一种原位聚合酶链反应板的制作方法
【专利摘要】一种原位聚合酶链反应板，包括上板和下板，上板上设有密封条，上板和下板之间通过密封条相连形成具有开口的用于容纳聚合酶链反应试剂的空腔，且该原位聚合酶链反应板还设有用以密封空腔的密封盖。在进行原位聚合酶链反应实验时，将原位聚合酶链反应试剂填充进该空腔中并使用密封盖进行密封，保证了原位聚合酶链反应过程中密封的有效性。原位聚合酶链反应试剂不蒸发，反应完全，且实验产物不会污染环境，提升了实验的成功率，从而使得特定基因及病原体的诊断得到保证、原位聚合酶链反应技术得以可靠应用和推广。
【专利说明】一种原位聚合酶链反应板
【技术领域】
[0001]本发明涉及聚合酶链反应用装置，特别是涉及一种原位聚合酶链反应板。
【背景技术】
[0002]原位聚合酶链反应技术成功的将聚合酶链反应技术和原位杂交技术结合起来，保持了两项技术的优势又弥补了各自的不足。原位聚合酶链反应技术的待检标本一般为载玻片上的组织切片或细胞，组织切片或细胞什么东西先经过化学固定，以保持组织细胞的良好状态。细胞膜和核膜均具有一定的通透性。当进行聚合酶链反应扩增时，各种成份(如引物、DNA聚合酶、核苷酸等)均可以进入细胞内和细胞核内，以固定在细胞内或细胞核内的RNA或DNA为模板，在原位进行扩增。扩增的产物一般分子较大，不易穿过细胞膜，从而被保留在原位。这样原有的细胞内单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列在原位被大量扩增，扩增的产物就很容易被原位杂交技术检测出来。因此，原位聚合酶链反应技术可以反映出被测DNA或RNA的种类、亚种、数量，同时也反映其所在细胞的种类，从而进行准确的分析或诊断。
[0003]原位基因扩增技术是一种有效的检测手段，早已得到广泛的应用，但是对其操作技术要求高。但实践中由于在载玻片上进行聚合酶链反应扩增，密封用的是传统的盖玻片，不仅操作很不方便，而且会产生漏气、蒸干、干扰应用、反应条件不好寻找等问题，从而造成实验成功率低，结果非常不稳定，严重制约了原位检测技术的可靠性。
【发明内容】
[0004]基于此，有必要针对上述问题，提供一种在进行聚合酶链反应实验时具有低蒸发率、高成功率的原位聚合酶链反应板。
[0005]一种原位聚合酶链反应板，包括上板和下板，所述上板一个表面上设有密封条，所述上板与所述下板通过所述密封条`相连形成具有开口的用于容纳聚合酶链反应试剂的空腔，所述原位聚合酶链反应板还包括用以密封所述空腔的密封盖。
[0006]在其中一个实施例中，所述下板的与所述上板相对的表面上设有采用胶粘技术和蛋白质交联技术形成的具有网状分布的分隔膜层。
[0007]在其中一个实施例中，所述上板采用透明材料制成。
[0008]在其中一个实施例中，所述密封盖由密度小于水的液体材料形成。
[0009]在其中一个实施例中，所述液体材料是油或者液体石蜡。
[0010]在其中一个实施例中，所述密封条是由弹性密封材料制成的。
[0011 ] 在其中一个实施例中，所述原位聚合酶链反应板放置使用时与水平线形成夹角，所述夹角在O度到180度之间。
[0012]在其中一个实施例中，所述下板由玻璃或聚碳酸酯或聚甲基丙烯酸甲酯制成。
[0013]在其中一个实施例中，所述原位聚合酶链反应板上还具有导流机构,所述导流机构是由所述下板在所述空腔的开口方向上进行延伸构成的。[0014]在其中一个实施例中，所述密封条连接上板和下板时呈U型、V型或C型。
[0015]上述原位聚合酶链反应板包括上板和下板，上板上设有密封条，上板和下板之间通过密封条相连形成具有开口的用于容纳聚合酶链反应试剂的空腔，且该原位聚合酶链反应板还设有用以密封空腔的密封盖。在进行原位聚合酶链反应实验时，将原位聚合酶链反应试剂填充进该空腔中并使用密封盖进行密封，保证了原位聚合酶链反应过程中密封的有效性。原位聚合酶链反应试剂不蒸发，反应完全，且实验产物不会污染环境，提升了实验的成功率，从而使得特定基因及病原体的诊断得到保证、原位聚合酶链反应技术得以可靠应用和推广。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1为原位聚合酶链反应板俯视图；
[0017]图2为原位聚合酶链反应板Y处的剖视图；
[0018]图3为原位聚合酶链反应板的内部结构图；
[0019]图4为下板示意图；
[0020]图5为上板示意图。
【具体实施方式】
[0021]下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0022]请参照图1、图2、图3和图5，本发明的一个实施方式提供一种原位聚合酶链反应板100。该原位聚合酶链反应板100包括上板110、下板120，该上板110上设有密封条130。在进行原位聚合酶链反应实验时需先对下板120进行预处理，再将上板110与经过预处理后的下板120通过密封条130相连，并`形成具有开口的用于容纳原位聚合酶链反应试剂150的空腔140。该密封条130设置于上板110的一个表面上且呈U型，在其他实施方式中，还可以是V型、C型等形状，只要可以满足容纳原位聚合酶链反应试剂150的要求即可，此处不做具体限定。该密封条130可以是半封闭密封圈，也可以是密封胶，密封条130采用弹性密封材料制成，在本实施方式中，采用硅橡胶制成密封条130，在其他实施方式中，还可以采用乳胶等其他弹性密封材料来制成密封条130，此处不做具体限定。
[0023]上板110 —般采用玻璃或聚碳酸酯(PC)或聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)材料制成，在其他实施方式中还可以采用其它材料，只要该材料具有良好的透光性即可，此处不做具体限定。下板120 —般采用透明材料制成，例如玻璃，但在其他实施方式中也不局限于透明材料，只要能够完成其对应的功能即可，此处不做具体限定。
