专利名称：一种生物防治菌剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物防治菌剂。
背景技术：
研究表明，在Metschnikowia属酵母发现的20多个种中，没有对人体和环境有不 利影响的菌株。因此，研究人员逐渐对该属的酵母产生了兴趣。国外发现有生防效果的2个 菌禾中是 Metschnikowia pulcherrima 禾口 Metschnikowia fructicola。Μ· pulcherrima 是从 苹果表面分离，对苹果米后病原物 Botrytis cinerea、Penicillium expansum>Alternaria sp.以及Monilia sp.都有一定的抑制效果。该生防菌的悬浮液在苹果伤口上(in vivo) 能有效抑制病害的发生，但其过滤液和灭菌液却没有效果，推断该拮抗菌不产生抗生素；在 不同的固体培养基上(in vitro)与病原物不接触对峙培养，发现该拮抗菌产生了抑制病原 物的代谢产物，培养基种类不同，其抑菌的效果差异很大，认为拮抗菌生境的营养条件影响 了次生代谢物的产生；当Metschnikowia pulcherrima在PDB中与病原菌(B. cinerea)共 培养时，该拮抗菌(IXlO8Cfu πιΓ1)完全可以抑制病原菌(IX IO5孢子πιΓ1)的孢子萌发， 其过滤液和灭菌液则无效果，同时观测到该拮抗菌的活细胞能附着在病原物菌丝体上，因 此认为生防机制源于拮抗菌与病原物的直接作用。在M. pulcherrima生防机制的研究中也 发现，当低浓度的Fe+3 (5 μ g Hir1FeCl3)存在时，该菌在固体培养基上产生了有色的带，病原 物B. cinerea、A. alternate和P. expansum的孢子在有色带上不能萌发，菌丝衰退，而在高 浓度Fe+3条件下却没有抑制的效果，认为拮抗菌与病原物存在Fe+3的竞争。也有研究认为， 该生防菌吸收Fe+3的方式是产生一些可以移动的前体酸性物质(The pulcherrimaacid), 螯合了周围环境中的Fe+3，病原物生长在缺Fe+3的条件下，引起细胞生理的变化，菌丝裂解。 Metschnikowia属的另一个生防菌M. fructicola，是从葡萄表面分离，对贮藏期葡萄的灰 霉病(Botrytis rot)有一定的防治效果，采前24h使用该生防菌可以明显地降低葡萄贮藏 期病原物B. cinerea,Alternaria spp.和Aspergillusniger引发的病害，该拮抗菌生防机 制的探索未见报道。Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T 已经分离获得(Meng-lin Xue,Li-qun Zhang,Qi—ming Wang,Ji-shuZhang,Feng-yan Bai. Metschnikowia sinensis sp. nov. , Metschnikowia zizyphicola sp. nov., Metschnikowia shanxiensis sp. nov., three novel yeast species from jujube fruit. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2006，56 :2245_2250.)。
发明内容
本发明的一个目的是提供梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]在防治植物病害中的应用。本发明提供了梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]在防治 植物病害中的应用。本发明的另一个目的是提供梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov.XY201T]在制备防治植物病害菌剂中的应用；或梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]在果蔬采后保鲜中的应用；所述果蔬采后保鲜为在果蔬采后，抑制果蔬感
染病害。本发明提供了梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]在制 备防治植物病害菌剂中的应用；或梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]在果蔬采后保鲜中的应用；所述果蔬采后保鲜为在果蔬采后，抑制果蔬感染病害。所述植物病害为黑斑病害、腐烂病害、褐腐病、青霉病害、软腐病害、青绿霉病害或 灰霉病害。所述黑斑病害的病原菌为细交链格孢[Alternaria alternate (F r. )Keissler]； 所述腐烂病害的病原菌为多隔镰孢霉[Fusarium decemcellulare Brick.]；所述褐腐 病害的病原菌为褐腐串珠霉[Monilia fructicola Poll.]；所述青霉病害的病原菌 为扩展青霉[Penicillium expansum(Lk.) Thom]；所述软腐病害的病原菌为葡枝根霉 [Rhizopusstolonifer (Ehrenb. ex Fr.)Vui 11.]；所述青绿霉病害的病原菌为意大利青霉 [Penicilliumitalicum Wehmer]或指状青β [Penicillium digitatum Sacc.]。所述黑斑病害为冬枣黑斑病害，所述腐烂病害为冬枣腐烂病害，所述软腐病害为 苹果软腐病害；所述褐腐病害为冬枣褐腐病害，所述青霉病害为冬枣果青霉病害或苹果青 霉病害，所述青绿霉病害为柑桔青绿霉病害；所述灰霉病害为葡萄灰霉病害。所述菌剂，其活性成分为如下1)、2)或3)或4)所示1)、_胃—胃[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]；2)、梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的组合 物；3)、梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因 (Iprodione)的组合物；4)、梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克 (Sportak)的组合物。