用于染色的酶促方法

专利名称：用于染色的酶促方法
技术领域：
本发明涉及染色物质的方法，该方法包括用染色系统处理所述物质，该染色系统包含(a)一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物，和(b)(ⅰ)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶或(ⅱ)对所说的一种或多种芳族或杂芳族化合物表示出氧化酶活性的酶；其中所说的物质是由棉花、双乙酸酯、亚麻、亚麻布、lyocel、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、tencel或三乙酸酯制造的织物、纱线、纤维、衣服或薄膜。
背景技术：
纺织品地染色经常被认为是在纺织品和衣服的制造中最重要和最昂贵的单一步骤。在纺织业中，目前有两种主要类型的工艺用于染色，即分批染色和连续染色。在分批工艺中，使用喷嘴、滚筒，以及还原染色器等。在连续工艺中，使用轧染系统等。参见，例如I．D．Rattee、In C．M．Carr(Ed)，“纺织品工业化学”，Blackie学术和专业出版社，格拉斯哥，1995，p．276。
染料的主要种类是偶氮染料(单-，二-，三-等)，羰基染料(蒽醌和靛蓝衍生物)，花青染料，二-和三苯基甲烷和酞菁染料。所有这些染料都包含有产生颜色的发色团。有三种类型涉及氧化／还原机制的染料，即还原染料、硫化染料和偶氮染料。在这些染色中，氧化／还原步骤的目的在于使染料在可溶性形式和不溶性形式之间变化。
氧化还原酶(例如，氧化酶和过氧化物酶)是本领域熟知的。
一类氧化还原酶是漆酶(苯二醇氧氧化还原酶)，它们是包含多酮的酶，其催化酚类和相关化合物的氧化。漆酶介导的氧化作用导致从合适底物产生芳香基中间产物，这些中间产物的最终偶联给出二聚反应产物、寡聚反应产物和多聚反应产物的结合体。这些反应本质上对生物合成途径重要，它们导致黑色素、安哥斯吐那生物碱类、毒素、木质素，以及腐殖酸的形成。
另一类氧化还原酶是在过氧化氢存在下氧化化合物的过氧化物酶。
对于染发来说，发现漆酶是有用的。参见，例如PCT申请No．PCT／US95／06815和PCT／US95／06816，欧洲专利No．0504005公开了漆酶可以用于在6．5和8．0之间的pH范围对毛织物染色。
Saunders等，过氧化物酶，伦敦，1964，p．10ff公开了过氧化物酶作用于各种氨基化合物和酚化合物，导致颜色的产生。
日本专利申请出版物No．6-316874公开了对棉花进行染色的一种方法，这种方法包括用包含氧的介质处理棉花，其中氧化还原酶选自由抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶、漆酶、过氧化物酶和多酚氧化酶组成的组，这些酶用于产生氧。
WO 91／05839公开了氧化酶和过氧化物酶对抑制纺织物染料的转移是有用的。
本发明的目的是提供一种对织物进行染色的酶促方法。发明概要
本发明涉及一种使物质着色的方法，该方法包括用染色系统处理所说的物质，该染色系统包含(a)一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物，每种这样的化合物可以是可以不是被一个或多个官能团或取代基取代的，其中，每一个官能团或取代基选自由卤素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、羟基、卤羰基、氨基甲酰基、脲基、膦酸根合、膦酰基、C1-18-烷基、C1-18-链烯基、、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺酰基、由一个，二个或三个C1-18烷基基团取代的C1-18-烷基亚氨基或氨基组成的组；(b)(ⅰ)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶或(ⅱ)对所说的一种或多种芳族化合物或杂芳族化合物表现出氧化酶活性的酶；其中所说的物质是由棉花、双乙酸酯、亚麻、亚麻布、lyocel、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、tencel或三乙酸酯制造的织物、纱线、纤维、衣服或薄膜。发明详述
对于染色物质利用氧化还原酶有几个重要的优点。例如，本发明的方法中所使用的染色系统是利用廉价的有色前体。此外，在该方法中的温和条件(更低的温度和更少的时间)将导致更少的织物破坏和更低的能量消耗。
在本发明的方法中，利用一种或多种单-，二-或多环芳族合物或杂芳族化合物对物质进行染色，每种这样的化合物可以是可以不是被一个或多个官能团或取代基取代的，其中，每一个官能团或取代基选自由卤素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、羟基、卤羰基、氨基甲酰基、脲基、膦酸根合、膦酰基、C1-18-烷基、C1-18-链烯基、、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺酰基、由一个，二个或三个C1-18烷基基团取代的C1-18-烷基亚氨基或氨基组成的组。所有的C1-18-烷基、C1-18-链烯基和C1-18炔基基团可以是被任何前面的官能团或取代基单-，二-或多取代的。这些单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物的例子包括(但不限于)；吖啶、蒽、天蓝烃、苯、苯并呋喃、苯并噻唑、苯并噻唑啉、咔啉、咔唑、噌啉、苯并二氢吡喃、苯并吡喃、chrysene、富烯、呋喃、咪唑、吲唑、茚、吲哚、二氢吲哚、中氮茚、异噻唑、异喹啉、异噁唑、萘、亚萘、萘基吡啶、噁唑、苝菲、吩嗪、酞嗪，喋啶、嘌呤、吡喃、吡唑、芘、哒嗪、哒酮、吡啶、嘧啶、吡咯、喹唑啉、喹啉、喹喔啉、磺酰基、噻吩和三嗪，每种化合物可以是可以不是取代的。这些化合物的例子包括(但不限于)芳族二胺、氨基苯酚、酚类和萘酚。
用于本发明中的芳族化合物和杂芳族化合物包括(但不限于)
3，4-二乙氧基苯胺，
2-甲氧基-对-苯二胺，
1-氨基-4-b-甲氧基乙氨基苯(N-b-甲氧基乙基-对-苯二胺)，
1-氨基-4-二-(b-羟乙基)-氨基苯(N，N-二-(b-羟乙基)-对-苯二胺)，
2-甲基-1，3-二氨基-苯(2，6-二氨基甲苯)，
2，4-二氨基甲苯，
2，6-二氨基吡啶，
1-氨基-4-磺酸根合-苯，
1-N-甲基磺酸根合-4-氨基苯，
1-甲基-2-羟基-4-氨基-苯(3-氨基邻-甲酚)，
1-甲基-2-羟基-4-b-羟乙基氨基-苯(2-羟基-4-羟基乙氨基-甲苯)，
1-羟基-4-甲基氨基-苯(对-甲基氨基苯酚)，
1-甲氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯甲醚)，
1-乙氧基-2，3-二氨基-苯(2，4-二氨基苯乙醚)，
1-b-羟乙氧基-2，4-二氨基-苯(2，4-二氨基苯氧基乙醇)，
1，3-二羟基-2-甲基苯(2-甲基间苯二酚)，
1，2，4-三羟基苯，
1，2，4-三羟基-5-甲基苯(2，4，5-三羟基甲苯)，
2，3，5-三羟基甲苯，
4，8-二磺酸根合-1-萘酚，
3-磺酸根合-6-氨基-1-萘酚(J酸)，
6，8-二磺酸根合-2-萘酚，
1，4-苯二胺，
2，5-二氨基甲苯，
2-氯代-1，4-苯二胺，
2-氨基酚，
3-氨基酚，
4-氨基酚，
1，3-苯二胺，
1-萘酚，
2-萘酚，
4-氯代间苯二酚，
1，2，3-苯三醇(1，2，3-苯三酚)，
1，3-苯二醇(间苯二酚)，
1，2-苯二醇(邻苯二酚)，
2-羟基-肉桂酸，
3-羟基-肉桂酸，
4-羟基-肉桂酸，
2，3-二氨基苯甲酸，
2，4-二氨基苯甲酸，
3，4-二氨基苯甲酸，
3，5-二氨基苯甲酸，
2，3-二氨基苯甲酸甲酯，
2，3-二氨基苯甲酸乙酯，
2，3-二氨基苯甲酸异丙酯，
2，4-二氨基苯甲酸甲酯，
2，4-二氨基苯甲酸乙酯，
2，4-二氨基苯甲酸异丙酯，
3，4-二氨基苯甲酸甲酯，
3，4-二氨基苯甲酸乙酯，
3，4-二氨基苯甲酸异丙酯，
3，5-二氨基苯甲酸甲酯，
3，5-二氨基苯甲酸乙酯，
