一种酸性磷酸酶突变体、编码基因、载体及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种酸性磷酸酶突变体及其编码基因，以及含有该基因的载体和应用。所述突变体由SEQ?ID?No.1所示氨基酸序列经点突变得到，所述点突变为：第108位突变为丝氨酸，和/或第143位突变为亮氨酸。本发明的有益效果主要体现在：本发明运用半理性设计的方法，对酸性磷酸酶（EB-AP/PTase）基因进行多轮点饱和突变，获得了酶活力提高的酸性磷酸酶突变体AP/PT-D108S和AP/PT-D108S/N143L，具有较高的实用价值和广阔的市场应用前景。
【专利说明】一种酸性磷酸酶突变体、编码基因、载体及应用
(-)【技术领域】
[0001]本发明涉及一种酸性磷酸酶突变体及其编码基因，以及含有该基因的载体和应用。
(二)【背景技术】
[0002]呈味核苷酸I+G作为新一代食品增鲜剂，由5’ -肌苷酸(5’ -1MP)和5’ -鸟苷酸(5’ -GMP)按1:1混合而成。I+G具有比谷氨酸钠(味精)更鲜美的呈味效应，也可与味精混合使用，具有相乘的协同效应，并且能够显著降低产品成本，广泛应用与食品加工领域。
[0003]I+G的呈味作用取决于其化学结构，研究发现只有核苷5’ -位碳原子上的羟基与磷酸基团发生酯化才表现出鲜味活性，而2’ -和3’ -位碳原子的羟基磷酸酯化无活性。因此，通过磷酸化反应将肌苷或鸟苷转化为呈味核苷酸，关键是如何使核苷的5’ -位磷酸酯化反应。相比化学磷酸化方法而言，利用酸性磷酸酶生物催化无机焦磷酸(PPi)的磷酸根特异地转移到核苷分子的特定位置上，该反应不需要ATP，具有反应条件温和、位置特异性强、转化率高、环境友好等特点，具有独特的优势和潜力。酸性磷酸酶催化肌苷和鸟苷磷酸化生成5’ -1MP和5’ -GMP的过程如下式所示:
[0004]
【权利要求】
1.一种酸性磷酸酶突变体，由SEQ ID N0.1所示氨基酸序列经点突变得到，所述点突变为:第108位突变为丝氨酸，和/或第143位突变为亮氨酸。
2.如权利要求1所述的酸性磷酸酶突变体，其特征在于所述酸性磷酸酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID N0.2或SEQ ID N0.3所示。
3.编码权利要求1所述酸性磷酸酶突变体的基因。
4.如权利要求3所述的基因，其特征在于所述基因序列如SEQID N0.5或SEQ ID N0.6所示。
5.含有权利要求3所述基因的重组载体。
6.权利要求3所述的基因在制备重组酸性磷酸酶突变体中的应用。
7.权利要求1所述的酸 性磷酸酶突变体在生产呈味核苷酸中的应用。
【文档编号】C12N9/16GK103555687SQ201310414756
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年9月12日 优先权日:2013年9月12日
【发明者】郑裕国, 孙丽慧, 沈爱萍, 沈寅初 申请人:浙江工业大学