[0024]请参照图3，该原位聚合酶链反应板100上还设有导流机构。上板110和下板120相连形成的空腔140的开口方向上下板120长于上板110，形成导流机构，达到在加注原位聚合酶链反应试剂150时方便引流和准确向空腔140中加注原位聚合酶链反应试剂150的效果。在其他实施方式中，该导流机构还可以设置为其他的形式，例如在加注原位聚合酶链反应试剂150时使用漏斗构成导流机构，只要能够达到引流和准确向空腔140中加注原位聚合酶链反应试剂150的效果即可，此处不做具体限定。
[0025]请参照图4，在实验前需要进行预处理工作。在下板120上与上板110相对的表面上进行预处理工作，将被测细胞及样品置于该下板120表面上进行蛋白质胶粘、交联和网孔化处理，最终形成具有一定网孔直径的网状分布的分隔膜层121。在进行人工加注原位聚合酶链反应试剂150时，使得原位聚合酶链反应试剂150完全浸没该分隔膜层121，使得被测细胞核酸物质与原位聚合酶链反应试剂150充分接触，以利于原位聚合酶链反应的进行。
[0026]该原位聚合酶链反应板100上还设有用于密封空腔140的密封盖141。该密封盖141可以是由盖板形成的，也可以是一层柔性密封盖。该柔性密封盖即在向空腔140内加注完原位聚合酶链反应试剂150后再接着向空腔140中加注轻质油形成的一层油膜。由于油的比重轻，因此轻质油实质上是漂浮在原位聚合酶链反应试剂150的上方，从而将原位聚合酶链反应试剂150完全封闭，保证了原位聚合酶链反应过程中密封的有效性。且由于密封盖141的密封作用，在实验时原位聚合酶链反应试剂150不会蒸发，反应完全，实验增产物不会污染到环境，提升了实验的成功率。在其他实施方式中，还可以使用其他液体材料来构成密封盖141，例如液体石蜡等，但需要该液体材料的密度小于水的密度，此处不做具体限定。当密封条130的两端延伸至上板110的边缘处时，由于下板110在该开口方向上比上板120长，所以可以直接在上板120的边缘处设置一层玻璃盖板形成密封盖141 ;当密封条130的两端没有延伸至上板110的边缘处时，可以在密封条130的两端上设置一层玻璃盖板形成密封盖141。在其他实施方式中,还可以使用其他盖板形成密封盖141。即当使用盖板形成密封盖141时，该密封盖141设置的位置需根据密封条130的两端的位置来确定。
[0027]请参照图3，在使用该原位聚合酶链反应板100进行实验时，将其放置在工作台上，原位聚合酶链反应板100与水平线X形成角度α，以使实验过程中可能产生的气泡仅出现在上侧。该角度α的形成可以是使用具有角度α的支撑体，也可以是原位聚合酶链反应板100自身形成的，可以利用具有角度α的原位基因扩增仪专用模块形成。该角度α可以是45°或90°，也可以是非水平的其他任意角度。
[0028]上述原位聚合酶链反应板100具有一个容纳原位聚合酶链反应试剂150的空腔140，在该空腔140内加注原位聚合酶链反应试剂150直至浸没分隔膜层121，然后接着加注轻质油形成密封盖141漂浮在原位聚合酶链反应试剂150上方，从而将原位聚合酶链反应试剂完全封闭。这样的原位聚合酶`链反应板100使用时操作简单，且其良好的密封性保证了原位聚合酶链反应试剂150反应充分，从而使得实验具有良好的扩增性，实验扩增产物不会蒸发、不会污染环境，从而提升了实验的成功率，使得特定基因及病原体的诊断得到保证，使得原位聚合酶链反应技术得以可靠应用和推广。
[0029]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【权利要求】
1.一种原位聚合酶链反应板，其特征在于，包括上板和下板，所述上板一个表面上设有密封条，所述上板与所述下板通过所述密封条相连形成具有开口的用于容纳聚合酶链反应试剂的空腔，所述原位聚合酶链反应板还包括用以密封所述空腔的密封盖。
2.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述下板的与所述上板相对的表面上设有采用胶粘技术和蛋白质交联技术形成的具有网状分布的分隔膜层。
3.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述上板采用透明材料制成。
4.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述密封盖由密度小于水的液体材料形成。
5.根据权利要求4所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述液体材料是油或者液体石蜡。
6.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述密封条是由弹性密封材料制成的。
7.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述原位聚合酶链反应板放置使用时与水平线形成夹角，所述夹角在O度到180度之间。
8.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述下板由玻璃或聚碳酸酯或聚甲基丙烯酸甲酯制成。
9.根据权利要求1所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述原位聚合酶链反应板上还具有导流机构，所述导流机构是由所述下板在所述空腔的开口方向上进行延伸构成的。
10.根据权利要求 1~9中任一项所述的原位聚合酶链反应板，其特征在于，所述密封条连接上板和下板时呈U型、V型或C型。
【文档编号】C12M1/00GK103642674SQ201310674274
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月11日 优先权日:2013年12月11日
【发明者】刘志华, 聂尚海, 申跃华 申请人:苏州东胜兴业科学仪器有限公司