3，5-二氨基苯甲酸异丙酯，
N，N-二甲基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，
N，N-二乙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，
N，N-二丙基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，
N，N-二丁基-3，4-二氨基苯甲酸酰胺，
4-氯代-1-萘酚，
N-苯基-对-苯二胺，
3，4-二羟基苯甲醛，
吡咯，
吡咯-2-异咪唑，
1，2，3-三唑，
苯并三唑，
苯并咪唑，
咪唑，
吲哚，
1-氨基-8-羟基萘-4-磺酸(S酸)，
4，5-二羟基萘-2，7-二磺酸(铬变酸)，
邻氨基苯甲酸，
4-氨基苯甲酸(PABA)，
2-氨基-8-萘酚-6-磺酸(咖马酸)，
5-氨基-1-萘酚-3-磺酸(M酸)，
2-萘酚-3，6-二磺酸(R酸)，
1-氨基-8-萘酚-2，4-二磺酸(芝加哥酸)，
1-萘酚-4-磺酸(奈温酸)，
迫位酸，
N-苯甲酰基J酸，
N-苯基J酸，
1，7-克列氏酸，
1，6-克列氏酸，
Bon酸，
萘酚AS，
分散黑9，
萘酚AS OL，
萘酚AS PH，
萘酚AS KB，
萘酚AS BS，
萘酚AS D，
萘酚AS B1，
媒染剂黑3CI 14640(羊毛铬蓝绿B)，
4-氨基-5-羟基-2，6萘二磺酸(H酸)，
油性棕RR溶剂棕1(CI 11285)，
对苯二酚，
苯乙醇酸，
三聚氰胺，
邻-硝基苯甲醛，
1，5-二羟基萘，
2，6-二羟基萘，
2，3-二羟基萘，
苄基咪唑，
2，3-二氨基萘，
1，5-二氨基萘，
1，8-二氨基萘，
水杨酸，
3-氨基水杨酸，
4-氨基水杨酸，
5-氨基水杨酸，
甲基-3-氨基水杨酸酯，
甲基-4-氨基水杨酸酯，
甲基-5-氨基水杨酸酯，
乙基-3氨基水杨酸酯，
乙基-4-氨基水杨酸酯，
乙基-5-氨基水杨酸酯，
丙基-3-氨基水杨酸酯，
丙基-4-氨基水杨酸酯，
丙基-5-氨基水杨酸酯，
水杨酰胺，
4-氨基苯硫酚，
4-羟基苯硫酚，
苯胺，
4，4’-二氨基二苯胺硫酸酯，
4-苯基偶氮苯胺，
4-硝基苯胺，
N，N-二甲基-1，4-苯二胺，
N，N-二乙基-1，4-苯二胺，
分散橙3，
分散黄9，
分散蓝1，
N-苯基-1，2-苯二胺，
6-氨基-2-萘酚，
3-氨基-2-萘酚，
5-氨基-1-萘酚，
1，2-苯二胺，
2-氨基嘧啶，
2-氨基喹啶，
2-硝基苯胺，
3-硝基苯胺，
2-氯代苯胺，
3-氯代苯胺，
4-氯代苯胺，
4-(苯基偶氮)间苯二胺(苏丹橙G，CI 11920)，
苏丹红B，CI 26110，
苏丹红7B，CI 26050，
4’-氨基-N-乙酰苯胺，
1，2-二羟基蒽醌，
1-蒽胺(1-氨基蒽)，
1-氨基蒽醌，
蒽醌，
2，6-二羟基蒽醌，
1，5-二羟基蒽醌(蒽降酚)，
3-酰氨基吡啶(尼克酰胺)，
吡啶-3-羧酸(烟酸)，
媒染剂黄1，茜素黄GG，CI，14025，
考马斯灰，酸性黑48，CI 65005，
宫殿坚牢黑，WAN，酸性黑52，CI 15711，
宫殿铬黑，6BN，CI 15705，羊毛铬蓝黑R，
媒染剂黑11，羊毛铬黑T，
萘酚蓝黑，酸性黑1，CI 20470，
1，4-二羟基蒽醌(醌西)，
4-羟基香豆素，
繖形酮，7-羟基香豆素，
七叶亭，6，7-二羟香豆素，
香豆素，
铬变素2B酸性红176，CI 1657，
铬变素2R酸性红29，CI 16570，
铬变素FB酸性红14，CI 14720，
2，6-二羟基异尼克酸，柠嗪酸，
2，5-氯代苯胺，
2-氨基-4-氯代甲苯，
2-硝基-4-氯代甲苯，
2-甲氧基-4-硝基苯胺和，
对-溴苯酚。
用本发明的方法着色的物质是由棉花、双乙酸酯、亚麻、亚麻布、lyocel、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、tencel或三乙酸酯制造的织物、纱线、纤维、衣服或薄膜。
本发明方法所使用的染液包含所说的物质，这种染液可以具有在约0．5∶1到约200∶1，优选地在约5∶1到约20∶1范围的水／物质比率。
按照本发明方法，一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物可以是被以下物质氧化的(a)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶或(b)对一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物(例如酚类和相关底物)表现出氧化酶活性的酶。表现出过氧化物酶活性的酶包括(但不限于)过氧化物酶(EC 1．11．1．7)和卤代过氧化物酶，例如氯代-(EC 1．11．1．10)，溴代-(EC1．1 1．1)和碘代过氧化物酶(EC 1. 11．1．8)。表现出氧化酶活性的酶包括(但不限于)胆红素氧化酶(EC 1．3 3．5)，儿茶酚氧化酶(EC 1．10．3．1)，漆酶(EC 1．10．3．2)，邻-氨基苯酚氧化酶(EC 1．10．3．4)和多酚氧化酶(EC 1．10．3．2)。用于测定这些酶活性的分析方法是本领域技术人员熟知的。
优选地，这种酶是从选自下组的微生物获得的漆酶曲霉属、葡萄孢属、金钱霉属、香菇属、毁丝霉属、链孢霉属、灰侧菌属、束柄霉属、多孔菌属、Scytalidium、栓菌属以及丝核菌属。在更优选的实施方案中，这种漆酶是从选自下组的微生物获得的Humicola brevis var． thermoidea，Humicola brevispora，灰腐质霉thermoidea变种，Humicola insolens和Humicola lanuginosa(也称为Thermomyces lanuginosus)，Myceliophthorathermophila， Myceliophthora vellerea，Polyporus pinsitus，Scytalidiumthermophila， Scytalidium indonesiacum和嗜热色串孢。该漆酶也可以从蛾柱霉属的其他物种获得，例如Scytalidium acidophilum，Scytalidium album，Scytalidium aurantiacum，Scytalidium circinatum，Scytalidiumflaveobrunneum，Scytalidium hyalinum，Scytalidium lignicola和Scytalidium uredinicolum。该漆酶也可以从多孔菌属的其他物种获得，例如环纹多孔菌，Polyporus alveolaris，Polyporus arcularius，Polyporusaustraliensis，Polyporus badius，二形多孔菌，冬生多孔菌，Polyporusciliatus，Polyporus colensoi，Polyporus eucalyptorum，Polyporusmeridionalis，黑柄多孔菌，Polyporus palustris，喜根多孔菌，Polyporusrugulosus，鳞多孔菌，茎形多孔菌和Polyporus tumulosus。该漆酶也可以从丝核菌属的物种获得，例如茄属丝核菌。这种漆酶也可以是在I型(T1)铜位点上被至少一个氨基酸残基修饰的修饰漆酶，其中这种修饰的氧化酶具有相对于野生型氧化酶的改变的pH和／或比活性。例如，修饰漆酶能够在T1铜位点的片段(a)上被修饰。
可以用于本发明的过氧化物酶可以从植物中分离出来并且可由植物产生(例如辣根过氧化物酶)或从微生物(如真菌或细菌)中分离出来并且可由微生物产生。一些优选的真菌包括属于半知菌亚门丝孢纲的菌株，例如镰刀菌属、腐质霉属、木霉属、漆斑菌属、轮枝孢属、Arthromyces、卡尔黑霉属、Ulocladium、Embellisia、枝孢属或Dreschletra，特别是尖镰孢(DSM 2672)、Humicola insolens、黑氏木霉、疣孢漆斑菌(IFO 6113)、棉黄萎轮枝孢、大丽花轮枝孢、Arthromyces ramosus(FERM P-7754)，烟色卡尔黑霉、Ulocladium chartarum、Embellisia alli或Dreschlerahalodes。
