本发明涉及食品安全技术领域，具体而言涉及一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法。
背景技术：
雪卡毒素的名字来源于雪卡鱼类，该毒素曾从400多种鱼中分离得到过，但其真正来源是一种双鞭藻岗比毒甲藻（。雪卡毒素是一种脂溶性高醚类物质，毒性非常强，比河豚毒素强100倍，是已知的危害性较严重的赤潮生物毒素之一，无色无味，脂溶性，不溶于水，耐热，不易被胃酸破坏，主要存在于珊瑚鱼的内脏、肌肉中，尤以内脏中含量为高。已发现3类雪卡毒素，即太平洋雪卡毒素、加勒比海雪卡毒素和印度雪卡毒素。无论在数量上还是在毒性上，雪卡毒素是已知的对哺乳动物毒性最强的毒素之一。
雪卡毒素对人体造成的危害主要是由食用含雪卡毒素的草食性鱼类和肉食性鱼类引起的。自二十世纪八十年代至今，随着人类对海洋蛋白依赖性的增加，在世界范围内平均每年发生的雪卡毒素中毒人数达5万多人。然而，有证据表明由于鱼类的洄游性和鱼类产品的贸易扩大，雪卡毒素也可以影响到其他地区。中国南海诸岛、台湾海峡和香港地区常有雪卡毒素中毒事件发生。雪卡毒素已成为影响渔业经济发展和公共卫生的一大障碍。
壳聚糖是由自然界广泛存在的甲壳素在碱性条件下水解并脱去部分乙酰基后生成的衍生物，来源丰富，无毒。自1859年，法国人rouget首先得到壳聚糖后，这种天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等优良性能被各行各业广泛关注，在医药、食品、化工、化妆品、水处理、金属提取及回收、生化和生物医学工程等诸多领域的应用研究取得了重大进展。
天然状态的壳聚糖大部分为粉末状，作为吸附载体，使载体和吸附物都难以回收，从而限制其应用。在特定的条件下，壳聚糖能发生水解、烷基化、酰基化、羧甲基化、磺化、硝化、卤化、氧化、还原、缩合和络合等化学反应，可生成各种具有不同性能的壳聚糖衍生物，从而扩大了壳聚糖的应用范围。
壳聚糖在蛋白相互作用、抗原抗体反应、相关疾病的诊断等方面都会应用到，具体为把蛋白固定到微球上，然后进行相关分析或者检测。目前，市场上多采用环氧或-cn基团作为活化基团。因为不同活化方式的用途不一样，所以，开发多种不同的活化方式才能满足科研的实际需求。
而目前已经存在电子束辐照加工技术为基础，运用x射线、γ射线或高速电子束等电离电子束辐照产生的高能射线对食品进行加工处理，达到杀虫、杀菌、抑制生理过程、提高食品卫生质量、保持营养品质及风味、延长货架期的目的。而辐照对一些生物毒素也具有降解作用。
因此为了解决生物毒素对于食品卫生行业的危害，需要一种处理效率高，效果好的电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法。
技术实现要素：
为了解决上述问题，提供一种电子束辐照制备用于吸附生物毒素的壳聚糖微球的方法，本发明采用以下技术方案：
一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法，包括以下步骤：
（1）将含有雪卡毒素的海产品进行前处理；
（2）将经过前处理的海产品与壳聚糖微球共同浸泡，然后通过乙酸溶液和氢氧化钠溶液调节浸泡液的ph为6~8，保持浸泡液的温度为13~20℃，进行吸附。
（3）将经过壳聚糖微球处理过的海产品放置于电子束辐照光下进行电子束辐照。
首先本发明对含有雪卡毒素的海产品进行前处理工作，然后通过壳聚糖微球对含有雪卡毒素的海产品进行吸附处理，经过壳聚糖处理后的海产品中依旧会有一些雪卡毒素残留，此时再通过使用电子束进行照射，此时由于电子束辐照的作用使得雪卡毒素发生了裂解，先失去了—h2o再失去了碳氧双键，从而进一步降低雪卡毒素的含量，从而降低了中毒的分险。
作为优选，所述的前处理包括以下步骤：将含有雪卡毒素的海产品用自来水进行清洗，沥干，然后加入碳酸钠溶液腌制。
在本发明中将含有雪卡毒素的海产品在弱碱性条件下进行腌制，由于弱碱条件可以使得雪卡毒素发生降解，从而降低毒性作用，提高安全性。
作为优选，所述的腌制的温度为在4~5℃，腌制的时间为3~5h，所述的碳酸钠溶液的质量分数为0.3~1.5%。
