专利名称：一种以豆饼粉为主要原料生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法
技术领域：
本发明属于工业微生物发酵工程技术领域，具体地说涉及一种枯草芽孢杆菌菌剂的生产方法。
背景技术：
近年来，养殖业飞速发展，抗生素及其它化学药物在集约化大规模生产过程中的大量使用，虽然达到了增产与抗病目的，但抗生素的长期滥用不仅引起了病原菌的抗药性， 而且抗生素残留直接威胁着人类的健康。抗生素残留已成为我国多种养殖产品的国际贸易壁垒，使我国出口企业蒙受巨大的经济损失。近年来国家采取严厉的手段，严格限制抗生素或禁止某些抗生素的使用，并积极寻求其替代品。抗生素替代品(如微生态制剂、寡糖、抗菌肽等)的研制成为各国学者的研究热点。微生态制剂很早就开始使用，二十世纪以来在世界各地得到迅速发展，到80年代初已有多种微生态制品投放市场，而且数量和品种不断扩大。同一时期我国研制成功的芽孢杆菌类、乳酸菌类和酵母菌类的兽用微生态制剂，作为饲料添加剂被广泛使用。枯草芽孢杆菌是一种好氧菌，除了能产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，还可以分泌抗菌素，是我国农业部允许可以作为饲料级微生态添加剂的两种芽孢杆菌之一，其已被越来越多地研制成饲用微生态制剂。除此之外，枯草芽孢杆菌更作为一种重要的工业菌种已经被广泛的使用于畜牧业、医药工业、植物病害防治以及环境保护等领域，故具有广泛的发展前景，显示出巨大的社会效益和生态效益。目前，生产枯草芽孢杆菌菌剂均以淀粉、玉米粉等粮食作物为主要原料，经过发酵过程生产出微生态制剂。在专利一种地衣芽孢杆菌菌株及其所产生的细菌素的用途 (CN200510061554. 3)中，生产细菌素的培养基为LB培养基，其主要成分是价格昂贵的蛋白胨和酵母提取物。但是，近年来，由于粮食作物价格不断上升，导致发酵产品成本上涨。本申请发明人通过实验发现农副产品豆饼粉对生产微生态制剂的各种杆菌和霉菌有促进生长作用，用作生产原料，可大大减少淀粉、葡萄糖、玉米粉、酵母提取物/酵母浸膏、蛋白胨等粮食的用量，使其生产成本降低。
发明内容
针对以上技术中原料成本过高的不足之处，本发明的目的在于采用廉价的豆饼粉为主要发酵原料生产枯草芽孢杆菌菌剂，使本方法不但保持了上述技术的优点，而且使生产成本大幅度下降。—种采用豆饼粉为主要发酵原料生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法，其特征在于发酵过程包括以下步骤1、以豆饼粉为主要原料制成培养基溶液；2、将枯草芽孢杆菌菌种接入所说的培养基溶液中培养；其特征在于所说的培养基溶液中还包括葡萄糖和氯化铵。
本发明所采用的技术方案为把传统的发酵培养基(LB培养基)更改为以豆饼粉为主要原料添加适量的葡萄糖和氯化铵，多次分批发酵实验证明，该发酵液中的活菌数平均为3. 68亿cfu/ml，与LB培养基中的活菌数平均数3. 8亿cfu/ml相差不大，而且菌体生长状态一致。本发明培养基中各组分的重量百分含量分别为豆饼粉2-4%葡萄糖0.1-0. 5%氯化铵0.05-0. 15%余量为水实验证明，发酵培养基(即豆饼粉2-4 % ；葡萄糖0. 1-0. 5 % ；氯化铵 0. 05-0.15% ；余量为水)中各组分的改变对发酵水平影响不大，且菌体粗壮整齐，使5L发酵罐的发酵水平达到平均3. 75亿cfu/ml的水平，在产品质量不变的情况下，大大降低了生产成本。
具体实施例方式实施例一采用如下配比的(以重量计)培养基豆饼粉2%葡萄糖0.1%氯化铵0.05%余量为水培养条件温度为^°C，pH为7.0-7. 5，搅拌速度为150_180rpm，通气量为2L/ min，发酵周期为36小时，在5L的发酵罐中发酵，采用平板稀释法测定活菌数，重复三次取平均值，活菌数可达3. 68亿cfu/ml，而LB培养基的活菌数为3. 75亿cfu/ml，而且菌体生长状态一致，大小均勻，粗壮整齐。实施例二采用如下配比的(以重量计)培养基豆饼粉4%葡萄糖0.5%氯化铵0.15%余量为水培养条件温度为^°C，pH为7.0-7. 5，搅拌速度为150_180rpm，通气量为2L/ min，发酵周期为36小时，在5L的发酵罐中发酵，采用平板稀释法测定活菌数，重复三次取平均值，活菌数可达3. 7亿cfu/ml，而LB培养基的活菌数为3. 8亿cfu/ml，而且菌体生长状态一致，大小均勻，粗壮整齐。实施例三采用如下配比的(以重量计)培养基豆饼粉3%葡萄糖0.3%
4
氯化铵0. 1 %余量为水培养条件温度为^°C，pH为7.0-7. 5，搅拌速度为150_180rpm，通气量为2L/ min，发酵周期为36小时，在5L的发酵罐中发酵，采用平板稀释法测定活菌数，重复三次取平均值，活菌数可达3. 75亿cfu/ml，而LB培养基的活菌数为3. 82亿cfu/ml，而且菌体生长状态一致，大小均勻，粗壮整齐。
权利要求
1.一种以豆饼粉为主要原料生产枯草芽孢杆菌菌剂的方法，其特征在于包括以下步骤1)以豆饼粉为主要原料制成培养基溶液；2)将枯草芽孢杆菌菌种接入所述的培养基溶液中培养，其特征在于所述的培养基溶液中同时需要加入葡萄糖和氯化铵。
2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，以重量百分比计，该培养基中各组分的重量百分含量为豆饼粉2-4% ；葡萄糖0. 1-0. 5% ；氯化铵0. 05-0. 15% ；余量为水。
3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，以重量百分比计，豆饼粉的含量最好是 3% ；葡萄糖的含量最好0.3% ；氯化铵的含量最好0. 1% ；余量为水。
全文摘要
本发明属于工业微生物，发酵工程技术领域。具体涉及一种以豆饼粉为主要原料生产枯草芽孢杆菌菌剂的发酵培养基，该培养基中各组分的重量百分含量为豆饼粉2-4％；葡萄糖0.1-0.5％；氯化铵0.05-0.15％；余量为水。本发明培养基能够促进枯草芽孢杆菌在生长期的大量繁殖，使菌体粗壮整齐，保持产品质量不变的情况下，降低了生产成本。
文档编号C12N1/20GK102250791SQ20111016140
公开日2011年11月23日 申请日期2011年5月28日 优先权日2011年5月28日
发明者李俊峰, 李峰, 李红芳, 渠庆忠 申请人:中国烟草山东进出口有限责任公司, 青岛科技大学