所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的 组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化 钙的配比为(IXlO6Cfu Iiir1-IXlO7Cfu ml—1) (20g F1-IOOg Γ1)，所述梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙的配比具体为 1 X IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfumr1 20gr\50g Γ1 或 IOOg Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因的组 合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海因的 配比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述扑海因的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克的组合 物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述施保克的配 比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述施保克的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu
5ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙均 为独立包装；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海 因〔3- (3，5- 二氯苯基)-N-异丙基-2，4- 二氧咪唑烷-1-羧酰胺〕均为独立包装；所述梅 奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克〔N-丙基-Ν_[2_(2，4， 6_三氯苯氧基)乙基]-咪唑-1-甲酰胺〕均为独立包装。所述2)所示组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]与所述氯化钙分别以其液体形式存在的，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]白勺 1 # 巾 _ 胃 Sl ·胃[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量为(1 XlO6Cfu Hir1-I XlO7Cfu πιΓ1)，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量具体为IXlO6Cfu ml—1或IXlO7Cfu ml—1，氯化钙的液体中氯化钙的浓度具 体为 SOgF1 或 IOOgr1 ；所述3)所示组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]与所述扑海因分别以其液体形式存在的，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp· nov· XY201T]的液体中梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量为(IX IO6-I X IO7Cfu ml—1)，扑海因的液体中扑海因的浓度为50 μ g πιΓ1 ；梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]的含量具体为 1 X 106cfu πιΓ1 或 1 X 107cfu πιΓ1 ；所述4)所示组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]与所述施保克分别以其液体形式存在的，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量为(IX IO6-I X IO7Cfu ml—1)，施保克的液体中施保克的浓度为50 μ g m Γ1 ；梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]的含量具体为 1 X 106cfu πιΓ1 或 1 X 107cfu Ι Γ1，所述1)所示菌剂按照如下方法制备得到将梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp.nov. XY201T]发酵，收集发酵容器中的所有物质得到菌剂；所述发酵使用的发酵培养基为将蔗糖、牛肉蛋白胨、Na2HPO4, NaH2PO4, MgSO4, NaNO3^ FeCl3和泡敌溶于水中，用水补齐体积；所述蔗糖在所述发酵培养基中的浓度为 1.5%-2% (质量百分含量)，所述牛肉蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为1. 3% -1. 6% (质量百分含量)，所述Na2HPO4在所述发酵培养基中的浓度为0. 05% -0. 1 % (质量百分 含量)，所述NaH2PO4在所述发酵培养基中的浓度为0. 05 % -0. 1 % (质量百分含量)，所 述MgSO4在所述发酵培养基中的浓度为0. 03% -0. 05% (质量百分含量)，所述NaNO3在所 述发酵培养基中的浓度为0. 03 % -0. 05 % (质量百分含量)，所述FeCl3在所述发酵培养 基中的浓度为0. 02% -0. 05% (质量百分含量)，所述泡敌在所述发酵培养基中的浓度为 0.01% -0. 