专利名称：果实病害防腐保鲜剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及的是果实采后病害防治技术领域，更具体的是一种利用拮抗酵母和低 剂量杀菌剂的果实防腐保鲜技术。
背景技术：
水果和蔬菜采后病害，是一个全球性的问题。发达国家约有10% -30%的新鲜果 蔬由于采后病害导致腐烂损失。长期以来，控制果蔬采后病害的主要措施是使用杀菌剂。 但是由于杀菌剂的长期和大量使用，严重地污染了环境，并会对人类健康造成危害。此外， 高频率地使用单一种类的杀菌剂会使病原菌产生抗药性问题，使杀菌剂的防治效果大大降 低。嘧霉胺(pyrimethanil)是一种新型植物病害杀菌剂，国内外对该杀菌剂的 防治已有较多研究，包括单独使用或作为主效成分复合使用。中国发明专利，专利号 99809537. 0(含嘧霉胺的悬浮高浓度制剂)，公开了一种含嘧霉胺的悬浮浓缩水剂。中国 发明专利，专利号CN1759674B(防治番茄灰霉病的杀菌剂组合物)，公开了一种含的嘧霉胺 防治番茄灰霉病的化学杀菌剂组合物。中国发明申请号200710000069. 4(含有嘧霉胺的 油状透明液体杀真菌组合物)，公开了一种含有嘧霉胺的油状透明液体杀真菌组合物。中 国发明申请号200910037471. 9 (嘧霉胺水剂)，公开了一种嘧霉胺水剂的配方。中国发明 申请号200910016497. 5 (嘧霉胺水分散粒剂及其制备方法)，公开了一种以嘧霉胺为主效 剂的植物病害杀菌剂。中国发明申请号200810027606. 9 ( 一种沙糖桔复合保鲜剂)，公开 了一种含嘧霉胺的沙糖桔复合保鲜剂。中国发明申请号200910139726. 2(—种杀菌组合 物)公开了一种嘧霉胺与嘧菌环胺的复配杀菌组合物，可用于果树、棉花、水稻、蔬菜等作 物的病害，尤其是真菌性病害防治。中国发明专利，专利号ZL02818140.9(含有嘧霉胺和 异菌脲的杀真菌剂组合物)，公开了一种含嘧霉胺和异菌脲的新型杀真菌剂组合物，能控 制特定植物病害或控制植物上存在或可能出现的特定的植物致病真菌。中国发明申请号 200910139904. 1 ( 一种含有咯菌腈的复配杀菌组合物)，公开了一种农用杀菌组合物，嘧霉 胺和咯菌腈的复配杀菌组合物。中国发明申请号200910023669. 1(含有烟酰胺和嘧霉胺的 农药杀菌组合物)，公开了一种以烟酰胺和嘧霉胺为有效成分的农药组合物。中国发明申请 号200910165912. 3 ( —种含氟啶胺的杀菌组合物)，公开了一种含嘧霉胺的杀菌剂组合物。 中国发明申请号98805038. 2 (含有4-苯氧喹啉的杀菌混剂)，公开了一种含嘧霉胺的杀菌 剂组合物。中国发明申请号200310115313. 3(黄芩提取物作为农用杀菌剂的应用以及含 有之的农用杀菌组合物)，公开了一种含嘧霉胺和黄苓提取物的防治农作物病害的杀菌剂。 中国发明申请号200410023846. 3 ( 一种防治灰霜霉病的杀菌组合物)，公开了一种含嘧霉 胺的防治灰霜霉病的杀菌组合物。中国发明申请号200680046042. 2 (杀真菌活性物质结合 物)，公开了一种含嘧霉胺和肟醚衍生物的杀真菌剂。中国发明申请号200910032951. 6 (— 种咪鲜胺和嘧霉胺复配的杀菌组合物)，公开了一种含咪鲜胺和嘧霉胺的复配杀菌组合物。 此外，中国发明申请号200580036082. 4 (苯胺基嘧啶用于木材保护的用途)，公开了一种含嘧霉胺的防止木材霉变保护剂。中国发明申请号200810195214. 3 (鲍曼菌液活性粗浸膏嘧 霉胺复配杀菌剂及其应用)公开了一种含鲍曼菌液和嘧霉胺复合杀菌剂。低剂量化学杀菌剂与采后生防制剂的混合使用也是目前的研究热点，因为该方法 具有以下优点增强处理对病害的控制，特别是杀菌剂对病原菌一般都具有杀灭的作用，而 生防制剂往往仅具有抑菌的效应；消除病原菌对化学杀菌剂的抗药性；提高生防制剂的效 力以达到商业化应用的抑菌水平；降低生防制剂的浓度以降低使用成本，从而提高生防制 剂的经济性(Janisiewicz 和 Conway, 2010)。