其它优选的真菌包括属于担子菌亚门，担子菌纲的菌株，例如鬼伞属、展齿革菌属、革盖菌属或栓蓖属、特别是灰盖鬼伞f.microsporus(IFO 8371)、长根鬼伞，Phanerochaete chrysosporium(如NA-12)或杂色革盖菌(如PR428-A)。
更优选的真菌包括属于接合菌亚门，圆孔腔菌科的菌株，例如，根霉属或毛霉属，特别是冻土毛霉。
一些优选的细菌包括属于放线菌目的菌株，例如嗜热紫链霉菌(IFO12382)，浑球链霉菌(ATCC 23965)或Streptoverticillum Verticilliumssp．verticillium。
其它优选的细菌包括短小芽孢杆菌(ATCC 12905)，嗜热脂肪芽孢杆菌，球形红细菌，Rhodomonas palustri，乳链球菌，Pseudomonaspurrocinia(ATCC 15958)或荧光假单胞菌(NRRL B-11)。B．C. Saunders等，同上pp．41-43中列出了过氧化物酶其它潜在的来源。
文献中描述了按照本发明所使用的酶的生产方法。例如，FEBS通信，1625，173(1)，应用环境微生物学，1985年2月，pp．273-278，应用微生物生物技术26，1987，pp．158-163，生物技术通信9(5)，1987，pp．357-360，自然326，1987年4月2日，FEBS通信4270，209(2)，p．321，EP 179 486，EP200 565，GB 2 167 421，EP 171 074和农业生物化学50(1)，1986，p．247。
特别优选的酶是那些pH在约2．5到约12．0范围内有活性的酶，优选的是在约4到约10范围内，最优选的是在约4．0到约7．0范围内和约7．0到约10．0范围内。可以通过筛选嗜碱微生物产生的相关的酶来分离这种酶，例如，使用在R．E．Childs和W．G．Bardsley，生物化学杂志，145，1975，pp．93-103中描述的ABTS测定法。
其它优选的酶是那些表现出良好的热稳定性以及对通常所使用的染色添加剂(如非离子、阳离子或阴离子表面活性剂、螯合剂、盐、聚合物等)良好的稳定性的酶。
所说酶也可以经以下方法产生，该方法包括在使得这种酶可以表达的条件下，在培养基中培养用重组DNA载体转化过的宿主细胞，并从培养液中回收所说的酶，其中所说的载体携带有编码所说的酶的DNA序列以及编码使得编码该酶的DNA序列可以表达的功能的DNA序列。
例如编码所说的酶的DNA片段可以通过建立产生这种兴趣酶的微生物(如前面提到的一种微生物)的cDNA或基因组文库和通过常规方法(如与以这种酶的整个或部分氨基酸序列为基础合成的寡核苷酸探针杂交或选择表达合适的酶活性的克隆或选择产生与天然酶的抗体反应性的蛋白质的克隆)筛选阳性克隆来分离。
一旦被选择，就可以将DNA序列插入到包含恰当的启动子、操纵子和终止子序列(允许酶在特定的宿主生物中表达)以及复制起点(能使载体在正被讨论的宿主微生物中复制)的合适的可复制的表达载体中。
然后，将所形成的表达载体转化到合适的宿主细胞，例如真菌细胞中，优选的例子是曲霉属的菌种，最优选的是米曲霉或黑曲霉。通过牵涉到原生质体形成和转化的过程，接着是细胞壁再生用已知的方法转化真菌细胞。曲霉属作为宿主微生物的应用在EP 238 023(Novo Industri A／S的)中已经描述过，本文一并参考。
另外，宿主生物体可以是细菌，特别是链霉菌属，芽孢杆菌属或大肠杆菌的菌株。通过常规方法可以完成细菌细胞的转化，例如通过在T．Maniatis等，分子克隆实验室手册、冷泉港，1982所描述的方法。
通过标准方法(参见T．Maniatis等，同上)也可以进行合适DNA序列的筛选和载体的构建。
培养转化的宿主细胞的培养基可以是适合于正被讨论的宿主细胞生长的任何常规培养基。所表达的酶可以方便地分泌到培养基中，并且可以用众所周知的方法从中回收，这一方法包括用离心法或过滤法从培养基中分离出细胞，借助盐(如硫酸铵)沉淀出蛋白质组分；接着采用色谱方法(如采用离子交换色谱法，亲合色谱法或类似的方法)回收这种酶。
当本发明所采用的酶是过氧化物酶时，必须使用过氧化氢源，如过氧化氢本身。过氧化氢源在方法的开始或中间可以以0．001-5mM的量添加，特别是以0．01-1mM的量添加。
一种过氧化氢源包括过氧化氢的前体，例如过硼酸盐或过碳酸盐。另一种过氧化氢源包括能够使分子氧和有机或无机底物分别转化成过氧化氢和氧化底物的酶。这些酶仅仅产生低水平的过氧化氢，但是由于过氧化物酶的存在确保了产生的过氧化氢的有效利用，因而这些酶在本发明方法中发挥了很大的作用。能够产生过氧化氢的酶的例子包括(但不限于)葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、半乳糖氧化酶、醇氧化酶、胺氧化酶、氨基酸氧化酶和胆固醇氧化酶、
在本发明方法中，所使用的温度范围是约5到约120℃，优选的范围是约5到约80℃，更优选的范围是约15到约70℃；pH范围是约2．5到约12，优选的是在约4到约10之间，更优选的范围是约4．0到约7．0或约7．0到约10．0。优选地，分别使用邻近酶的最适温度和最适pH的温度和pH。
本发明方法所使用的染色系统还包含一价或二价离子，聚合物和表面活性剂(10mg-5g／l)，这些离子包括(但不限于)钠、钾、钙和镁离子(0-3M，优选地为25mM-1M)，这些聚合物包括(但不限于)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚天冬氨酸酯、聚乙烯酰胺、聚环氧乙烷(0-50g／l，优选地为1-500mg／l)。
这些表面活性剂的例子是如羧酸盐之类的阴离子表面活性剂，例如长链脂肪酸的金属羧酸盐；N-酰基肌氨酸盐；磷酸与脂肪族醇乙氧基化物的单酯或二酯或这些酯的盐；如十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠或十六烷基硫酸钠的脂肪族醇硫酸盐；乙氧基化的脂肪族醇硫酸盐；乙氧基化的烷基酚硫酸盐；木素磺酸盐；石油磺酸盐；如烷基苯磺酸盐或低级烷基萘磺酸盐(如丁基-萘磺酸盐)的烷基芳基磺酸盐；盐或磺酸化萘-甲醛缩合物；磺酸化的酚-甲醛缩合物的盐；或如酰胺磺酸盐的更复杂的磺酸盐(例如油酸和N-甲基牛磺酸的磺酸化缩合产物或二烷基磺基琥珀酸酯(例如，磺酸钠，或二辛基琥珀酸酯))。这些表面活性剂的其他例子是如脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪酸酰胺或脂族烷基-或链烯基取代酚类与环氧乙烷的缩合产物，环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物，炔属二醇类(如2，4，7，9-四乙基-5-癸炔-4，7-二醇)，或乙氧基炔属二醇类的非离子表面活性剂。这样的表面活性剂的其他例子是如脂肪族单-，双-或多胺(如乙酸酯、环烷酸酯或油酸酯)，含氧胺类(如聚氧乙烯烷基胺的胺氧化物)，通过羧酸与二或多胺的缩合制备的连接酰胺的胺类，或季铵盐之类的阳离子表面活性剂。
在优选的实施方案中，首先将物质浸泡在水溶液中，这种水溶液包含一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物；然后，用酶处理所浸泡的物质。
在另一优选实施方案中，染色系统还包含提高表现出过氧化物酶活性的酶的活性或表现出氧化酶活性的酶的活性的增强剂。增强剂是本领域已知的。例如，已知在WO 95／01426中公开的有机化合物可增强漆酶的活性。此外，已知在WO94／12619和WO94／12621中公开的化合物可增强过氧化物酶的活性。
下列非限制性实施例进一步说明本发明。实施例实施例1
漆酶活性的测定
在有氧条件下氧化丁香醛连氮来测定漆酶活性。用分光光度法在530nm处测量生成的紫罗兰色。分析条件是19μM丁香醛连氮，23．2mM乙酸盐缓冲液(pH5．5)，30℃，以及1分钟反应时间。一个漆酶单位(LACU)是指在上述条件下每分钟催化1微摩尔丁香醛连氮的转化所需要的漆酶的量。过氧化物酶活性的测定