03% (质量百分含量)；所述蔗糖在所述发酵培养基中的浓度具体为1.5%、1.8%或2% (质量百分含量)，所述牛肉蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度具体为1.3%、1.5%或1.6% (质量百分 含量)，所述Na2HPO4在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 05 %、0. 08 %或0. 1 % (质量百 分含量)，所述NaH2PO4在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 05 %、0. 08 %或0. 1 % (质量 百分含量)，所述MgSO4在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 03 %、0. 04 %或0. 05 % (质量 百分含量)，所述NaNO3在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 03 %、0. 04 %或0. 05 % (质量 百分含量)，所述FeCl3在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 02 %、0. 03 %或0. 05 % (质量 百分含量)所述泡敌在所述发酵培养基中的浓度具体为0.01%、0. 02%或0.03% (质量百 分含量)；所述发酵温度为25V _29°C，所述发酵温度具体为27°C、27. 5°C、28°C ；所述发酵 培养基的初始PH值为5. 0-6. 0，所述发酵培养基的初始PH值具体为5. 5,5. 6,5. 8 ；所述 发酵时间为3天-4天，所述发酵时间具体为3天、3. 5天或4天，所述发酵中的通气量为 80識021、4-1001111021^^，所述发酵中的通气量具体为80福021^^或100福021、人本发明的第三个目的是提供一种防治植物病害菌剂。本发明提供的一种防治植物病害菌剂，其活性成分1)或2)或3)如下1)、梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. ηον· XY201T]与氯化钙的组合 物；2)、梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因 (Iprodione)的组合物；3)、梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克 (Sportak)的组合物。所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的 组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯 化钙的配比为(IXlO6Cfu Iiir1-IXlO7Cfu ml—1) OOgr1-IOOg Γ1)，所述梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙的配比具体为 1 X IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfumr1 20g F\50g Γ1 或 IOOg Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因的组合 物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海因的配 比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述扑海因的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克的组合 物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述施保克的配 比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述施保克的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述2)所示的组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙均为独立包装；所述3)所示的组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海因均为独立包装；
所述4)所示的组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克均为独立包装。所述2)所示组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]与所述氯化钙分别以其液体形式存在的，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]白勺 1 # 巾 _ 胃 Sl ·胃[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量为(1 XlO6Cfu Hir1-I XlO7Cfu πιΓ1)，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量具体为IXlO6Cfu ml—1或IXlO7Cfu ml—1，氯化钙的液体中氯化钙的浓度具 体为 20g I-1JOg Γ1 或 IOOg Γ1 ；所述3)所示组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]与所述扑海因分别以其液体形式存在的，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的浓度为(IX IO6-I X IO7Cfu ml—1)，扑海因的液体中扑海因的浓度为50 μ g m Γ1 ；梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]的浓度具体为 1 X 106cfu πιΓ1 或 1 X 107cfu πιΓ1 ；所述4)所示组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]与所述施保克分别以其液体形式存在的，梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]的含量为(IX IO6-I X IO7Cfu ml—1)，施保克的液体中施保克的浓度为50 μ g m Γ1 ；梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov. XY201T]的液体中梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]的含量具体为 1 X 106cfu πιΓ1 或 1 X 107cfu Ι Γ1，所述1)所示菌剂按照如下方法制备得到将梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp.nov. XY201T]发酵，收集发酵容器中的所有物质得到菌剂；所述发酵使用的发酵培养基为将蔗糖、牛肉蛋白胨、Na2HPO4, NaH2PO4, MgSO4, NaNO3^ FeCl3和泡敌溶于水中，用水补齐体积；所述蔗糖在所述发酵培养基中的浓度为 1.5%-2% (质量百分含量)，所述牛肉蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度为1. 3% -1. 6% (质量百分含量)，所述Na2HPO4在所述发酵培养基中的浓度为0. 05% -0. 1 % (质量百分 含量)，所述NaH2PO4在所述发酵培养基中的浓度为0. 05 % -0. 1 % (质量百分含量)，所 述MgSO4在所述发酵培养基中的浓度为0. 03% -0. 05% (质量百分含量)，所述NaNO3在所 述发酵培养基中的浓度为0. 03 % -0. 05 % (质量百分含量)，所述FeCl3在所述发酵培养 基中的浓度为0. 02% -0. 05% (质量百分含量)，所述泡敌在所述发酵培养基中的浓度为 0.01% -0. 03% (质量百分含量)；所述蔗糖在所述发酵培养基中的浓度具体为1.5%、1.8%或2% (质量百分含 量)，所述牛肉蛋白胨在所述发酵培养基中的浓度具体为1.3%、1.5%或1.6% (质量百分 含量)，所述Na2HPO4在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 05 %、0. 08 %或0. 1 % (质量百 分含量)，所述NaH2PO4在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 05 %、0. 08 %或0. 1 % (质量 百分含量)，所述MgSO4在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 03 %、0. 04 %或0. 05 % (质量百分含量)，所述NaNO3在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 03 %、0. 04 %或0. 05 % (质量 百分含量)，所述FeCl3在所述发酵培养基中的浓度具体为0. 02 %、0. 03 %或0. 05 % (质量 百分含量)所述泡敌在所述发酵培养基中的浓度具体为0.01%、0. 02%或0.03% (质量百 分含量)；所述发酵温度为25V _29°C，所述发酵温度具体为27°C、27. 5°C、28°C ；所述发酵 培养基的初始PH值为5. 0-6. 0，所述发酵培养基的初始PH值具体为5. 5,5. 6,5. 8 ；所述 发酵时间为3天-4天，所述发酵时间具体为3天、3. 5天或4天，所述发酵中的通气量为 80識021、4-1001111021^^，所述发酵中的通气量具体为80福021^^或100福021、人所述的菌剂在防治植物病害中的应用；或所述的菌剂在果蔬采后保鲜中的应用； 以上应用均为本发明保护的范围，所述果蔬采后保鲜为在果蔬采后，抑制果蔬感染植物病 害。本发明的试验证明，分离得到梅奇属新种[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]，生物测定表明该梅奇属新种对枣果黑斑病及黄瓜和茄子腐烂病具有显著的防治 作用，而且能有效防治枣果腐烂病害、葡萄灰霉病害、枣果褐腐病害、枣果和苹果青霉病害、 梨软腐病害等，对柑桔的青绿霉病也有一定的防治效果。生物安全性测定结果表明，该菌株 对人体和环境安全，无副作用。
图1为基于26S rDNA D1/D2区序列和Neighbor-Joining分析构建的系统发育树图 2 为 M. zizyphicola XY201T (a, b)图3为梅奇酵母菌XY201在冬枣伤口上的定殖能力图4为梅奇酵母菌XY201在冬枣果面上的定殖能力图5为梅奇酵母菌XY201的活细胞和培养滤液对采后冬枣病害的抑制
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的实验如无特殊说明，均为重复三次，取平均值。实施例1、Metschnikowia属酵母的分离和鉴定细交链格孢[Alternaria alternate (Fr. )Keissler]，是从田间自然发病的冬枣 表面分离，经纯化后接种在PDA培养基，在28°C下培养IOd后，借助血球计数器，用无菌水配 成孢子悬浮液1 X IO6孢子πιΓ1。冬枣采收于中国山东省无棣，骏枣采收于中国山西省交城。选用无病虫害、无伤、 成熟度和大小一致的果实，预冷2d后入PVC袋，放-2°C冰箱中冷藏。试验时，枣果硬度为 12. 53kg/cm2，可溶性固形物含量为36. 8%，总酸为0. 46% 0骏枣硬度12. 65kg/cm2，可溶性 固形物含量为33. 2%，总酸为0. 37%。接种前枣果用2% NaOCl消毒2min，经蒸馏水冲洗 后风干，待用。1、分离1)从枣果表面分离