采用0.3%~1.5%浓度范围的碳酸钠溶液浓度可以在保持海产品尤其是雪卡在不被破坏其风味和营养价值的情况下起到降解雪卡毒素的作用。
作为优选，所述的壳聚糖微球采用以下方法制备：
首先逐渐将120~160重量份乙酸溶液加入3~4重量份壳聚糖中，以200~300r/min的速率搅拌30~35min，使得壳聚糖溶解在乙酸溶液中，然后低温冷藏18~20小时，然后将壳聚糖吸入注射器中，随后将注射器中的壳聚糖逐滴加入到凝结液中，带壳聚糖凝结为球体后用去离子水反复洗涤至于中性，然后进行干燥。
在本发明中使用了乙酸作为壳聚糖的溶解剂，由于聚糖的糖苷键是半缩醛结构,而这种半缩醛结构对酸是不稳定的，壳聚糖的酸性溶液在放置过程中会发生酸催化的水解反应,采用乙酸防止酸性过强导致壳聚糖降解，而乙酸的弱酸性则可以提高壳聚糖的分散能力，有助于壳聚糖微球的制备。而采用了低温冷藏的方式可以降低壳聚糖的降解程度，提高壳聚糖微球的作用效果。
作为优选，所述的凝结液采用以下方法制备：在40~50重量份的氢氧化钠加入2~3重量份的乙酸乙酯，均匀搅拌。
本发明采用乙酸乙酯和氢氧化钠作为凝结剂可以形成ph值较高的溶液，有助于提高壳聚糖成球的效率，同时采用该种比例的氢氧化钠和乙酸乙酯混合，由于乙酸乙酯为小分子量的化合物，在氢氧化钠中可以降低，采用该种比例的混合液可以提高壳聚糖微球表面的致密程度，有利于提高壳聚糖微球对于雪卡毒素的吸附能力。
作为优选，所述的壳聚糖经过以下方法制备：
（1）将5~6重量份的虾壳放于600~700重量份的1mol/l的盐酸中浸泡3~4h，随后将虾壳取出后放入同浓度的1000~1200重量份的盐酸中继续浸泡8~9h，然后取出后在500~550重量份3%的氢氧化钠溶液中煮沸40~100min，将固体取出后再日光下晒干漂白，得到甲壳素；
（2）然后将甲壳素浸没于质量分数为40~50%的氢氧化钠中，在90~95℃下保温2~3h。
在本发明中采用此种方法对壳聚糖进行制备，首先采用了虾壳作为原料，降低了壳聚糖的制备成本，而且在重复利用废弃原料的同时降低了对于环境的污染，而且本发明通过先酸浸泡再进行碱煮的方法可以降低所得到的甲壳素的灰分，从而提高得到的壳多糖微球的表面致密性从而壳聚糖微球的处理能力，而且后面采用了较高浓度的氢氧化钠和较高的处理温度可以得到脱乙酞度更高的壳多糖，从而提高壳多糖的吸附能力。本发明还采用了分步浸酸和碱煮的方法，有助于减少壳多糖中的杂质组分，提高壳聚糖份吸附能力。
作为优选，所述的步骤（2）中的吸附过程为震荡吸附。
本发明采用震荡吸附的方法可以增强壳聚糖微球对雪卡毒素的吸附作用，增加吸附效率。
作为优选，所述的震荡吸附过程为将整个体系在摇床上以100~120r/min的震荡速率进行震荡，震荡吸附的时间为3~5h。
采用该震荡速率和震荡时间可以在提高吸附效率的同时降低由于过于快速的震荡对壳聚糖微球的结构产生破坏的可能性，保证了壳聚糖微球的作用效果。
作为优选，所述的电子束辐照的剂量为5~10kgy。
本发明采用了该辐射剂量，可以在满足食品卫生安全的情况下起到降解雪卡毒素的作用。
作为优选，所述的电子束辐照采用剂量为10kgy。
当食物的辐照量在10kgy以下则不会产生毒理作用，即在该剂量下辐照下食物不会对人体造成危害，而且该剂量可以对雪卡毒素起到良好的降解作用，降解的程度可以达到30%以上。有着非常明显的作用。
本发明的有益效果在于：本发明具有对雪卡毒素处理效率高，降解效果好而且对人体不会产生新的毒理作用的优势。
具体实施方式
下面结合具体实施案例对本发明作进一步解释：
实施例1
一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法，包括以下步骤：
（1）将含有雪卡毒素的海产品用自来水进行清洗，沥干，然后加入碳酸钠溶液腌制，所述的腌制的温度为在4℃，腌制的时间为3h，所述的碳酸钠溶液的质量分数为1%；
（2）将经过腌制的海产品与壳聚糖微球共同浸泡，然后通过乙酸溶液和氢氧化钠溶液调节浸泡液的ph为6，保持浸泡液的温度为13℃，进行震荡吸附，所述的震荡吸附过程为将整个体系在摇床上以100r/min的震荡速率进行震荡，震荡吸附的时间为3h。