一个过氧化物酶单位(POXU)指在下列分析条件下每分钟催化1微摩尔过氧化氢的转化所需要的酶量0．88mM过氧化氢，1．67mM 2．2’-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸酯)，0．1M磷酸盐缓冲液(包含Triton X405(1．5g／1000ml))，pH7．0，30℃下温育，在418nm处测定光度值(ABTS的消光系数设定在3．61／mmol*mm)。
织物的染色
将5mg第一种化合物(对-苯二胺(“A”)，对-甲苯二胺(“B”)，或邻-氨基苯酚(“C”))和5mg第二种化合物(间-苯二胺(“D”)，α-萘酚(“E”)或4-氯代间苯二酚(“F”)(或10mg实验中的第一种化合物而没有第二种化合物)溶解在10ml 0． 1M K2HPO4缓冲溶液(pH 7．0)中。将具有71．7 LACU／ml活性的Polyporus pinsitus漆酶(“PpL)(保藏在真菌菌种保藏中心，保藏号为CBS678．70)或具有690 LACU／ml活性的Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)(保藏在真菌菌种保藏中心，保藏号为CBS 117．65)用同样的缓冲液稀释成10 LACU／ml活性。
将从Test Fabrics Inc．(Middlesex，新泽西)得到的多纤维布样样式10A(4×10cm)卷起放到试管中。这种布样包含由棉花，双乙酸酯、聚丙烯酸、聚酰胺和聚酯制造的不同纤维的条。将4．5ml前体／成色剂溶液和1ml漆酶溶液添加到所说的试管中。将试管封住、混合并且安装在试管摇动器上，在黑暗的柜橱中温育60分钟。在温育之后，将布样在连续的热自来水中冲洗约30秒。
下列表中提供了本实验的结果表1
表2
表3
本实验结果表明在前体和Polyporus pinsitus漆酶存在下双乙酸酯和聚酰胺被染成深色，而聚丙烯酸、聚酯和棉花被染成浅色。以Myceliophthora thermophila漆酶获得类似的结果。实施例2
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH 4-10范围内30℃下对各种物质染色1小时。所染的物质(都是从Test Fabrics Inc．获得的)是双乙酸酯(样式122，5cm×5cm)，尼龙6(样式322，5cm×5cm)，尼龙6．6(样式361，5cm×5cm)，三乙酸酯(样式116，5cm×5cm)，棉花(样式400，5cm×5cm)以及府绸(样式400M，5cm×5cm)。
通过混合溶液A(0．1M H3PO4，0．1M CH3COOH，0．1M H3BO3)和溶液B(0．5M NaOH)在合适的pH下制备0．1M的Britten-Robinson缓冲溶液。为了制得pH分别为4，5，6，7，8，9和10的缓冲溶液，将806ml，742ml，706ml，656ml，624mll596ml和562ml的溶液A用溶液B稀释到1升。
以0．5mg／ml的量将选自对-苯二胺，邻-氨基苯酚和间-苯二胺的化合物添加到75ml每种缓冲溶液中。如果必要的话，检测和调整pH。将75ml缓冲液／化合物溶液混合成各150ml的缓冲液／化合物混合溶液，并将这种混合溶液添加到LOM烧杯中。
然后，将所说物质的布样浸泡在每种缓冲液／化合物混合溶液中。接下来抽取相应于将要添加的漆酶的体积的体积。将具有690LACU／ml活性的Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)用缓冲溶液稀释成300LACU／ml活性。在每种pH(除pH7．0以外)的溶液中添加2 LACU／ml的酶。供定量给料分布之用，在pH7．0下，向溶液中添加0，1，2，4 LACU／ml的酶。然后将LOM烧杯安装在LOM中。在30℃，42 RPM下1小时后，停止LOM。倒掉液体，同时在烧杯中用连续去离子水冲洗布样约15分钟。干燥布样，利用ColorEye 7000仪器测量CIELAB值。在表4-7中给出了CIELAB结果。
表4用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色(pH-分布，2LACU／ml) pH 4pH 5pH 6 pH 7 pH 8 pH 9pH 10棉花L*31．35 23．99 27．99 34．02 64．16 74．9 42．45a*10．96 5．95 6．89 6．14 2．011．27 4．7b*4．95 7．53 7．01 1．44 -8．62 -6 -5．65府绸L*29．02 29．11 28．1 35．15 64．63 71．1 44．21a*13．41 12．88 6．64 5．97 1．550．93．96b*8．03 7．56 7．24 0．55 -7．03 -6．84 -3．11双乙酸酯L*39．45 32．05 28．24 25．5 31．02 45．58 22．96a*2．52 2．36 2．52 3．38 5．274．45 4．06b*-3．07 -3．82 -7．91 -11．1 -14．43 -6．53 -10．58尼龙6 L*55．93 48．58 45．77 36．2 35．742．49 32．29a*2．94 2．3 -0．71 -1．55 1．7 0．47 1．15b*0．31 1．8 -5．06 -18．65 -28．18 -28．81 -25．11尼龙6．6L*47．11 39．61 35．12 27．92 32．79 39．75 26．46a*3．11 2．65 0．32 -0．58 1．820．59 1．3b*0．89 2．36 -3．73 -15．04 -26．17 -25．78 -21．27三乙酸酯L*64．17 53．17 52．87 53．91 67．24 72．57 59．08a*4．45．55 5．26 4．84 3．252．48 3．95b*0．73 2．92．5 -0．7 -6．55 -2．25 -6．68
表5用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色(剂量分布-pH7) 0 LACU1 LACU4 LACU棉花 L*78．6536．7232．73 a*1．45 6．24 6．38 b*1．49 0．48 2．24府绸 L*77．7437．3434．15 a*1．36 5．89 6．58 b*1．79-0．65 1．6双乙酸酯 L*57．3226．2124．78 a*2．07 3．62 3．24 b*-1．85 -12．44 -10．1尼龙6 L*66．2736．5535．59 a*0．92-1．18-1．66 b*-4．69 -20．74 -16．68尼龙6．6 L*61．3728．9327．02 a*1．4 -0．52-0．63 b*-4．07 -16．68 -13．26三乙酸酯 L*75．6856．0151．16 a*1．87 4．65 4．85 b*3-2．54-1．49
表6用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色(pH-分布，2LACU／ml) pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8pH 9pH 10棉花 L* 21．6 26．83 36．75 44．64 49．53 79．174．84 a* 2．56 2．853．85 4．22 3．76 4．087．45 b* 5．33 6．8911．37 13．34 8．74 19．56 25．31府绸 L* 27．8927．22 11．1 45．18 53．4 79．475．27 a* 2．17 2．692．1 4．02 4．77 3．697．56 b* 4．79 6．928．64 13．38 1．97 19．22 25．27双乙酸酯 L* 35．6 33．59 36．47 37．78 45．78 62．957．42 a* 3．6 4．128．47 10．47 10．11 6．597．06 b* 10．3613．65 22．21 27．16 32．99 37．21 37．8尼龙6 L* 43．4244．93 47．57 47．52 52．25 64．09 60．9 a* 2．84 3．688．01 9．8 8．4 10．099．29 b* 8．51 12．3222．52 25．94 27．31 34．18 32．24尼龙6．6 L* 36．7734．57 36．26 37 43．69 55．952．68 a* 3．08 3．717．63 11．22 12．38 16．31 17．05 b* 9．43 11．3519．14 23．86 29．68 37．83 37．52三乙酸酯 L* 39．0240．38 48．7 51．8 59．23 68．95 69．74 a* 3．1 3．564．8 5 3．96 7．155．73 b* 7. 92 9. 83 18. 94 24. 89 27. 7 40. 7337. 62