但国内外尚未见有拮抗酵母和嘧霉胺复合使用对果实病害控制的报道。参考文献Janisiewicz WJ and Conway WS. 2010. Combining biological control with physical andchemical treatments to control fruit decay after harvest. Stewart Postharvest Review 2010，1:3Published online 01 March 2010doi :10.2212/ spr. 2010. 1.3 (简尼斯维克和孔伟，2010，联合生物控制和物理、化学处理对果实采后病害 的控制，斯图尔特采后综述，在线发表。)
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种防腐效果好的果实病害防腐保鲜剂。为了解决上述技术问题，本发明提供一种果实病害防腐保鲜剂，该保鲜剂由罗伦 隐球酵母悬浮液、嘧霉胺和水组成，每IL保鲜剂中含有1 X IO10 1 X IO11个罗伦隐球酵 母细胞、4 400mg嘧霉胺，其余为水；所述罗伦隐球酵母的保藏名称为罗伦隐球酵母 (Cryptococcuslaurentii)ZJU 10，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心，保藏日期2010年1月20日，保藏号CGMCC NO. 3590，保藏地址北京市朝阳区北辰 西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。本发明提供的果实病害防腐保鲜剂，是含有罗伦隐球酵母(Cryptococcus Iaurentii，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏编号CGMCC 3590)悬浮 液和低剂量杀菌剂嘧霉胺(pyrimethanil)的复合型防腐保鲜剂。上述罗伦隐球酵母悬浮 液是指经过菌种活化，并配制成的具有抑菌效果且浓度适宜的酵母菌悬液。本发明所使用的低剂量杀菌剂嘧霉胺的有效浓度是指其使用量不抑制拮抗酵母 的生长和繁殖，并能发挥嘧霉胺特有的杀菌作用且能与罗伦隐球酵母产生对病害协同控制 的浓度。发明人在发明过程中，为了寻求合适的杀菌剂，曾进行了如下实验实验1、杀菌剂对扩展青霉在PDA平板上的抑制效应1、杀菌剂(1)扑海因(Rovral,50% Iprodione SC)，拜耳作物科学公司生产；(2)丰收纯(Moncozeb · Diniconazole, 32. 5% WP)，江苏农药研究所生产；(3)甲基托布津(Topsin-M，70 % WP)，日本曹达株式会社生产；(4)特普唑(Diniconazole，12. 5% WP)，沈阳丰收农药有限公司生产；(5)好力克(Horizon，43% Tebuconazole SC)，拜耳作物科学公司生产；(6)翠喜(Prochloraz，45% EC)，深圳诺普信农化有限公司生产；
(7)使百克(ProChloraZ，25% EC)，上海迪拜农药有限公司生产；(8)施加乐(有效成分嘧霉胺含量为40% )，拜耳作物科学公司生产；2、PDA培养基含马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，用水定容至1000ml，自然pH， 121°C 灭菌 20min。3、滤纸片制作用打孔器在定量滤纸上打出直径5mm的小圆片，于121°C灭菌 20min，备用。4、病原菌供试病原菌分离于自然发病的苹果果实，经鉴定为扩展青霉 (Penicilliumexpansum)。将扩展青霉接种于PDA培养基28°C下培养7天后置于4°C冰箱 中备用。