专利名称：脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，具体涉及脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用。
背景技术：
放射治疗是肿瘤的重要治疗手段之一，大约60%_70%的肿瘤患者在病程的不同时期需要接受放射治疗，而放射性肠炎是盆腔、腹腔或者腹膜后恶性肿瘤放射治疗后的常见并发症，分别可累及小肠、结肠和直肠，故又称为放射性直肠、结肠、小肠炎。由于神经系统对放射线的反应，早期即可出现胃肠道的症状。一般多出现在放疗开始后I 2周内。恶心、呕吐、腹泻、排出粘液或血样便。累及直肠者伴有里急后重。持久便血可引起缺铁性贫血。便秘少见。偶有低热。痉挛性腹痛则提示小肠受累，乙状结肠镜检查可见粘膜水肿、充血，严重者可有糜烂或溃疡。近年来，随着肿瘤发病率的不断上升及放疗应用的日益增多，放射性肠炎的发病率也在逐年增加，受到国内外医学界的普遍关注。目前治疗放射性肠炎的药物疗效不够理想，而益生菌在胃肠道疾病的治疗中有着独到的优势，特别是对于肠道粘膜的保护及修复起到重要作用。脆弱拟杆菌(ifecieroiofes fragilis')作为一种革兰氏染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染，有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌，分产肠毒素型和非产肠毒素型。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存于结肠中，此外，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。目前研究较多的是脆弱拟杆菌作为一种条件致病菌，当宿主粘膜受损时，可侵犯粘膜下层，引起感染，也可经血液流动，引起身体其它器官如肠道、腹腔、肝、肺、脑组织化脓性感染并伴发脓肿和引起急慢性腹泻等。此外，其对结肠、直肠癌的发生也有促进作用。然而，脆弱拟杆菌并非只是一种条件致病菌。1991年张季阶发表了《一种无毒脆弱拟杆菌的分离鉴定》，报导了关于1983年9月从一个发育良好的婴儿粪便中分离出量大而又较纯的细菌，经以系列的鉴定、基础试验和临床应用观察，属于脆弱拟杆菌群中的一株无毒菌，是人体的益生菌，定名为BF839菌株。由此，研究发现了，脆弱拟杆菌也是一种益生菌。但是，脆弱拟杆菌作为一种益生菌，并且在制备治疗急性放射性肠炎组合物的相关应用，目前尚未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用。为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是:
提供脆弱拟杆菌在制备治疗急 性放射性肠炎组合物中的应用，所述的脆弱拟杆菌保藏单位名称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏日期为2013年3月12日，保藏编号为CGMCC N0.7280，分类命名为 Bac teroi des fragi Iis0其中，所述组合物为至少含有能治疗急性放射性肠炎的脆弱拟杆菌的食品或药物组合物。其中，所述组合物选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基发酵食品、发酵谷类食品中的任意一种。其中，所述组合物为丸剂、片剂、颗粒制剂、胶囊、口服液或者管饲制剂。其中，所述组合物为含有所述脆弱拟杆菌的液体细菌悬浮液。其中，所述脆弱拟杆菌在所述组合物中的含量为KTlOiciCfu /ml。本发明的有益效果是:
本发明发掘了脆弱拟杆菌新的用途，开拓了一个新的应用领域。本发明通过实验证明，脆弱拟杆菌安全无毒，药理作用强，对于急性放射性肠炎有很好的治疗效果、成本低，从而预示了脆弱拟杆菌具有很好的食疗和药用前景。脆弱拟杆菌作为一种益生菌，可用于制备治疗急性放射性肠炎的食品或药物。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。实施例1脆弱拟杆菌菌液的制备 (O由婴儿粪便中分离脆弱拟杆菌
按“正常 菌群检查法”称取0.5克大便，置于先装有4.5ml生理盐水的试管中，以此连续稀释成10_卜10_6，由高稀积度向低稀积度滴到Bd培养基平板上，置于厌氧产气盒中加厌氧产气袋进行厌氧培养。置37°C，2 7天后开罐检查。选取单一菌落进行纯培养、染色镜检、培养特性、生理生化检测。(2)脆弱拟杆菌的增菌培养及菌液制备
选取纯化后的单个菌落接种于改良的胰蛋白胨肉汤中进行增菌培养，所得菌液离心沉淀，转速3000r/min,离心15min,去上清,沉淀物用生理盐水洗漆后,沉淀物用生理盐水稀释，用麦氏比浊管做菌数测定，稀释至IO8 cfu /ml, IO9 cfu /ml, IO10 cfu /ml，保存备用。实施例2脆弱拟杆菌毒力实验
采用实施例1制备的脆弱拟杆菌菌液进行以下实验:
(O小鼠急性毒力实验
取体重22±2克C57BR/C小鼠(雌雄各半)60只，分成高剂量组、低剂量组和对照组，各组20只。高剂量组每只小鼠每天灌胃IO12 cfu /ml菌液0.5ml，低剂量组每天灌胃IO9 cfu/ml菌液0.5ml，对照组每天灌胃0.5ml生理盐水。连续观察14天。实验结果:小鼠正常生长，未见死亡，LD50测不出。(2)大鼠毒力实验