表7用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色(剂量分布-pH7)0 LACU 1 LACU4 LACU棉花 L*86．7946．5844．66 a*0. 08 3．91 4．12 b*10．0513．1212．31府绸 L*86. 2549. 9149. 32 a*0. 16 2. 86 3. 08 b*8．2210．94 7．18双乙酸酯 L*76. 3340．4637．43 a*1．76 9．8 11．78 b*21．9928．0827．66尼龙6 L*82．6 49. 9146．77 a*0．3110．07 9．56 b*14．7227．4825．13尼龙6．6 L*77. 4 38. 8737．5 a*2．4211．8312．44 b*18. 4 25．8824．88三乙酸酯 L*77. 0254．5 49．23 a*3．54 5．35 5．19 b*19．6228．2323．54
这些表中所用的参数“L”、“a”和“b”用来量化颜色，并且为颜色科学领域中的普通技术人员所熟知。参见例如，Billmeyer和Saltzman，颜色技术原理，第二版，John Wiley和Sons，纽约，1981，p．59。
结果表明，棉花和府绸在低pH下由两种化合物混合液染色，在pH低于6下观察到深色。双乙酸酯在所有pH下由对-苯二胺和间-苯二胺的混合液染色，得到的颜色范围从低pH下的灰色到高pH下的海蓝色，而由邻-氨基苯酚和间-苯二胺的混合液染色，得到的颜色范围从红棕色到橙／黄色。尼龙6在所有pH下由对-苯二胺和间-苯二胺的混合液染色，在pH大于6时为深蓝色，在pH较低时为灰色。邻-氨基苯酚和间-苯二胺的混合液在pH大于6时给出米色，在pH较低时给出灰色。尼龙6．6大体上以与尼龙6相同的方式染色，然而在所有pH下却显现出更深的颜色。通过对-苯二胺和间-苯二胺的混合液，三乙酸酯染色不明显，但是，以邻-氨基苯酚和间-苯二胺的混合液，在较低的pH下形成从稍微棕色到来色的显色。
在所有的定量给料实验中，没有从定量给料1，2或4 LACU／ml中看到显著的区别。0 LACU／ml的对照实验清楚地表明了这种漆酶催化染色过程。实施例3
除了本实验仅仅在pH 5．0和8．0下时间间隔为0，5，15，35和55分钟外，使用实施例2所描述的方法测定供染色的时间分布。在每个实验中，添加2LACU／ml Myceliophthora thermophila漆酶。表8-11显示了实验结果。
表8用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色时间分布，2LACU／ml，pH5 0 min 5 min 15 min 35 min 55 min棉花 L* 54．68 32．54 36．94 27．88 28．91 a* 2．16 2．79 2．84 2．75 2．69 b* 8．26 7．93 8．67 7．06 7．23府绸 L* 79．56 56．58 41．97 29．12 27．36 a* 1．97 7．72 12．06 12．77 11．15 b* 0．62 10．2 11．02 10．65 9．4双乙酸酯 L* 78．96 50．08 38．79 30．89 30．77 a* 0．1 1．06 1．62 1．87 1．96 b* 1．69 -6．35 -5．22 -3．71 -3．81尼龙6 L* 86．15 73．4 59．07 48．45 47．61 2* -0．54 -0．07 0．79 2．96 3．04 b* 1．96 0．5 1．98 4．32 3．89尼龙6．6 L* 84．26 67．05 52．34 41．07 39．38 a* -1．12 0．19 1．23 3．16 3．21 b* 0．54 0．49 3．51 4．96 4．14三乙酸酯 L* 86．27 80．68 69．35 54．88 52．79 a* 0．99 1．83 3．28 5．61 5．49 b* 3. 46 4. 99 2. 05 4. 8 5. 07
表9用前体对-苯二胺和间-苯二胺染色时间分布，2LACU／ml，pH8 0 min5 min 15 min 35 min 55 min棉花 L* 79．54 57．3748 46．03 44．07 a* 0．392．573．53 4．18 4．57 b* -3．66 -6．57 -6．25 -3．98 -3．18府绸 L* 77．462．14 52．8 49．77 48．64 a* 0．432．853．68 4．68 4．79 b* -0．96 -4．164．04 -2．29 0．01双乙酸酯 L* 72．72 31．72 24．53 22．6 22．91 a* -0．244．654．71 4．29 3．6 b* -8．41 -19．15 -14．73 -11．97 -12．11尼龙6 L* 64．65 53．49 39．32 37．64 33．14 a* -3．28 -2．23 -0．58 -0．35 0．06 b* -16．61 -20．1 -23．66 -23．99 -23．75尼龙6．6 L* 61．83 43．78 33．61 29．96 27．21 a* -2．03 -0．890．05 0．25 0．35 b* -17．12 -21．06 -21．5 -20．87 -20．5三乙酸酯 L* 83．59 70．82 66．6 66．43 65．41 a* 0．931．581．61．99 2．88 b* 3．54 -1．66 -0．64 -1．17 -0．01
表10用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色时间分布，2LACU／ml，pH5 0 min 5 min 15 min 35 min 55 min棉花 L* 74．17 55．46 38．63 25．68 23．63 a* 2．1 7．02 14．76 6．58 5．39 b* 0．3 7．23 11．76 8．67 7．71府绸 L* 86．46 60．02 40．5 34．54 34．19 a* 0．91 0．89 1．43 1．19 1．56 b* 6．9 6．56 6．5 4．46 5．15双乙酸酯 L* 80．72 51．54 36．25 33．63 34．33 a* 1．21 6．27 6．56 5．76 4．83 b* 12．63 21．98 18．26 16．13 14．76尼龙6 L* 85．97 61．61 47．63 44．22 46．02 a* 0．13 5．08 5．61 4．71 4．52 b* 8．21 15．36 13．92 13．06 13．89尼龙6．6 L* 82．27 55．28 39．06 35．9 36．73 a* 1．34 5．72 5．97 4．91 4．29 b* 11．84 17．23 14．3 13．13 12．9三乙酸酯 L* 89．33 69．67 50．12 42．38 42．98 a* 0．35 2．18 5．05 4．26 3．8 b* 6．37 13．43 12．88 11．24 10．17
