专利名称：硅橡胶塑化标本dna提取方法
技术领域：
本发明涉及一种DNA提取方法，尤其是一种既可长期保存DNA又可降低保存成本的硅橡胶塑化标本DNA提取方法。
背景技术：
科学实验中获得的DNA主要包括基因组DNA和cDNA，为保留遗传信息，同常需要将DNA长期保存。由于DNA在常温下容易降解、破坏，因此，DNA的长期保存方法是低温(低于_20°C)冷冻，温度越低保存时间越久。长期低温冷冻不仅对实验室设备提出更高要求，而且制冷还会浪费大量电能，导致DNA保存的成本加大。目前，硅橡胶塑化已是标本保存的常用方法之一。硅橡胶塑化保存标本技术的基 本原理指利用硅橡胶塑化剂对标本进行渗透，从而取代组织中的水分和脂类，从而使生物标本保持原有形态，达到保存标本的目的，基本步骤包括标本固定、脱水、塑化浸溃和固化处理等。虽然经过硅橡胶技术保存的标本具有干燥、无毒、无味、保存长久且成本低等特点，但是，迄今为止还没有将硅橡胶塑化标本中的DNA提取出来的方法，以至于DNA保存仍沿用上述的低温冷冻方法。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种既可长期保存DNA又可降低保存成本的硅橡胶塑化标本DNA提取方法。本发明的技术解决方案是一种硅橡胶塑化标本DNA提取方法，其特征在于依次按如下步骤进行
a.将硅橡胶塑化标本切割成体积小于O.5mm3的组织块；
b.加入甲醇钠溶液浸泡72小时；
C.用生理盐水或平衡盐溶液洗涤组织块10分钟，1000转/分钟离心10分钟；
d.向组织块中加入细胞裂解缓冲液匀浆，细胞裂解缓与组织块的用量比为Iml40mg ；
e.将所得匀浆转入离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混匀，在65°C恒温水浴锅中水浴30min，所述蛋白酶与组织块的用量比为20 μ I 40mg ；
f.12000转/分钟离心5min，取上清液入另一离心管中，加入等体积的酚、
氯仿、异戊醇(25 24 1)混合液，混摇20分钟；
g.加入2倍体积无水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空气干燥沉淀后加TE溶解沉淀，4度保存备用。本发明可在需要时将硅橡胶塑化标本中的DNA提取出来，因此可利用硅橡胶技术在保存标本的同时将其中的DNA进行长期保存，即可避免DNA在常温下降解、破坏，又解决了低温冷冻保存DNA所存在的成本大的问题。
具体实施例方式a.取硅橡胶塑化人体标本40mg，采用机械方法切割，使组织块体积小于O. 5mm3 ；
b.向组织块中加入甲醇钠溶液浸泡72小时；
c.用5ml生理盐水或平衡盐溶液洗涤组织块10分钟，1000转/分钟离心10分钟；
d.向组织块中加入细胞裂解缓冲液匀浆，以所产生的匀浆中无组织块为准，细胞裂解缓与a步骤所得组织块的用量比为Iml 40mg ；
e.将所得匀浆转入离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混匀，在65°C恒温水浴锅中水浴30min,所述蛋白酶与a步骤所得组织块的用量比为20 μ I 40mg ；
f.12000转/分钟离心5min，以去除未消化的细胞碎片，取上清液入另一离心管中，力口入等体积的酚、氯仿、异戊醇(25 24 :1)混合液，混摇20分钟；
可以重复f步骤一次，以纯化DNA ；
g.加入2倍体积无水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空气干燥沉淀后加TE溶解沉淀，4度保存备用。用琼脂糖凝胶电泳和测序检测所得沉淀，证实是人体DNA。
权利要求
1.一种硅橡胶塑化标本DNA提取方法，其特征在于依次按如下步骤进行 a.将硅橡胶塑化标本切割成体积小于O.5mm3的组织块； b.加入甲醇钠溶液浸泡72小时； C.用生理盐水或平衡盐溶液洗涤组织块10分钟，1000转/分钟离心10分钟； d.向组织块中加入细胞裂解缓冲液匀浆，细胞裂解缓与组织块的用量比为Iml40mg ； e.将所得匀浆转入离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混匀，在65°C恒温水浴锅中水浴30min，所述蛋白酶与组织块的用量比为20 μ I 40mg ； f.12000转/分钟离心5min,取上清液入另一离心管中,加入等体积的酹、氯仿、异戍11(25:24:1)混合液，混摇20分钟； g.加入2倍体积无水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空气干燥沉淀后加TE溶解沉淀，4度保存备用。
全文摘要
本发明公开一种硅橡胶塑化标本DNA提取方法，依次按如下步骤进行将硅橡胶塑化标本切割成组织块；加入甲醇钠溶液浸泡；用生理盐水或平衡盐溶液洗涤组织块；向组织块中加入细胞裂解缓冲液匀浆，细胞裂解缓与组织块的用量比为1ml40mg；将所得匀浆转入离心管中，加入蛋白酶K(500ug/ml)混匀，在65℃恒温水浴锅中水浴30min，所述蛋白酶与组织块的用量比为20μl40mg；12000转/分钟离心5min，取上清液入另一离心管中，加入等体积的酚、氯仿、异戊醇(25241)混合液，混摇20分钟；加入2倍体积无水乙醇，取沉淀，用70%乙醇洗沉淀2次，空气干燥后加TE溶解沉淀，4度保存备用。
文档编号C12N15/10GK102911931SQ20121036758
公开日2013年2月6日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者付元山, 隋鸿锦, 于胜波, 张开立, 宫瑾, 蔡琳, 马景馨, 迟彦艳, 张健飞, 郑楠, 唐炜 申请人:大连医科大学