专利名称：细胞核仁活体染色法的制作方法
技术领域：
本发明属细胞核仁活体染色法，用于各医疗单位实验室作显微镜下细胞核仁的观察。
通常生物体细胞内含有细胞浆和细胞核，细胞核内含有核仁。构成细胞核的主要成份是脱氧核糖核酸(DNA)，构成核仁的主要成份是核糖核酸(RNA)。核仁的有无及其数量和形态的改变对鉴别细胞性质及成熟程度具有重要的意义。
为了能在光学显微镜下通过观察核仁来诊断疾病，1924年Fenlgen等发明了DNA染色法，根据核内DNA染色结果，为阴性者属RNA密集的地方，即判断为核仁。1974年Cook等发明了RNA染色法，染红色者为RNA密集的地方，即判断为核仁。1987年Crocker创立了核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)染色法，来判断核仁，用于鉴别良恶性肿瘤。这些直接或间接的核仁染色法，所用试剂种类多，价贵，难购，操作繁，PH、温度、时间等实验条件要求高，染色结果易失败，难在临床普及应用。Wright和Giemsa染色法常用于观察血细胞核和浆的形态结构。但对核仁染色效果差，难以辨认。实质上至今还没有一种简便易行的专门用于细胞核仁染色的良好方法。
本发明的目的是要提供一种简便的细胞核仁活体染色法，它能从细胞内清晰地分辨出核仁，为相关疾病的诊断提供依据。
本发明的目的是这样实现的细胞与煌焦油蓝染料混合作活体染色后，不显示细胞核及其膜的结构，核浆染色结果相似。核仁内的嗜碱性物质(RNA)被染成蓝色颗粒，其颗粒又聚集成致密的点粒状或重叠成圆形团块状结构，越近团块中心的地方，蓝色颗粒重叠得越密集。而在核仁以外的细胞内，蓝色颗粒稀疏散在分布，或由蓝丝相连。由此衬托出明显突出、易于分辨的核仁。
本发明只需将细胞与煌焦油蓝混合染色5-10min，即可制成薄片进行油镜观察。操作简便，条件易于控制，且核仁明显易辨，具有推广应用价值。
本发明用煌焦油蓝作染料，配制成10g/L煌焦油蓝乙醇溶液，即取煌焦油蓝1g研碎，溶于95％乙醇100ml中，过滤备用。或配制成煌焦油蓝盐水溶液，即取煌焦油蓝1g，溶于109mmol枸橡酸钠20ml中，加8.5g/L NaCl至100ml，混匀，过滤备用。也可用新亚甲蓝N或天青B溶液染色。
本发明在操作过程中，先滴加煌焦油蓝乙醇溶液1滴于载玻片上，自然干燥后，取被检细胞1滴放在干燥的染料上混匀，放置5-10min(可用两载玻片重合将细胞和染料夹在中央，以防止干燥)，然后制成薄片，在油镜下观察。或在新鲜组织切片上滴加煌焦油蓝盐水溶液染色10-15min，水洗，干后油镜观察。如附
图1所示，细胞1经本发明的核仁活体染色后，不显示细胞核与核膜的结构，核与浆染色结果相似，均出现了稀疏、散在分布的蓝色颗粒2。蓝色颗粒2呈点粒状密集排列或重叠、溶合成团块状结构即为核仁3。
本发明经临床观察，已知对恶性肿瘤特别是血液病的诊断或鉴别诊断具有重要的意义①帮助识别细胞的成熟程度。如原始细胞有核仁，中晚幼或成熟细胞无核仁。②帮助鉴别急性白血病的类型。如原粒细胞有2-5个较小的核仁，原淋细胞有1-2个较大的核仁，原单细胞常为1个较大的核仁，原浆细胞有2-5个核仁，原巨核细胞有2-3个核仁，原红细胞有1-2个大小不等的核仁。③判断细胞性质。增生旺盛或恶性细胞，核浆内蓝色颗粒深染、粗大、增多。
权利要求
1.一种细胞核仁活体染色法，其特征是细胞用煌焦油蓝或新亚甲兰N或天青B染料活体染色后，不显示细胞核及其膜的结构，核与浆染色结果相似。核仁内的物质(RNA)被染成蓝色颗粒，其颗粒呈点粒状致密排列或溶合成圆形团块状结构，越近团块中心的地方，蓝色颗粒重叠得越密集。而在核仁以外的细胞内，蓝色颗粒稀疏散在分布，或由蓝丝相连成细索状。
2.根据权利要求1所述的细胞核仁活体染色法，其特征在于作骨髓、外周血、浆膜腔积液标本中细胞核仁活体染色及新鲜组织切片中细胞核仁活体染色。
3.根据权利要求1所述的细胞核仁活体染色法，其特征在于煌焦油蓝染料的配方是配制成10g/L煌焦油蓝乙醇溶液，即取煌焦油蓝1g研碎，溶于95％乙醇100ml中，过滤备用。或配制成煌焦油蓝盐水溶液，即取煌焦油蓝1g，溶于109mmol枸橡酸钠20ml中，加8.5g/L NaCl至100ml，混匀，过滤备用。
全文摘要
一种应用于医疗卫生单位及教学科研单位实验室的细胞核仁活体染色法,其特征是细胞用煌焦油蓝活体染色后,不显示细胞核及其膜的结构,核与浆染色结果相似。核仁内的物质(RNA)被染成蓝色颗粒,其颗粒呈点粒状致密排列或溶合成圆形团块状结构,越近团块中心的地方,蓝色颗粒重叠得越密集。而在核仁以外的细胞内,蓝色颗粒稀疏散在分布,或由蓝丝相连成细索状。由此衬托出明显易辨的核仁结构。主要用于识别细胞的成熟程度,鉴别恶性肿瘤细胞及急性白血病的类型。
文档编号C12Q1/02GK1256317SQ9911761
公开日2000年6月14日 申请日期1999年8月3日 优先权日1999年8月3日
发明者翁炳焕, 杨振华 申请人:翁炳焕