专利名称：植物抗盐抗病相关蛋白NtNHX1及其编码基因与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物抗盐抗病相关蛋白NtNHXl及其编码基因与应用。
背景技术：
植物在进化过程中发展出各种机制，通过自身生化和生理调节来适应和应对各种环境和胁迫。无论在盐生植物还是甜土植物中，都存在液泡区隔化钠离子的能力；即通过液泡膜上的Na+/H+逆向转运蛋白，将胞质中的钠离子区隔化进入液泡，从而减少有毒的钠离子对胞质中各种酶的毒害。到目前为止，尚未从烟草中克隆到液泡膜上的Na+/H+逆向转运蛋白基因，也没有证据证明植物Na+/H+逆向转运蛋白与植物抗病性或生物胁迫相关
发明内容
本发明的目的是提供一种植物抗盐抗病相关蛋白NtNHXl及其编码基因与应用。本发明所提供的植物抗盐抗病相关蛋白来源于本生烟草(Nicotianabenthamiana),名称为NtNHXl,该蛋白质是如下a)或b)的蛋白质a)由SEQ ID NO 1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)将SEQ ID NO :I的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐盐性和/抗病性相关的由(a)衍生的蛋白质。SEQ ID NO I所示的氨基酸序列由536个氨基酸残基组成。为了使上述(a)中的蛋白便于纯化，可在由SEQ ID NO :I所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表I所示的标签。表I标签的序列
权利要求
1.一种蛋白质，是如下a)或b)的蛋白质 a)由SEQID NO 1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)将SEQID NO 1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐盐性和/或抗病性相关的由a)衍生的蛋白质。
2.权利要求I所述蛋白质的编码基因； 所述编码基因具体可为如下I)或2)或3)的基因 1)其核苷酸序列是SEQID NO 2所示的DNA分子； 2)与I)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且编码权利要求I所述蛋白质的DNA分子； 3)在严格条件下与I)或2)限定的DNA序列杂交且编码权利要求I所述蛋白质的DNA分子。
3.权利要求I所述蛋白质及权利要求2所述基因在调控目的植物的下述至少一种性状中的应用抗病性、耐盐性、液泡H+运输、液泡内pH值、细胞还原力和细胞氧化还原池容量。
4.下述a)或b)的DNA分子 a)其核苷酸序列为SEQID NO :2的第1321位至第1583位核苷酸段； b)在严格条件下与a)限定的DNA序列杂交的DNA分子。
5.含有权利要求4所述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系、重组菌或重组病毒； 所述重组载体具体可为pTRV2-NtNHXl，即在载体pTRV2的EcoRI和KpnI位点间插入SEQ ID NO 2的第1321位至第1583位所示DNA片段。
6.权利要求4所述DNA分子在制备抑制或下调目的植物中权利要求I所述蛋白质表达的物质中的应用。
7.一种培育转基因植物的方法，包括抑制目的植物中权利要求I所述蛋白质的表达，得到与所述目的植物相比具有如下I) -6)中至少一种表型的转基因植物 1)抗病性降低； 2)耐盐性降低； 3)液泡H+外流减少； 4)液泡内pH值降低； 5)细胞还原力降低； 6)细胞氧化还原池容量降低。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述抑制目的植物中所述蛋白质的表达包括将向所述目的植物中导入权利要求5中的所述pTRV2-NtNHXl的步骤。
9.根据权利要求3或6所述的应用或权利要求7或8所述的方法，其特征在于所述目的植物为单子叶植物或双子叶植物；所述双子叶植物具体可为烟草。
10.根据权利要求9所述的应用或方法，其特征在于所述抗病性的致病菌具体可为烟草黑月5病菌(Phytophthora parasitica var. nicotianae)。
全文摘要
本发明公开了一种植物抗盐抗病相关蛋白NtNHX1及其编码基因与应用。所述蛋白来源于本生烟草(Nicotiana benthamiana)，由SEQ ID NO1所示的536个氨基酸组成，具有调控植物抗病性、耐盐性、调节液泡H+运输、调节液泡内pH值、调节细胞还原力和/或调节细胞氧化还原池容量的功能。实验证明，将含有SEQ ID NO2中第1321位至第1583位所示DNA分子的病毒沉默载体pTRV2-NtNHX1转化烟草得到的当代沉默植株，与转空载体对照相比，液泡H+外流明显降低；液泡内pH值降低；细胞还原力和氧化还原池容量的降低；耐盐性和抗病性能力降低。本发明在增强植物耐盐性的同时提高抗病性方面具有重要意义。
文档编号C12N7/01GK102964436SQ20121045057
公开日2013年3月13日 申请日期2012年11月12日 优先权日2012年11月12日
发明者李银心, 陈显扬 申请人:中国科学院植物研究所