表11用前体邻-氨基苯酚和间-苯二胺染色时间分布，2LACU／ml，pH8 0 min5 min 15 min 35 min 55 min棉花 L* 87．77 75．41 61．59 49．57 48．57 a* -0．44 6．25．51 4．264．08 b* 13．54 26．92 15．47 9．838．31府绸 L* 88 78．8 61．48 50．78 50．5 a* -0．44．09 6．72 5．074．95 b* 11．59 22．84 15．18 5．372．55双乙酸酯 L* 84．64 69．78 51．84 46．03 42．15 a* 0．24 4．78 11．54 11．14 11．87 b* 14．06 38．86 39．15 34．67 32．58尼龙6 L* 82．81 69．06 56．09 50．38 50．5 a* 0．08 6．61 10．18 7．067．72 b* 16．44 29．39 27．89 23．35 26．07尼龙6．6 L* 81．49 61．73 49．21 42．34 41．72 a* 1．22 11．92 14．82 11．75 11．52 b* 16. 5 33．84 31．26 26．59 27．05三乙酸酯 L* 84．73 79．49 68．57 60．03 60．89 a* 1．88 2．45 4．87 3．984．12 b* 13．78 21．92 26．33 23．41 24．59
结果显示大多数颜色在头15分钟内形成。棉花和府绸用两种化合物的混合液在pH5下被染色，在35分钟后被染上深色。双乙酸酯在两种pH下被染色，大部分颜色在15分钟以后形成。尼龙6和尼龙6．6在两种pH下被染色，大部分颜色在15分钟以后形成。然而，尼龙6．6显出更深一点的颜色。三乙酸酯通过对-苯二胺和间-苯二胺的混合液在任何pH下都未被染色，但是通过邻-氨基苯酚和间-苯二胺的混合液形成一定的颜色。实施例4
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中pH5．5下于30℃染色1小时，所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是棉花(样式400，8cm×8cm)，双乙酸酯(样式122，5cm×6cm)，尼龙6．6(样式361，6cm×6cm)和尼龙6(样式322，6cm×6cm)。
以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合物(L-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml总体积。一个烧杯添加100ml“A”，另一个烧杯添加50ml“A”和50ml“B”混合形成100ml。将上文列出的物质的布样用DI水浸湿并在前体溶液中浸透。具有690LACU／mg(80LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)以12．5mg／l的浓度添加到每个烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃，42RPM下1小时后，停止LOM。倒掉废液并且将布样在冷自来水下冲洗约15分钟。在室温下干燥布样，使用MacbethColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表12和表13给出
表12-用前体对-苯二胺染色
表13-用前体p-苯胺和1-萘酚染色
结果显示使用前体和Myceliophthora thermophila漆酶可以对不同类型的纤维进行染色(用A表示棕色，而用A／B表示紫色)。实施例5
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃染色1小时，所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是棉花(样式400，8cm×8cm)，双乙酸酯(样式122，5cm×6cm)，尼龙6(样式322，6cm×6cm)和尼龙6．6(样式361，6cm × 6cm)。
以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿并在前体溶液中浸透。将具有70 LACU／ml(100LACU／mg)活性的Polyporus pinstus漆酶(“PpL”)以12．5mg／l的浓度添加到每个烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃，42RPM下1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。其结果在表14和表15中给出。
表14-用前体对-苯二胺染色
表15-用前体对-苯二胺和1-萘酚染色
结果显示使用前体和Polyporus Pinsitus漆酶可以对不同类型的纤维进行染色(用A表示棕色，而用A／B表示紫色)。实施例6
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃对物质染色1小时，所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是棉花(样式400，8cm×8cm)，双乙酸酯(样式122，5cm×6cm)，尼龙6．6(样式361，6cm×6cm)和尼龙6(样式322，6cm×6cm)。
以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿再在前体溶液中浸透。将具有0．04LACU／mg(1mg／ml)活性的Myrothecium verrucaria胆红素氧化酶(“BiO”)以12．5mg／l的浓度添加到每只烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃，42RPM下经过1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用MacbethColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表16和表17中给出。
表16-用前体对-苯二胺染色
表17-用前体对-苯于胺和1-萘酚染色
结果表明使用前体和胆红素氧化酶可以对各种物质进行染色(用A表示棕色，而用A／B表示紫色)。实施例7
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于30℃对物质染色1小时，所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是棉花(样式400，8cm×8cm)，双乙酸酯(样式122，5cm×6cm)，尼龙6．6(样式361，6cm×6cm)和尼龙6(样式322，6cm×6cm)。
以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿再在前体溶液中浸透。将具有5．2 LACU／mg(2mg／ml)活性的立枯丝核菌漆酶(“RsL”)以12．5mg／l的浓度添加到每只烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃，42RPM下经过1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表18和表19中给出。
表18-用前体对-苯二胺染色
表19-用前体对-苯二胺和1-萘酚染色
结果显示使用前体和立枯丝核菌漆酶可以对不同纤维类型进行染色(用A表示棕色，而用A／B表示紫色)。实施例8
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下于60℃进行染色，所染的物质(从Test Fabric Inc．得到)是棉花(样式400，8cm×8cm)。