5、病原菌培养和孢子悬浮液制备1)、活化将扩展青霉孢子接种于PDA斜面培养基上，在28°C培养7天，重复传代 培养2次。2)、离心分离向培养基中加入5mL含0.05% (V/V) TWeen80 (使病原菌孢子悬浮 均勻)的无菌水，用接种环刮下孢子，形成孢子悬浮液。用移液枪取Iml孢子悬浮液于离心 管中，在3000r/min条件下，离心10-15分钟，并用0. 05% Tween80的无菌水洗涤2次，以去 除培养介质。3)、悬浮和确定浓度向离心管中加入少量0. 05% Tween80的无菌水，使孢子振荡 混勻，并将孢子悬浮液稀释成10倍和100倍两个浓度梯度，用血球计数板计数并调整浓度 至 5X104cfu/mL，待用。6、病原菌对杀菌剂的敏感性用移液枪取1000 μ 1浓度为5 X 104Cfu/ml的扩展青霉孢子悬浮液注入平板上，与 PDA培养基混合均勻，待培养基凝固后，将无菌的滤纸片置于平板中心，取20μ 1 —定浓度 的杀菌液加入到滤纸片上，将平板置于28°C下培养72小时。每种杀菌剂设6个处理，浓度 依次为 10mg/ml、5mg/ml、2. 5mg/ml、lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml，每个浓度做 3 个重复，用 无菌水作对照。用十字交叉法测量抑菌圈直径大小，观察不同浓度杀菌剂对扩展青霉的抑 制效果。7、结果从
图1和表1可以看出，丰收纯在最高浓度10mg/ml下对P. expansum几乎不存在 抑制作用。特普唑对P. expansum的最小抑菌浓度大于2. 5mg/ml，远远高于推荐使用浓度 0. 05mg/ml,因此特普唑不适合作为P. expansum的杀菌剂。相比较而言，翠喜、使百克、施 加乐对P. expansum的抑制效果较好，其最小抑菌浓度分别为0. 0143mg/ml、0. 0521mg/ml、 0. 0150mg/ml。虽然甲基托布津对C. Iaurentii没有影响，但是其对P. expansum的毒性不 如以上三种杀菌剂。因此综合各种杀菌剂对C. Iaurentii和P. expansum的毒性影响，选择 施加乐作为体内实验的杀菌剂。表1、不同种类杀菌剂对扩展青霉(P. expansum)在PDA平板上的抑制效应
权利要求
一种果实病害防腐保鲜剂，其特征是所述保鲜剂由罗伦隐球酵母悬浮液、嘧霉胺和水组成，每1L保鲜剂中含有1×1010～1×1011个罗伦隐球酵母细胞、4～400mg嘧霉胺，其余为水；所述罗伦隐球酵母的保藏名称为罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)ZJU 10，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2010年1月20日，保藏号CGMCCNO.3590，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
全文摘要
本发明公开了一种果实病害防腐保鲜剂，其由罗伦隐球酵母悬浮液、嘧霉胺和水组成，每1L保鲜剂中含有1×1010～1×1011个罗伦隐球酵母细胞、4～400mg嘧霉胺，其余为水；罗伦隐球酵母的保藏名称为罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)ZJU 10，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2010年1月20日，保藏号CGMCC NO.3590，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。该果实病害防腐保鲜剂具有防腐效果好的特点。
文档编号A23B7/154GK101984834SQ20101017320
公开日2011年3月16日 申请日期2010年5月17日 优先权日2010年5月17日
发明者余挺, 卢黄娉, 郑晓冬, 陈荣乐 申请人:浙江大学