一级滤膜为聚氯乙烯滤 膜，在稀释溶液中添加吐温-60，添加后的浓度为稀释溶液的千分之0. 5 ；4)取滤后液过0.4μπι的二级滤膜，该二级滤膜为聚四氟乙烯滤膜；5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜三次，大肠菌体截留在二级滤膜上。以上分离过程所需时间14分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物较 少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。实施例四1)取蚝油为样品；2)将蚝油样品加无菌生理盐水稀释30倍，得到稀释溶液，在稀释溶液中添加吐 温-60，添加后的浓度为稀释溶液的千分之1 ；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过29 μ m的一级滤膜，该一级滤膜为聚四氟乙烯滤 膜；4)取滤后液过0. 45 μ m的二级滤膜，该二级滤膜为聚四氟乙烯滤膜；5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜三次，大肠菌体截留在二级滤膜上。以上分离过程所需时间10分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物较 少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。实施例五1)取蚝油为样品；2)将蚝油样品加无菌生理盐水稀释40倍，得到稀释溶液，在稀释溶液中添加吐 温-80，添加后的浓度为稀释溶液的千分之1. 5 ；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过30 μ m的一级滤膜，该一级滤膜为聚四氟乙烯滤 膜；4)取滤后液过0.4μπι的二级滤膜，该二级滤膜为聚四氟乙烯滤膜；5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜二次，大肠菌体截留在二级滤膜上。以上分离过程所需时间为20分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物 较少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。实施例六1)取黄豆酱为样品；2)将蚝油样品加无菌生理盐水稀释35倍，得到稀释溶液在稀释溶液中添加吐 温-60，添加后的浓度为稀释溶液的千分之2 ；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过28 μ m的一级滤膜，该一级滤膜为聚四氟乙烯滤 膜；4)取滤后液过0. 35 μ m的二级滤膜，该二级滤膜为聚四氟乙烯滤膜；5)用无菌生理盐水洗涤二级滤膜三次，大肠菌体截留在二级滤膜上。以上分离过程所需时间18分钟，最终截留在二极滤膜上的大肠菌体中干扰物较少，因此，本实施例的分离速度快、分离精度高。 以上仅 是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对 本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改 进和润饰也应视为本发明的保护范围。
权利要求
一种调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，包括如下步骤1)取调味品样品；2)将样品以无菌生理盐水稀释5～40倍，得到稀释溶液，加入助滤剂；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；4)取滤后液过0.2～0.45μm的二级滤膜；5)用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上。
2.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤3)中，一级滤膜 的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、聚四氟乙烯中的任一种。
3.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤4)中，二级滤膜 的材质为聚丙烯、聚氯乙烯、纤维素酯类、聚碳酸酯类、聚四氟乙烯中的任一种。
4.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤5)中，洗涤次数 为2 3次。
5.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤2)中，所述助滤 剂为吐温-60或吐温-80，所述助滤剂占稀释溶液的重量百分比为千分之0. 5 千分之2。
6.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤2)中，将样品利 用无菌生理盐水稀释15 20倍。
7.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤3)中，所述一级 滤膜的孔径为30 μ m。
8.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤4)中，所述二级 滤膜的孔径为0. 3 0.4 μ m。
9.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，步骤5)中，所述无菌 生理盐水的用量为20 50ml。
10.如权利要求1的调味品中大肠菌群分离富集方法，其特征在于，所述调味品为蚝油 或豆酱。
全文摘要
本发明公开一种调味品中大肠菌群分离富集方法，包括如下步骤1)取调味品样品；2)将样品以无菌生理盐水稀释5～40倍，得到稀释溶液，加入助滤剂；3)将稀释溶液以真空过滤法滤过28～32μm的一级滤膜；4)取滤后液过0.2～0.45μm的二级滤膜；5)用无菌生理盐水多次洗涤二级滤膜，大肠菌体截留在二级滤膜上。本发明的调味品中大肠菌群分离富集方法，采用分级过滤，同时添加助滤剂，对菌体友好，能够快速分离菌体并且不会影响大肠菌群的活性，保证蚝油、黄豆酱等调味品中大肠菌群的高效快速分离。
文档编号C12R1/19GK101864384SQ20101017327
公开日2010年10月20日 申请日期2010年5月11日 优先权日2010年5月11日
发明者严守雷, 吴俊 , 潘思轶, 缪素娜, 邓少雅, 黄文彪 申请人:佛山市海天调味食品有限公司;佛山市海天(高明)调味食品有限公司