以合适量的2g／L CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备0．25mg／ml的第一种化合物(对-苯胺，“A”)溶液和0．25mg／ml的第二种化合物(2-氨基苯酚，“B”)溶液。每个LOM烧杯使用100ml的总体积。一个LOM烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。将上文列出的物质的布样在DI中浸湿，再在前体溶液中浸透。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在LOM(42RPM)中温育10分钟后，停止LOM并且将具有690LACU／ml(80LACU／mg)活性的Myceliophthora thermophila漆酶(“MtL”)以1LACU／ml的浓度添加到这只烧杯中。在60℃，42 RPM下20分钟后，停止LOM并撤除样品。将前体溶液，布样和酶添加到LOM烧杯中，制得两个没有经过预温育的对照。将这两只烧杯安装在LOM中。在60℃，42RPM下15分钟后，撤除一个烧杯。另一个对照在60℃，42RPM下经过总计30分钟后撤除。倒掉废液，并将样品和布样在冷自来水下冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表20-22中给出。
表20-用前体A和B对照染色，0分钟／15分钟
表21-用前体A和B对照染色，0分钟／30分钟
表22-用前体A和B对照染色，10分钟／20分钟
利用美国纺织化学家和着色师协会(AATCC)测试方法61-1989，2A估计这些布样对清洗的耐色牢度(耐洗牢度)。将洗涤槽-O-计量器预热到49℃，同时将200ml 0．2％AATCC标准参考去污剂WOB(不含光学增白剂)和50个钢球放置到每个LOM烧杯中。将这些烧杯密封并安装在LOM中，在42RPM下运行2分钟预热这些烧杯至试验温度。停止旋转并松开烧杯。将布样添加到烧杯中，LOM运行45分钟。撤走烧杯，并且将布样在热自来水中在偶然挤榨下冲洗5分钟。然后在室温下干燥并用Macbeth ColorEye7000评估这些布样。利用AATCC评估法1(色变的灰度)指定每种布样的灰度等级(1-5)。结果在表23-25中给出。
表23-对A和B的耐洗牢度结果，0分钟／15分钟
表24-对A和B的耐洗牢度结果，0分钟／30分钟
表25-对A和B的耐洗牢度结果，0分钟／20分钟
结果显示，利用前体和Myceliophthora thermophila(MtL)漆酶，棉花能够染上色。从L＊和灰度分级二者都可以明显地看出，添加酶前在前体溶液中温育这些布样可以提高颜色强度和耐洗牢度。实施例9
将棉花在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5下，于40℃染色1小时。所染的物质(从Test Fabrics Inc．获得)是棉花(样式400，8cm×8cm)。
在这个实验中评估两个介体，将每个溶解在缓冲液中。三种缓冲溶液是2g／L CH3COONa，pH5．5缓冲液(“1”)，2g／L CH3COONa，pH5．5，包含100μM 10-丙酸-吩噻嗪(PPT)(“2”)的缓冲液(“2”)，2g／L CH3COONa，pH5．5，包含100μM丁香酸甲酯的缓冲液(“3”)。
将所说的化合物溶解在合适量的缓冲液(1，2或3)中来制备三种0．25mg／ml的化合物(对-苯二胺)溶液。每个LOM烧杯使用120ml的总体积。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿，再在前体溶液中浸透。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在40℃，于42RPM下经过10分钟后停止LOM。将具有690 LACU／ml(80 LACU／mg)活性的Myceliophthorathermophila漆酶(“MtL”)以0．174LACU／ml活性添加到每只烧杯中。再次将烧杯密封并安装在LOM中。在40℃，42RPM下运行50分钟。撤走烧杯，倒掉废液并且将这些布样在冷自来水中冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macobeth ColorEye 7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表26-28中给出。
表26-用前体A染色
(2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL)
表27-用前体A染色(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL)
表28-用前体A染色(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL)
利用美国纺织化学家和着色师协会(AATCC)测试方法61-1989，2A估计这些布样对清洗的耐色牢度(耐洗牢度)。将洗涤槽-O-计量器预热到49℃，将200ml 0．2％AATCC标准参考去污剂WOB(不含光学增白剂)和50个钢球放置到每个LOM烧杯中。将这些烧杯密封并安装在LOM中，在42RPM下运行2分钟预热这些烧杯至试验温度。停止旋转并松开烧杯。将布样添加到烧杯中使LOM运行45分钟。撤走烧杯并且将布样在热自来水中在偶然挤榨下冲洗5分钟。然后在室温下干燥，并用Macbeth ColorEye7000评估这些布样。利用AATCC评估方法1(色变的灰度)指定每种布样的灰度等级(1-5)。结果在表29-31中给出。
表29-对前体A的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL)
表30-对前体A的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL)
表31对前体A的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL)
重复同样的实验，只是使用第二种化合物(2-氨基苯酚，“B”)和第三种化合物(间-苯二胺，“C”)。使用的温度为70℃。结果在表32-37中给出。
表32-用前体B和C染色
(2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL)
表33-用前体B和C染色(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL)
表34-用前体B和C染色(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL)表35-对前体B和C的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，MtL)
表36-对前体B和C的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM PPT，MtL)
表37-对前体B和C的耐洗牢度结果(2g／L CH3COONa，pH5．5，100μM丁香酸甲酯，MtL)
这两组实验结果表明，介体可以被用于染色和获得提高的耐洗牢度。在两组实验中，棉花在CH3COONa缓冲液，包含有PPT的CH3COONa缓冲液以及包含有丁香酸甲酯的CH3COONa缓冲液中pH5．5下都被染上色。可是，介体仅仅在第一组实验中导致提高耐洗牢度。实施例10
在阿托拉斯洗涤槽-O-计量器(“LOM”)中，在pH5．5，30℃下对物质染色1小时。所染的物质(都是从Test Fabrics，Inc．获得的)是棉花(样式400，6cm×6cm)，双乙酸酯(样式122，5cm×5cm)，尼龙6．6(样式361，6cm×6cm)，尼龙6(样式322，6cm×6cm)。
