一种从猫豆渣中提取多肽的方法
【专利摘要】本发明公开一种从猫豆渣中提取多肽的方法，其步骤包括原料预处理、微波辅助萃取蛋白质、沉析蛋白质、稀解分离蛋白、酶解、灭活、沉析除杂、蒸发浓缩、微波干燥和粉碎均质。本方法具有效率高，收益好，节约资源的优点，本方法为猫豆资源的综合利用提供了新的途径。
【专利说明】一种从猫豆渣中提取多肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农产品加工【技术领域】，特别是涉及一种从猫豆渣中提取多肽的方法。
【背景技术】
[0002] 猫豆又叫狗爪豆、白藜豆、龙爪豆等，是豆科藜豆属草质藤本一年生植物，广泛分 布于亚热带地区，在我国的海南、广东、广西等省及贵州和云南的南部地区广有分布，产量 最多的是广西。猫豆有野生、半野生和人工栽植，在基岩为石灰岩山区多有半野生猫豆，即 于春天播种岩石裂隙或风化岩边，不施肥、不搭架让枝蔓攀爬在岩石上，待到秋末冬初豆荚 成熟后采收。
[0003] 猫豆营养丰富，由于不同地区、不同栽培方法，其营养成分也略有差异。粗蛋白含 量为22-27 %，粗脂肪含量为3-6 %，粗纤维含量为10-15 %，无氮浸出物含量为41-52 %，所 含氨基酸种类比较齐全，游离氨基酸有17种，水解氨基酸有18种，其中以谷氨酸和天冬氨 酸最高，其次是亮氨酸、赖氨酸，最低是色氨酸和蛋氨酸，药用成分左旋多巴的含量3-7%。 据研宄报道，野生或半野生猫豆中左旋多巴含量比栽培的高2-3%，猫豆豆仁外皮呈紫花色 或黑色的左旋多巴含量比白色的高2-3%，特别是豆仁外皮呈黑色，内部呈淡黑色的猫豆中 左旋多巴含量高达7. 3%。
[0004] 左旋多巴的分子式为：C9HnN04，相对分子量为197. 19,其结构式为：
[0005]
【权利要求】
1. 一种从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： (1) 原料预处理：将猫豆渣与水按照固液比1:20加入容器，浸泡4h后取出，脱水，再取 少量猫豆渣与0. 2mol/L HCL水溶液按照质量比1:4加入到容器中，加热至温度达到50°C， 保温lOmin，检测溶液中无左旋多巴后，方可进入下一步骤； (2) 微波辅助萃取蛋白质：将脱去左旋多巴的猫豆渣按固液比1:10加入软水，调pH = 8. 5,将其投入有搅拌装置和冷却水循环、微波频率为2450MHz，功率为20kw的立式微波罐 中，控制料液温度55-60°C，微波萃取反应30min，保温20min，然后用离心机两次过滤脱溶， 两次过滤的滤布的细度分别为20和200目，将所得滤渣合并； (3) 沉析蛋白质：将1. 5%壳聚糖醋酸溶液缓慢加入步骤⑵所得滤渣中并不断搅拌， 当溶液pH = 5时停止搅拌，静置4h，分层，取下层沉淀离心、过滤，所得滤渣即为分离蛋白； (4) 稀解分离蛋白：加入软水使底物质浓度达7%，搅拌，使分离蛋白溶解，然后调pH = 8. 5 ； (5) 酶解I :把稀解分离蛋白溶液投入立式微波罐中，添加碱性蛋白酶占底物质量的 2. 5 %，微波反应20min，控制料液温度<60°C，微波反应结束后，55-60°C保温20min，在微 波反应20min中，前15min每隔5min测pH值1次：第1次若测得pH〈8时，则调pH值= 8. 2-8. 3 ;第2次若测得pH值〈7. 5时，则调pH值=7. 8-8. 0 ;第3次若测得pH值〈7. 5时， 则调pH值=7. 5 ; (6) 酶解II :当酶解I结束后，控制料液pH值=7. 5,添加木瓜蛋白酶占底物质量的 2. 5%，控制料液温度<55°C，微波反应20min，保温20min，微波反应的前15min每隔5min测 定1次pH值：第1次若测得pH值〈7. 0时，则调pH值=7. 2-7. 3 ;第2次若测得pH值〈6. 8 时，则调pH值=7. 0 ;第3次若测得pH值〈6. 8时，则调pH值=7. 0 ; (7) 灭活：待步骤（6)结束后，关闭微波罐的冷却循环，开启升温，使料液温度达到 80-90°C，保温 lOmin ; (8) 沉析除杂：将酶解液排出，待温度冷却至40°C以下时，加入壳聚糖酸溶液，调节酶 解液pH = 5,静置3-4h、分层、过滤下层浓液、将其干燥，温度< 70°C，上清液和滤液为多肽 液； (9) 蒸发浓缩：将多肽液投入真空浓缩器中，减压浓缩使其浓度>60% ; (10) 微波干燥：将步骤（9)中所得多肽浓浆投入微波干燥器中，控制温度<65°C，得多 肽干粉； (11) 粉碎均质：将步骤（10)中所得多肽干粉粉碎、混合均匀，即得多肽成品。
2. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤⑴中检测溶液 中无左旋多巴的方法为，取溶液加入10%三氯化铁试液检验，若溶液不显示蓝色表示无左 旋多巴。
3. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（3)中壳聚糖的 脱乙酰度多87%。
4. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（3)中1. 5%壳 聚糖醋酸溶液，是将壳聚糖溶解于10%醋酸溶液中所得。
5. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（3)中过滤，使 用的滤布细度为300目。
6. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（5)中碱性蛋白 酶的酶活力为20万u/g。
7. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（6)中木瓜蛋白 酶的酶活力为20万u/g。
8. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤⑶中过滤所用 滤布细度为10 um。
9. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（8)中真空浓缩 器的工作参数为：压强彡〇. 〇8MPa，温度为50-60°C。
10. 如权利要求1所述的从猫豆渣中提取多肽的方法，其特征在于，步骤（11)中多肽干 粉粉碎后的细度〈80目。
【文档编号】C12P21/00GK104480171SQ201410670753
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年11月21日 优先权日:2014年11月21日
【发明者】梁尚文, 梁满水, 苗城 申请人:南宁知本康业生物技术有限公司, 梁尚文, 梁满水, 苗城