取10个上述获得的枣果放在盛0. 2M磷酸缓冲液容器中，在IOOr · mirT1旋转振 荡器中洗涤lOmin，丢弃洗液。2次清洗前，枣果进行30s超声处理。2次洗液经连续稀释 后，涂布在Luria-Bertani (LB)固体培养基上，每皿0. lmL，在28°C下培养24_48h，依据不同 的菌落特征随机选取菌落，在LB固体培养基上重复划线后，挑取纯化的单菌落与链格孢在 PDA平皿上做对峙试验，放弃有清晰抑菌带的菌落，保留的菌落进一步在枣果上试验。2)从枣果伤口分离取10个上述获得的枣果浸泡在150mL灭菌去离子水的三角瓶中，在IOOr · mirT1 旋转振荡器中清洗2次。挑取枣果，每果刺3mmX3mm伤口一个，每处理3个果实。在每个 伤口放1次和2次洗液各20 μ L，2h后接种20 μ 1链格孢孢子悬浮液(1 X IO6孢子πιΓ1)，在 25°C下保湿培养7d后，选择枣果上未显示病症的伤口，用灭菌接种针刮取表层，经连续稀 释后，取此悬浮液100 μ L涂在LB固体培养基上，Id后把具有不同形态特征的单一菌落，在 LB平皿上划线，挑取纯化后的单菌落与链格孢做对峙试验，放弃有抑菌带的菌落，在枣果上 试验。3)从枣果上筛选挑取的枣果试材成熟度一致，无病，大小均勻。经表面消毒后，每果刺3mm X 3mm 伤口一个，移入从枣果表面和伤口分离的酵母菌悬浮液(IXlO8Cfu mrOsOyLJh后接种 20 μ L链格孢孢子悬浮液(IX IO6孢子πιΓΟ^δ 下保湿培养7d后，统计果实的发病率和病 斑直径，以灭菌水作为对照。每个分离菌株处理24个果，每组8个果。试验重复3次。随 后选取拮抗效果比较理想的菌株，进一步扩大供试枣果群体量。每菌株取40个果，每组8 个果，分别培养5d、7d、9d后统计枣果的发病率和病斑直径，试验重复3次。4)分离结果从枣果面和伤口两种途径，分离到138个酵母菌株，其中酵母菌XY201菌株有显著 拮抗效果，其发病率和病斑直径均显著低于对照(P < 0. 05)，拮抗酵母菌比对照发病率下 降了 100% (表1)。选择XY201在枣果上重复试验，从表2可知，拮抗酵母菌XY201，在培养 5d、7d时，发病率和病斑直径均为0 ；当9d时，比对照发病率下降了 100%。因此，对有显著 拮抗效果的酵母菌XY201进行鉴定。表1枣果实伤口接种拮抗菌和细交链格孢后的发病率和病斑直径*
菌株发病率(％)病斑直径(mm)XY201ObObControl100a19.8a*同列不同字母表示邓肯式多重差异范围检测在P = 0. 05水平上差异显著。*表中数据是果实在25°C下接种病菌7d后30个伤口的平均值。表2拮抗菌在枣果实伤口上对细交链格孢的抑制效果*
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权利要求
梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov.XY201T]在防治植物病害中的应用。
2.梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]在制备防治植物病害菌 剂中的应用；或梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]在果蔬采后保鲜中的应 用；所述果蔬采后保鲜为在果蔬采后，抑制果蔬感染植物病害。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述植物病害为黑斑病害、腐烂病害、褐腐病、青霉病害、软腐病害、青绿霉病害或灰霉 病害。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于所述黑斑病害的病原菌为细交链格孢[Alternaria alternate (Fr. )Keissler]； 所述腐烂病害的病原菌为多隔镰孢霉[Fusarium decemcellulare Brick.]；所述褐腐 病害的病原菌为褐腐串珠霉[Monilia fructicola Poll.]；所述青霉病害的病原菌 为扩展青霉[Penicillium expansum(Lk.)Thom]；所述软腐病害的病原菌为葡枝根霉 [Rhizopusstolonifer (Ehrenb. ex Fr.)Vui 11.]；所述青绿霉病害的病原菌为意大利青霉 [Penicilliumitalicum Wehmer]或指状青β [Penicillium digitatum Sacc.]。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于所述黑斑病害为冬枣黑斑病害，所述腐烂病害为冬枣腐烂病害，所述软腐病害为苹果 软腐病害；所述褐腐病害为冬枣褐腐病害，所述青霉病害为冬枣青霉病害或苹果青霉病害， 所述青绿霉病害为柑桔青绿霉病害；所述灰霉病害为葡萄灰霉病害。
6.根据权利要求2-5中任一所述的应用所述菌剂，其活性成分为如下1)、2)或3)或 4)所示1)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]；2)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的组合物；3)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因的组合物；4)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克的组合物。