取150±20克SD大鼠30只(雌雄各半)，分为3组:高低剂量组和对照组。高剂量组每只大鼠每天灌胃1012cfu/ml菌液2ml,低剂量组每天灌胃109cfu/ml菌液2ml,对照组每天灌胃2ml生理盐水。连续观察14天，14天后抽静脉血测血象、肝肾功。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。
实验结果:均未见明显异常。(3)恒河猴毒力实验
取恒河猴10只(雌雄各半)，分为2组:高低剂量组和对照组。高剂量组每只恒河猴每天口服1012cfu/ml菌液100ml,低剂量组每天口服109cfu/ml菌液100ml。连续观察60天。14天、30天、45天、60天后分别抽静脉血测血象、肝肾功，测心电图。取胃肠肝脾组织做病理切片电镜观察。实验结果:均未见明显异常。实施例3脆弱拟杆菌对于急性放射性肠炎的治疗作用 采用实施例1制备的脆弱拟杆菌菌液进行以下实验:
模型建立及分组:150只SD大鼠随机分为3组:A组为正常对照组(30只大鼠)，B组为常规剂量照射组(60只大鼠)，C组为高剂量照射组(60只大鼠)。大鼠禁食12-14h，称重后用水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔麻醉后，以仰卧体位固定在有机玻璃板上，以高能X线直线加速器给予全腹部照射，从剑突至耻骨联合，照射面积7*5cm2，其余部位以5cm厚铅板屏蔽，源皮距98cm，发生剂量率为500cGy/min。其中B组照射剂量为10Gy，C组照射剂量为15Gy，正常对照A组大鼠不予照射。实验组B组、C组再分别随机分为2组:BI和B2组，Cl和C2组，每组30只，B1、Cl组照射后给予蒸馏水灌胃，每天每只lml/100g体质量；B2、C2组照射后给予109cfu/ml的脆弱拟杆菌菌液，每天每只1.0ml/lOOg体质量灌胃。观察指标及标本采集:造模成功后，每日观察大鼠一般情况，主要是排便情况、精神状态及活动度。实验组分别于照射后第2、4、7天取大鼠10只(均为灌胃后6h)，同时正常对照组在照射后第2、4、7天取大鼠10只进行实验。处死前禁食水12h，颈椎脱白处死后再严格无菌状态下取回肠系膜 淋巴结2粒，称重后待做细菌培养以测细菌移位率；分别在距Treitz韧带远端3-4cm处取约3cm长的空肠段和2cm长的直肠上段做病理切片。实验结果:照射后各组均出现腹泻，且有不同程度的血便，BI组比B2组、Cl组比C2组腹泻程度明显缓解，血便也明显减少；光学显微镜下，与A组相比较，B1、C1组空场绒毛水肿，炎性细胞浸润，部分绒毛上皮细胞脱落及糜烂，绒毛高度和隐窝深度降低，肠隐窝内细胞有丝分裂相减少。其中Cl空肠绒毛最为稀疏，脱落最为严重，BI组较Cl组轻。而B2、C2组绒毛较完整，绒毛高度和隐窝深度较大，隐窝内细胞有丝分裂相多见，少量炎性细胞浸润。B2组较BI组、C2组较Cl组细菌移位率显著降低。实验结果表明，用脆弱拟杆菌灌胃的大鼠一般情况明显好于不灌胃组，死亡率也低于不灌胃组，病理情况好于不灌胃组。这说明了脆弱拟杆菌对于急性放射性肠炎有很好的治疗效果。
权利要求
1.脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用。
2.根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用，其特征在于:所述组合物为至少含有能治疗急性放射性肠炎的脆弱拟杆菌的食品或药物组合物。
3.根据权利要求2所述的脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用，其特征在于:所述组合物选自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基发酵食品、发酵谷类食品中的任意一种。
4.根据权利要求2所述的脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用，其特征在于:所述组合物为丸剂、片剂、颗粒制剂、胶囊、口服液或者管饲制剂。
5.根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用，其特征在于:所述组合物为含有所述脆弱拟杆菌的液体细菌悬浮液。
6.根据权利要求1所述的脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用，其特征在于:所述脆弱拟杆菌在所述组合物中的含量为IO8IOiciCfu /ml。
全文摘要
本发明涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，具体涉及脆弱拟杆菌在制备治疗急性放射性肠炎组合物中的应用，实验证明，脆弱拟杆菌安全无毒，药理作用强，对于急性放射性肠炎有很好的治疗效果，从而预示了脆弱拟杆菌具有很好的食疗和药用前景。本发明发掘了脆弱拟杆菌新的用途，开拓了一个新的应用领域，脆弱拟杆菌作为一种益生菌，可用于制备治疗急性放射性肠炎的食品或药物组合物。
文档编号A23C9/13GK103142658SQ20131008574
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月18日 优先权日2013年3月18日
发明者智发朝, 白杨, 刘洋洋 申请人:广州知光生物科技有限公司