专利名称：生物催化法生产手性α-羟酸及其菌株的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株产(S)-扁桃酸脱氢酶的新菌株-铜绿假单胞菌(Pseudomonas
aeruginosa)ZJB1125，及其在生物拆分a-羟酸外消旋体制备相应(R)-a-羟酸及其酮酸中的应用。
背景技术：
光学活性的a -羟酸是指手性碳上带有羟基同时带有羧基的一类化合物，是重要的手性“砌块”，可用于不对称合成大量生物活性分子。在这类化合物中，光学纯扁桃酸在商业角度上被认为是最重要的代表。扁桃酸又称a-羟基苯乙酸、苯乙醇酸、苦杏仁酸，其R型和S型的结构式如下
权利要求
1.一株产⑶-扁桃酸脱氢酶菌株-铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ZJB1125，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号 CCTCC No M 2011394，保藏日期2011 年 11 月 13 日。
2.如权利要求1所述的铜绿假单胞菌ZJB1125，其特征在于所述铜绿假单胞菌ZJB1125 的16SrDNA序列如SEQ ID NO. 1所示。
3.如权利要求1或2所述的铜绿假单胞菌ZJB1125在生物拆分式(I)所示的a-羟酸 外消旋体制备相应(R)_ a-羟酸及其酮酸中的应用；
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述a-羟酸为下列之一扁桃酸、2-氟扁桃 酸、2-氯扁桃酸、3-氯扁桃酸、4-氟扁桃酸、4-氯扁桃酸、4-溴扁桃酸、2，4- 二氟扁桃酸、3， 5- 二氟扁桃酸、4-甲基扁桃酸、4-轻基扁桃酸、苯基乳酸或2-轻基-4-苯基丁酸。
5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于所述应用为以式(I)所示的a-羟酸 外消旋体为底物，以铜绿假单胞菌CCTCC No M 2011394含酶菌体细胞为催化剂，在20 50°C、pH6. 0 9. 0缓冲液中进行不对称选择性氧化反应2 24小时，制得相应(R) _ a -羟 酸及其酮酸。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述缓冲液为下列之一pH6. 0 6. 6的朽1檬 酸缓冲液、PH6. 5 7. 8的磷酸盐缓冲液或pH7. 4 9. 0的Tris_HCl缓冲液。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述缓冲液中，底物初始浓度为1 10g/L， 含酶菌体细胞添加量以湿重计为10 50g/L。
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述含酶菌体细胞由如下方法获得将铜绿 假单胞菌CCTCC No M 2011394接种至发酵培养基，在25 40°C、100 300rpm下培养 24 72小时，得到的发酵液离心分离，即得到所述含酶菌体细胞；所述发酵培养基终浓度 组成如下甘露醇5 25g/L、酵母浸出粉5 25g/L、K2HP04 0. 5 3. 5g/L、KH2P04 0. 5 3.5g/L、CuCl2 0. 05 0. 5g/L、NaCl 0. 5 2g/L、诱导剂式(I)所示 a -羟酸 0. 5 3g/ L，溶剂为水，pH5 9。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述诱导剂为邻氯扁桃酸。
全文摘要
本发明提供了一株产(S)-扁桃酸脱氢酶新菌株——铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ZJB1125，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号CCTCC NoM 2011394，保藏日期2011年11月13日。通过本发明菌株制备高光学纯度的(R)-扁桃酸及其相关衍生物，光学纯度＞99％，得率和相对应的氧化产物酮酸得率均接近于50％；利用本发明提供的菌株来拆分α-羟基酸外消旋体，具有操作简单安全、成本低廉、反应条件温和等优点，更重要的是显著提高了过程的原子经济性，具有很好的工业应用前景。
文档编号C12R1/385GK102660471SQ20121011008
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月13日 优先权日2012年4月13日
发明者沈寅初, 王威, 薛亚平, 郑裕国 申请人:浙江工业大学