以合适量的0．1M CH3COONa缓冲液(pH5．5)溶解所说的化合物来制备0．5mg／ml的第一种化合物(对-苯二胺，“A”)溶液和0．5mg／ml的第二种化合物(1-萘酚，“B”)溶液。每只LOM烧杯使用100ml的总体积。一个烧杯中添加100ml“A”，另一个烧杯中添加50ml“A”和50ml“B”，混合形成100ml。将上文列出的物质的布样在DI水中浸湿再在前体溶液中浸透。将具有180，000POXU／ml活性的灰盖鬼伞过氧化物酶(“CiP”)以0．05POXU／ml的浓度添加到每只烧杯中。将LOM烧杯密封并安装在LOM中。在30℃，42 RPM下经过1小时后停止LOM。倒掉废液，并且将布样在冷自来水中冲洗约15分钟。室温下干燥布样，使用Macbeth ColorEye7000测定所有布样的CIELAB值。结果在表38-41中给出。
表38-用前体A染色，200μM H2O2
表39-用前体A染色，500μM H2O2
表40-用前体A和B染色，200μM H2O2
表41-用前体A和B染色，500μM H2O2
结果显示使用前体，过氧化物和灰盖鬼伞过氧化物酶(CiP)可以对不同纤维类型进行染色(用A和A／B表示紫色)。实施例11
在0．1M磷酸钠缓冲液(pH5．5)中溶解5mg／ml对苯二胺和添加2．5％阿拉伯树胶制得印花糊状物。这种印花糊状物利用印花筛框和刮板人工转移到尼龙织物上。将被印花的织物部分用遮盖物覆盖起来。
然后，将织物在蒸汽室中汽蒸10分钟并且使其干燥。
将织物浸入2 LACU／ml漆酶溶液中，温育1小时后颜色显现出来。实施例12
单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物可以通过浸轧施用于物质上。例如，将0．5 mg／ml对-苯二胺溶解在500ml 0．1M K2PO4缓冲液(pH7)中。漆酶也在同样的缓冲液中稀释。在60℃下利用标准实验室衬垫将对-苯二胺浸轧在所说的物质上。将这种织物汽蒸10分钟。然后，用酶溶液可以将汽蒸的物质进行第二次浸轧。在40℃时通过温育这些布样使染料显色。温育后，将布样用连续的热自来水冲洗约30秒钟。
权利要求
1．一种使物质着色的方法，该方法包括用染色系统处理所说的物质，该染色系统包含(a)一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物，每种这样的化合物可以是可以不是被一个或多个官能团或取代基取代的，其中，每一个官能团或取代基选自由卤素、磺基、磺酸根合、磺氨基、硫烷基、氨基、酰氨基、硝基、偶氮基、亚氨基、羧基、氰基、甲酰基、羟基、卤羰基、氨基甲酰基、脲基、磷酸根合、膦酰基、C1-18-烷基、C1-18-链烯基、C1-18-炔基、C1-18-烷氧基、C1-18-氧羰基、C1-18-氧代烷基、C1-18-烷基硫烷基、C1-18-烷基磺酰基、由一个，二个或三个C1-18烷基基团取代的C1-18-烷基亚氨基或氨基组成的组，其中的每一C1-18-烷基、C1-18-链烯基和C1-18炔基基团可以是被前面的官能团或取代基单-，二-或多取代的；(b)(ⅰ)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶或(ⅱ)对所说的一种或多种芳族化合物或杂芳族化合物表现出氧化酶活性的酶；其中所说的物质是由棉花、双乙酸酯、亚麻、亚麻布、lyocel、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、tencel或三乙酸酯制造的织物、纱线、纤维、衣服或薄膜。
2．按照权利要求1的方法，其中所说的一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物是萘酚。
3．按照权利要求1的方法，其中所说的一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物是芳族二胺。
4．按照权利要求1的方法，其中所说的一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物是氨基苯酚。
5．按照权利要求1的方法，其中所说的一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物是苯酚。
6．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由棉花制造的。
7．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由双乙酸酯制造的。
8．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由亚麻制造的。
9．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由亚麻布制造的。
10．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由lyocel制造的。
11．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由聚丙烯酸制造的。
12．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由聚酰胺制造的。
13．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由尼龙制造的。
14．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由聚酯制造的。
15．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由苎麻制造的。
16．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由人造丝制造的。
17．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由粘胶丝制造的。
18．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由tencel制造的。
19．按照权利要求1的方法，其中所说的物质是由三乙酸酯制造的。
20．按照权利要求1的方法，其中所说的染色系统包含对所说的一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物表现出过氧化物酶活性的酶和过氧化氢源。
21．按照权利要求20的方法，其中所说的酶是过氧化物酶或卤过氧化物酶。
22．按照权利要求1的方法，其中所说的染色系统包含对所说的一种或多种单-，二-或多环芳族化合物或杂芳族化合物表现出氧化酶活性的酶。
23．按照权利要求22的方法，其中所说的酶选自由胆红素氧化酶、儿茶酚氧化酶、漆酶、邻-氨基苯酚氧化酶以及多酚氧化酶组成的组。
24．按照权利要求1的方法，其中用所说的染色系统对所说的物质进行处理的温度范围是约5℃到约120℃。
25．按照权利要求1的方法，其中用所说的染色系统对所说的物质进行处理的pH范围是约4到约10。
26．按照权利要求1的方法，其中所说的染色系统还包含选自由钠、钾、钙、和镁离子组成的组的一价或二价离子。
27．按照权利要求1的方法，其中所说的染色系统还包括选自由聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚天冬氨酸酯，聚乙烯酰胺和聚环氧乙烷组成的组的聚合物。
28．按照权利要求1的方法，其中所说的染色系统还包含阴离子、非离子或阳离子表面活性剂。
29．按照权利要求1的方法，其中所说的酶系统还包含增强所说的酶的活性的试剂。
全文摘要
本发明涉及使物质着色的方法,该方法包括用染色系统处理所说物质,该染色系统包含(a)一种或多种单－,二—或多环芳族化合物或杂芳族化合物,和(b)(i)过氧化氢源和表现出过氧化物酶活性的酶或(ii)对所说的一种或多种芳族或杂芳族化合物表示出氧化酶活性的酶;其中所说的物质是由棉花、双乙酸酯、亚麻、亚麻布、lyocel、聚丙烯酸、聚酰胺、聚酯、苎麻、人造丝、tencel或三乙酸酯制造的织物、纱线、纤维、衣服或薄膜。
文档编号D06P3/32GK1205754SQ9619919
公开日1999年1月20日 申请日期1996年12月20日 优先权日1995年12月22日
发明者M·巴弗德, O·科特 申请人:诺沃挪第克生物化学北美公司, 诺沃挪第克公司