7.根据权利要求1-6中任一所述的应用，其特征在于所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的组 合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化 钙的配比为(IXlO6Cfu Iiir1-IXlO7Cfu ml—1) (20g F1-IOOg Γ1)，所述梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙的配比具体为 1 X IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfumr1 20g F\50g Γ1 或 IOOg Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因的组合物 中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海因的配 比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述扑海因的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克的组合物 中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述施保克的配比为(IXlO6Cfu IIir1-I X IO7Cfu mr1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述施保克的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；2)所示的组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T] 与所述氯化钙均为独立包装；3)所示的组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T] 与所述扑海因均为独立包装；4)所示的组合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T] 与施保克均为独立包装。
8.一种防治植物病害菌剂，其活性成分如下1)或2)或3)所示1)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的组合物；2)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因的组合物；3)、梅奇酵母菌[Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克的组合物。
9.根据权利要求8所述的菌剂，其特征在于所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与氯化钙的组 合物中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化 钙的配比为(IXlO6Cfu Iiir1-IXlO7Cfu πιΓ1) (20g F1-IOOg Γ1)，所述梅奇酵母菌 [Metschnikowiazizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙的配比具体为 1 X IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfumr1 20g F\50g Γ1 或 IOOg Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与扑海因的组合物 中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海因的配 比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu πιΓ1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述扑海因的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克的组合物 中，所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述施保克的配 比为(IXlO6Cfu Iiir1-I X IO7Cfu πιΓ1) 50 μ g m Γ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicolasp. nov. XY201T]与所述施保克的配比具体为(IX IO6Cfu πιΓ1 或 1 X IO7Cfu ι Γ1) 50 μ g πιΓ1 ；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述氯化钙均为独 立包装；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与所述扑海因均为独 立包装；所述梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp. nov. XY201T]与施保克均为独立包装。
10.权利要求8或9所述的菌剂在防治植物病害中的应用；或权利要求8或9所述的菌剂在果蔬采后保鲜中的应用；所述果蔬采后保鲜为在果蔬 采后，抑制果蔬感染植物病害。
全文摘要
本发明公开了一种生物防治菌剂。本发明提供了梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov.XY201T]在防治植物病害中的应用，还提供了梅奇酵母菌[Metschnikowia zizyphicola sp.nov.XY201T]在制备防治植物病害菌剂中的应用及在果蔬采后保鲜中的应用。所述植物病害为黑斑病害、腐烂病害、灰霉病害、青霉病害、软腐病害、褐腐病害和青绿霉病害。所述果蔬采后保鲜为水果和蔬菜腐烂病的抑制。本发明的实验证明，分离得到梅奇属新种(Metschnikowia zizyphicola sp.NovXY201T)，对枣果黑斑病及黄瓜和茄子腐烂病等具有显著的防治作用。
文档编号C12N1/16GK101946805SQ20101029450
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月28日 优先权日2010年9月28日
发明者薛梦林 申请人:薛梦林