（3）将经过壳聚糖微球处理过的海产品放置于电子束辐照光下进行电子束辐照，所述的电子束辐照光的剂量为10kgy。
其中，所述的壳聚糖微球采用以下方法制备：
首先逐渐将120重量份乙酸溶液加入3重量份壳聚糖中，以200r/min的速率搅拌30min，使得壳聚糖溶解在乙酸溶液中，然后低温冷藏18小时，然后将壳聚糖吸入注射器中，随后将注射器中的壳聚糖逐滴加入到凝结液中，带壳聚糖凝结为球体后用去离子水反复洗涤至于中性，然后进行干燥，其中，所述的凝结液采用以下方法制备：在40重量份的氢氧化钠加入2重量份的乙酸乙酯，均匀搅拌。
其中，所述的壳聚糖经过以下方法制备：
（1）将5重量份的虾壳放于600重量份的1mol/l的盐酸中浸泡4h，随后将虾壳取出后放入同浓度的1000重量份的盐酸中继续浸泡9h，然后取出后在500重量份3%的氢氧化钠溶液中煮沸40min，将固体取出后再日光下晒干漂白，得到甲壳素；
（2）然后将甲壳素浸没于质量分数为40%的氢氧化钠中，在90℃下保温2h。
实施例2
一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法，包括以下步骤：
（1）将含有雪卡毒素的海产品用自来水进行清洗，沥干，然后加入碳酸钠溶液腌制，所述的腌制的温度为在5℃，腌制的时间为5h，所述的碳酸钠溶液的质量分数为1.5%；
（2）将经过腌制的海产品与壳聚糖微球共同浸泡，然后通过乙酸溶液和氢氧化钠溶液调节浸泡液的ph为8，保持浸泡液的温度为20℃，进行震荡吸附，所述的震荡吸附过程为将整个体系在摇床上以120r/min的震荡速率进行震荡，震荡吸附的时间为5h。
（3）将经过壳聚糖微球处理过的海产品放置于电子束辐照光下进行电子束辐照，所述的电子束辐照光的剂量为5kgy。
其中，所述的壳聚糖微球采用以下方法制备：
首先逐渐将160重量份乙酸溶液加入3重量份壳聚糖中，以300r/min的速率搅拌35min，使得壳聚糖溶解在乙酸溶液中，然后低温冷藏20小时，然后将壳聚糖吸入注射器中，随后将注射器中的壳聚糖逐滴加入到凝结液中，带壳聚糖凝结为球体后用去离子水反复洗涤至于中性，然后进行干燥，其中，所述的凝结液采用以下方法制备：在50重量份的氢氧化钠加入3重量份的乙酸乙酯，均匀搅拌。
其中，所述的壳聚糖经过以下方法制备：
（1）将6重量份的虾壳放于700重量份的1mol/l的盐酸中浸泡4h，随后将虾壳取出后放入同浓度的1200重量份的盐酸中继续浸泡9h，然后取出后在550重量份3%的氢氧化钠溶液中煮沸100min，将固体取出后再日光下晒干漂白，得到甲壳素；
（2）然后将甲壳素浸没于质量分数为50%的氢氧化钠中，在95℃下保温3h。
实施例3
一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法，包括以下步骤：
（1）将含有雪卡毒素的海产品用自来水进行清洗，沥干，然后加入碳酸钠溶液腌制，所述的腌制的温度为在5℃，腌制的时间为5h，所述的碳酸钠溶液的质量分数为0.6%；
（2）将经过腌制的海产品与壳聚糖微球共同浸泡，然后通过乙酸溶液和氢氧化钠溶液调节浸泡液的ph为7，保持浸泡液的温度为15℃，进行震荡吸附，所述的震荡吸附过程为将整个体系在摇床上以100/min的震荡速率进行震荡，震荡吸附的时间为4h。
（3）将经过壳聚糖微球处理过的海产品放置于电子束辐照光下进行电子束辐照，所述的电子束辐照光的剂量为10kgy。
其中，所述的壳聚糖微球采用以下方法制备：
首先逐渐将140重量份乙酸溶液加入4重量份壳聚糖中，以200r/min的速率搅拌30min，使得壳聚糖溶解在乙酸溶液中，然后低温冷藏18小时，然后将壳聚糖吸入注射器中，随后将注射器中的壳聚糖逐滴加入到凝结液中，带壳聚糖凝结为球体后用去离子水反复洗涤至于中性，然后进行干燥，其中，所述的凝结液采用以下方法制备：在45重量份的氢氧化钠加入2重量份的乙酸乙酯，均匀搅拌。
其中，所述的壳聚糖经过以下方法制备：
