一种胃蛋白酶的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种胃蛋白酶的制备方法，包括以下步骤：选择成年猪胃，剥取猪胃基底部黏膜，加水搅拌并调PH，升温消化3～4h后获得液浆，过滤冷却备用；滤液中加入丙酮调比重，静置后捞取胃膜素，过滤母液，加入丙酮调比重，静置后吸尽上清液至有微浑浊状，收集沉淀；用丙酮洗涤沉淀物至颗粒状，离心后干燥；球磨过筛，获得胃蛋白酶粉。本发明提供的胃蛋白酶的制备方法通过控制预冷丙酮的温度和药液的比重来制取胃蛋白酶，采用丙酮脱水脱脂，并且丙酮可以回收再利用，所需的原材料低廉，可大大节省生产成本，对设备要求低，制备工艺简单，能快速制备高纯度药用胃蛋白酶，满足了社会对医用胃蛋白酶的需求，具有广阔的市场前景。
【专利说明】一种胃蛋白酶的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物制药领域，尤其涉及一种胃蛋白酶的制备方法。
【背景技术】
[0002]胃蛋白酶(英文名称:Pepsin)是一种消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞(gastric chief cell)所分泌,功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。
[0003]胃蛋白酶是胃中惟一的一种蛋白水解酶。其最适pH值为I~2。胃蛋白酶作用的主要部位是芳香族氨基酸或酸性氨基酸的氨基所组成的肽键。此酶由胃腺的主细胞合成，以酶原颗粒形式分泌，经胃液中盐酸激活后，具有消化蛋白质的能力。药用胃蛋白酶，可以从猪胃中提取，用于消化不良。
[0004]胃蛋白酶原由胃底主细胞分泌，在pHl.5~5.0条件下，被活化成胃蛋白酶，将蛋白质分解为胨，而且一部分被分解为酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸。胃液胃蛋白酶测定可用于鉴别神经性低酸症和胃性低酸症，当胃酸过少或缺乏时，前者胃蛋白酶的含量有时正常而后者盐酸与胃蛋白酶同时缺乏。一般认为胃性低酸症是由于胃粘膜的重症器质性变化所致，特别是对于恶性贫血、无酸症、无胃蛋白酶分泌是诊断上的重要所见。慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二脂肠炎等胃蛋白酶的分泌常减少。
[0005]药用胃蛋白酶是 胃液中多种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶、组织蛋白酶、胶原酶等又称胃酶，外观为淡黄色粉末，有透明和半透明两种，具有肉类特殊气味及微酸味，吸湿性强，易溶于水，水溶液呈酸性反应，难溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机溶剂；干酶较稳定，热至100°C，IOmin不失活，在水中受热70°C以上或PH6.2以上开始失活，PH大于8呈不可逆失活；在酸性溶液中较稳定，但在2moL/L以上的盐酸中也会慢慢失活。
[0006]随着生活节奏的变快与生活方式的改变，胃病的患病率逐年上升，对蛋白酶的需求量也愈来愈大，传统的制备胃蛋白酶的方法已经无法满足社会对医用胃蛋白酶的需求，如何简单、快速的制备安全系数高的药用胃蛋白酶是目前社会急需解决的问题。
【发明内容】
[0007]本发明实施例的目的在于提供一种胃蛋白酶的制备方法，旨在解决传统的制备胃蛋白酶的方法过程繁琐、制备的药用胃蛋白酶纯度低、安全性差的问题。
[0008]本发明是这样实现的，一种胃蛋白酶的制备方法，该胃蛋白酶的制备方法包括以下步骤:
[0009]步骤一、选择成年猪胃，剥取猪胃基底部黏膜，加水并调PH，升温后搅拌获得液浆，过滤冷却备用；
[0010]步骤二、滤液中加入丙酮调比重，静置后捞取胃膜素，过滤母液，加入丙酮调比重，静置后吸尽上清液至有浑浊状，收集沉淀；
[0011]步骤三、用丙酮洗涤沉淀物至颗粒状，离心后干燥；
[0012]步骤四、球磨过筛，获得胃蛋白酶粉。[0013]进一步，步骤一中剥取猪胃基底部黏膜的厚度为2~3mm、直径约为10cm，猪胃黏膜要自然解冻。
[0014]进一步，步骤一中加水调节PH的方法为:在胃黏膜中加入水，胃黏膜与水的质量与体积比为胃黏膜:水=1:0.4~0.5，采用盐酸调节PH至2.5~3.0。
[0015]进一步，步骤一中调PH后升温至45~48°C，搅拌的时间为3~4h，获得的液浆为半透明，滤液置低温冷却至I~3°C,冷却时间为16~18h。
[0016]进一步，步骤二中加入滤液的丙酮须先预冷至_5°C，调节比重为0.95g/cm3，静置2~3小时后捞取胃膜素,过滤母液,然后加入预冷至_5°C的丙酮,至比重为0.90g/cm3。
[0017]进一步，步骤二中沉淀静置时间为2~3小时，采用虹吸管吸尽上清液。
