一种运用重组唾液酸酶转化多唾液酸神经节苷脂制备单唾液四己糖神经节苷脂的方法
【专利摘要】本发明提供一种运用重组唾液酸酶转化多唾液酸神经节苷脂制备单唾液四己糖神经节苷脂的方法，包括以下步骤：1)提供一种游离的重组唾液酸酶，所述重组唾液酸酶是由SEQ?ID?NO:1所示的碱基序列编码的蛋白；以及2)将步骤1)中的重组唾液酸酶与多唾液酸神经节苷脂混合，以将所述多唾液酸神经节苷脂(GLS)转化为单唾液四己糖神经节苷脂(GM1)。本发明首次通过全合成唾液酸酶的全长基因，在大肠杆菌中成功实现了唾液酸酶的可溶性表达，该重组唾液酸酶比活高，制备成本低，并且该方法通过采用透析原位分离产物唾液酸可进一步解除唾液酸的抑制作用，促进反应向产物方向进行，从而将高浓度的GLS完全转化为GM1。
【专利说明】一种运用重组唾液酸酶转化多唾液酸神经节苷脂制备单唾 液四己糖神经节苷脂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于酶法转化制备单唾液四己糖神经节苷脂领域，更具体地涉及一种运用 重组唾液酸酶转化多唾液酸神经节苷脂制备单唾液四己糖神经节苷脂的方法。
【背景技术】
[0002] 神经节苷脂是含唾液酸的鞘糖脂。1942年Klenk首先在神经节细胞内找到这类 化合物，故名神经节苷脂。神经节苷脂由神经酰胺、寡糖和唾液酸组成。神经节苷脂所含 的寡糖是一种特异的以β-糖苷键连接的四糖。四糖按半乳糖（Gal)、N-乙酰半乳糖胺 (N-GalNAC)、半乳糖及葡萄糖（Glu)顺序连接，最后通过葡萄糖残基与神经酰胺（Cer)相 连。神经节苷脂的唾液酸残基均连接于寡糖的半乳糖基上，其数目从无（无唾液酸神经节 苷脂）到四个或更多不等。目前已从脑组织中分离出30多种神经节苷脂，其命名通常采用 Svennerholm法，主要内容包括：（1):用大写"G"表示神经节苷脂；（2)用A、M、D、T、Q、P、H、 S分别表示含0-7个唾液酸；(3)用（5-糖基数）之差表示含相同唾液酸但不同糖基数的神 经节苷脂；（4)用a、b、c表示唾液酸的连接部位。
[0003] 下图举例说明一个神经节苷脂缩写名称中各部分含义。
[0004]
【权利要求】
1. 一种运用重组唾液酸酶转化多唾液酸神经节苷脂制备单唾液四己糖神经节苷脂的 方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 提供一种游离的重组唾液酸酶，所述重组唾液酸酶是由SEQ ID NO: 1所示的乳酪短 杆菌唾液酸酶喊基序列编码的蛋白；以及 2) 将步骤1)中的重组唾液酸酶与多唾液酸神经节苷脂混合，以将所述多唾液酸神经 节苷脂转化为单唾液四己糖神经节苷脂。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多唾液酸神经节苷脂是以神经节苷 脂混合物形式提供。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重组唾液酸酶是通过将SEQ ID NO: 1 所示的乳酪短杆菌唾液酸酶碱基序列连接载体并在大肠杆菌中进行可溶性表达获得的蛋 白。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)进一步包括采用膜透析的方 法去除反应产物唾液酸。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述膜透析的截留分子量为 10000-50000kDa。
6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述透析液是50mM的pH5. 5的醋酸钠缓 冲液。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转化反应的温度控制在30?40°C。
【文档编号】C12P19/44GK104195200SQ201410441305
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】王学东, 龙辉, 魏东芝 申请人:华东理工大学