（1）将5重量份的虾壳放于600重量份的1mol/l的盐酸中浸泡3h，随后将虾壳取出后放入同浓度的1000重量份的盐酸中继续浸泡9h，然后取出后在500重量份3%的氢氧化钠溶液中煮沸60min，将固体取出后再日光下晒干漂白，得到甲壳素；
（2）然后将甲壳素浸没于质量分数为45%的氢氧化钠中，在95℃下保温3h。
实施例4
一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法，包括以下步骤：
（1）将含有雪卡毒素的海产品用自来水进行清洗，沥干，然后加入碳酸钠溶液腌制，所述的腌制的温度为在5℃，腌制的时间为5h，所述的碳酸钠溶液的质量分数为1.5%；
（2）将经过腌制的海产品与壳聚糖微球共同浸泡，然后通过乙酸溶液和氢氧化钠溶液调节浸泡液的ph为7，保持浸泡液的温度为20℃，进行震荡吸附，所述的震荡吸附过程为将整个体系在摇床上以100r/min的震荡速率进行震荡，震荡吸附的时间为5h。
（3）将经过壳聚糖微球处理过的海产品放置于电子束辐照光下进行电子束辐照，所述的电子束辐照光的剂量为10kgy。
其中，所述的壳聚糖微球采用以下方法制备：
首先逐渐将140重量份乙酸溶液加入3重量份壳聚糖中，以200r/min的速率搅拌30min，使得壳聚糖溶解在乙酸溶液中，然后低温冷藏18小时，然后将壳聚糖吸入注射器中，随后将注射器中的壳聚糖逐滴加入到凝结液中，带壳聚糖凝结为球体后用去离子水反复洗涤至于中性，然后进行干燥，其中，所述的凝结液采用以下方法制备：在45重量份的氢氧化钠加入2重量份的乙酸乙酯，均匀搅拌。
其中，所述的壳聚糖经过以下方法制备：
（1）将5重量份的虾壳放于600重量份的1mol/l的盐酸中浸泡3h，随后将虾壳取出后放入同浓度的1000重量份的盐酸中继续浸泡9h，然后取出后在500重量份3%的氢氧化钠溶液中煮沸60min，将固体取出后再日光下晒干漂白，得到甲壳素；
（2）然后将甲壳素浸没于质量分数为45%的氢氧化钠中，在95℃下保温3h。
实施例5
一种电子束辐照和壳聚糖微球互作降解雪卡毒素的方法，包括以下步骤：
（1）将含有雪卡毒素的海产品用自来水进行清洗，沥干，然后加入碳酸钠溶液腌制，所述的腌制的温度为在4℃，腌制的时间为3h，所述的碳酸钠溶液的质量分数为1.5%；
（2）将经过腌制的海产品与壳聚糖微球共同浸泡，然后通过乙酸溶液和氢氧化钠溶液调节浸泡液的ph为7，保持浸泡液的温度为20℃，进行震荡吸附，所述的震荡吸附过程为将整个体系在摇床上以120r/min的震荡速率进行震荡，震荡吸附的时间为3h。
（3）将经过壳聚糖微球处理过的海产品放置于电子束辐照光下进行电子束辐照，所述的电子束辐照光的剂量为10kgy。
其中，所述的壳聚糖微球采用以下方法制备：
首先逐渐将140重量份乙酸溶液加入4重量份壳聚糖中，以200r/min的速率搅拌30min，使得壳聚糖溶解在乙酸溶液中，然后低温冷藏18小时，然后将壳聚糖吸入注射器中，随后将注射器中的壳聚糖逐滴加入到凝结液中，带壳聚糖凝结为球体后用去离子水反复洗涤至于中性，然后进行干燥，其中，所述的凝结液采用以下方法制备：在45重量份的氢氧化钠加入2重量份的乙酸乙酯，均匀搅拌。
其中，所述的壳聚糖经过以下方法制备：
（1）将5重量份的虾壳放于600重量份的1mol/l的盐酸中浸泡3h，随后将虾壳取出后放入同浓度的1000重量份的盐酸中继续浸泡9h，然后取出后在500重量份3%的氢氧化钠溶液中煮沸60min，将固体取出后再日光下晒干漂白，得到甲壳素；
（2）然后将甲壳素浸没于质量分数为45%的氢氧化钠中，在95℃下保温3h。
下面对本发明的优选实施例3进行检测：
首先制备雪卡毒素溶液：取毒藻培养液400ml于离心机中在6000r/min下离心10min，去除离心管中的上清液后收集沉淀加入0.01mol/l的乙酸溶液中继续重新悬浮，在冰水浴中超声破碎，采用工作功力为600w，采取3s，停止3s的间隔，西区上清液真空冷冻干燥。
然后将所述的雪卡毒素溶液经过实施例3的处理，经过荧光检测，得出雪卡毒素的去除率达到了97%，具有良好的消除作用。