[0018]进一步，步骤三洗涤沉淀物的丙酮须先预冷至不高于_5°C，颗粒离心后干燥的温度要求为40~45°C，真空度为0.084~0.086MPa。
[0019]进一步，步骤四中筛目为80~100目。
[0020]本发明提供的胃蛋白酶的制备方法通过控制预冷丙酮的温度和药液的比重来制取胃蛋白酶，采用丙酮脱水脱脂，并且丙酮可以回收再利用，所需的原材料低廉，可大大节省生产成本，对设备要求低，制备工艺简单，能快速制备高纯度药用胃蛋白酶，满足了社会对医用胃蛋白酶的需求，具有广阔的市场前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1是本发明提供的胃蛋白酶的制备方法流程图。
【具体实施方式】
[0022]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0023]图1示出了本发明提供的胃蛋白酶的制备方法的流程。为了便于说明，仅仅示出了与本发明相关的部分。
[0024]下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
[0025]1.选择成年猪胃，剥取猪胃基底部黏膜厚约2~3mm、直径约10cm，猪胃黏膜自然解冻。
[0026]2.在黏膜中加入水，胃黏膜:水的质量与体积比=1:0.4~0.5，用盐酸调PH至
2.5~3.0，升温至45~48°C，搅拌消化3~4h至半透明的液浆。
[0027]3.过滤，滤液置低温冷却至I~3°C，冷却时间约16~18h，备用。
[0028]4.在冷却至I~3°C的滤液中，加入预冷至_5°C的丙酮，至比重为0.95g/cm3,即有丝状胃膜素析出，静置2~3小时后捞取胃膜素。
[0029]5.过滤母液,然后加入预冷至_5°C的丙酮,至比重为0.90g/cm3,即有淡黄色的胃酶沉淀形成，静置2~3小时后，用虹吸管将上清液(回收)吸尽，直至有微显浑浊状为止，收集沉淀。
[0030]6.用预冷至_5°C以下的丙酮，洗涤沉淀数次至沉淀物为疏松的颗粒(即胃蛋白酶)，离心后，在40~45°C，真空度0.084~0.086MPa条件下进行干燥。[0031] 7.球磨，过80~100目筛，即得胃蛋白酶粉。
[0032]本发明实施例采用丙酮脱水脱脂，并且丙酮可以回收再利用。
[0033]本发明实施例是通过控制预冷丙酮的温度(_5°C )和药液的比重来实现的。
[0034]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，该胃蛋白酶的制备方法包括以下步骤: 步骤一、选择成年猪胃，剥取猪胃基底部黏膜，加水搅拌并调PH，升温后获得液浆，过滤冷却备用； 步骤二、滤液中加入丙酮调比重，静置后捞取胃膜素，过滤母液，加入丙酮调比重，静置后吸尽上清液至有微浑浊状，收集沉淀； 步骤三、用丙酮洗涤沉淀物至颗粒状，离心后干燥； 步骤四、球磨过筛，获得胃蛋白酶粉。
2.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤一中剥取猪胃基底部黏膜的厚度为2~3mm、直径为10cm，猪胃黏膜要自然解冻。
3.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤一中加水调节PH的方法如下: 在胃黏膜中加入水，胃黏膜与水的质量与体积比为胃黏膜:水=1:0.4~0.5，采用盐酸调节PH至2.5~3.0。
4.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤一中调PH后升温至45~48°C，搅拌的时间为3~4h，获得的液浆为半透明，滤液置低温冷却至I~3°C，冷却时间为16~18h。
5.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤二中加入滤液的丙酮须先预冷至_5°C，调节比重为0.95g/cm3，静置2~3小时后捞取胃膜素，过滤母液，然后加入预冷至-5°C的丙酮,至比重为0.90g/cm3。
6.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤二中沉淀静置时间为2~3小时，采用虹吸管吸尽上清液。
7.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤三洗涤沉淀物的丙酮须先预冷至不高于-5°C，颗粒离心后干燥的温度要求为40~45°C，真空度为0.084~0.086MPa。
8.如权利要求1所述的胃蛋白酶的制备方法，其特征在于，步骤四中筛目为80~100目。
【文档编号】C12N9/64GK103614357SQ201310566706
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年11月15日 优先权日:2013年11月15日
【发明者】李湘益 申请人:长治市三宝生化药业有限公司