专利名称：一种细胞染色方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞染色方法。
现有技术中的细胞染色方法，操作程序比较复杂、染色色泽也不够稳定。
本发明的细胞染色方法，克服了现有技术的不足，提供了一种使用方便、操作简单的染色方法。
本发明的细胞染色方法，适用于使用自制的染色液进行细胞染色，所述染色液的组成成分和制备方法已另行申请发明专利，其由A液和B液两部分组成，A液的组成成分及其配比为硝酸银(分析纯)30—60g，蒸馏水100ml；A液的优选配比为硝酸银(分析纯)50g，蒸馏水100ml。B液的组成成分及其配比为明胶1—3g，甲酸200—500微升，蒸馏水100ml；B液的优选配比为明胶2g，甲酸250微升，蒸馏水100ml。细胞染色时，A液与B液的体积比为1—3∶1在进行细胞染色之前，需要对细胞进行细胞培养、细胞分离、制片程序。
1．细胞培养细胞可以依常规方法进行培养，T—淋巴细胞培养也可按如下方法进行(1)培养液培养液的组成成分及配制1000克培养液的用量为N—(2—羟乙基)哌嗪—N’—2—乙烷磺酸(Hepes)3—6g
碳酸氢钠1—3gRPMI 1640培养基(以干粉量计) 5—10gL—谷氨酰胺(LG) 0．1—0．3g肝素钠(150u／mg)0．1—0．3g植物血凝素(PHA) 5—20 mg胎牛血清100—300 ml青霉素(80万u／2ml) 0．1—0．5ml链霉素(100万u／2ml) 0．1—0．5ml余量用蒸馏水补齐。
该培养液的PH值为6．5—7．5。
(2)依如下方法和步骤进行T—淋巴细胞培养①室温下将冰冻的上述T—淋巴细胞培养液解冻；②抽取静脉血注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀，血与培养液的体积比为1∶8—12；③将上述容器置于37℃±0．5℃培养箱中，48—96小时后即完成细胞培养。
2．细胞分离按常规方法对上述常规方法培养的细胞进行细胞分离，或按下列方法对依上述T—淋巴细胞培养方法培养的T—淋巴细胞进行分离(1)吸入上述已培养好的4．5ml细胞液，在转速为2000转／分条件下离心5分钟；
(2)弃上清，然后加入低渗液5ml充分混匀，再加固定液0．5ml混匀，在转速为2000转／分条件下离心5分钟；(3)弃上清，加固定液5ml混匀，在转速为2000转／分条件下离心5分钟；(4)弃上清，加固定液5ml混匀，在转速为2000转／分条件下离心5分钟；(5)弃上清，加固定液0．3ml，混匀备用。
上述低渗液为0．43％氯化钠溶液，固定液为甲醇与冰醋酸按体积比3∶1比例配制的混合溶液。
3．制片依常规制片方法或下列方法进行制片(1)将冷冻载玻片置于水平位；(2)吸取经分离的细胞悬液，在距玻片20cm高度处，向玻片滴加2—3滴；(3)细胞悬液快干时，将玻片快速过火2—3次，室温凉干。
经过上述的细胞培养、细胞分离和制片后，即可进行细胞的染色。
本发明的细胞染色方法及其步骤为(1)将上述染色液的A液和B液置于室温或37℃温箱中恒温备用；(2)将三用水箱预热至80—90℃后恒温；(3)将上述完成制片步骤的玻片放在水箱之铝板上；
(4)向玻片上有细胞悬液处，先后滴加A液和B液，两者的体积比为1—3∶1，混匀后将盖玻片盖上；(5)待颜色变为深金黄色后，将玻片取下；(6)用少量、慢速自来水冲净玻片，再用蒸馏水冲一遍，晾干，即完成染色。
本发明所有操作过程中，所使用的器皿及其它用具等全部需要消毒灭菌处理，而且所有操作均应符合无菌操作，消毒灭菌方法和无菌操作方法均属于本领域的公知技术。
本发明的细胞染色方法，具有使用方便、操作简单等优点。
下面结合实施例进一步说明本发明步骤一、取如下配比的染色液，染色液由A液和B液组成A液硝酸银(分析纯)50g，蒸馏水100ml；B液明胶2g，甲酸340微升，蒸馏水100ml。
步骤二、按如下方法进行T—淋巴细胞染色，其步骤为(1)将上述A液和B液置于室温或37℃温箱中恒温备用；(2)将三用水箱预热至85℃后恒温；(3)按上述方法进行T—淋巴细胞的培养、分离、制片；(4)将(3)步制得的玻片放在水箱之铝板上；(5)向玻片上先后滴加A液4滴、B液2滴，混匀后将盖玻片盖上；(6)待颜色变为深金黄色后，将玻片取下；(7)用少量、慢速自来水冲净玻片，再用蒸馏水冲一遍，晾干即完成染色。
权利要求
1．一种细胞染色方法，其特征在于其是通过如下步骤实现的(1)将染色液置于室温或37℃温箱中恒温备用；(2)将三用水箱预热至80—90℃后恒温；(3)将经过细胞培养、细胞分离、制片的玻片放在水箱之铝板上；(4)向玻片上滴加染色液，混匀后将盖玻片盖上；(5)待颜色变为深金黄色后，将玻片取下；(6)用少量、慢速自来水冲净玻片，再用蒸馏水冲一遍，晾干。
全文摘要
本发明涉及一种细胞的染色方法,其具有使用方便、操作简单等优点。
文档编号C12Q1/04GK1280193SQ0010966
公开日2001年1月17日 申请日期2000年6月21日 优先权日2000年6月21日
发明者张国庆 申请人:张国庆