膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸钾，混匀，加入合并后的浸 膏质量的1. 4倍的水，加入枸橼酸调节pH为4. 2,搅拌40分钟；过滤，将滤液体装入包装瓶 内；灭菌柜湿热120°C灭菌30分钟，即得。
[0026] 实施例7 乌鸡阿胶口服液的制备方法，包括如下步骤： (1) 按质量百分比称取：乌鸡粉15%，桂圆肉8%，枸杞子38. 5%，大枣38. 44% ;山梨酸钾 0. 01% ;甜菊糖甙0. 05% ; (2) 按质量比为1 :15的比例，将所述乌鸡粉加体积浓度为30%的乙醇水溶液，浸渍提 取36小时，过滤，收集滤液，静置60小时，上清液回收乙醇并浓缩至在60°C时相对密度为 〇. 95的浸膏； (3) 将枸杞子和大麥，加入8质量倍的水煎煮20分钟，过滤，收集滤液，煎煮2次，合并 滤液并浓缩至在60°C时相对密度为I. 05的浸膏； (4)将所述阿胶，加入10倍质量倍的水煎煮烊化，收集滤液； (5 )将步骤（2 )至（4 )获得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸钾，混匀，加入合并后的 浸膏质量的1. 5倍的水，加入枸橼酸调节pH为4. 0,搅拌30分钟；将滤液体装入包装瓶内； 灭菌柜湿热l〇〇°C灭菌60分钟，即得。
[0027] 各实施例制备的产品检测方法： 【检查】pH值应为4. 0-5.0 相对密度应为〇. 98-1. 10 【含量测定】精密量取本品40ml，照氮测定法（中国药典2010年版一部附录IXL第一法）测定，即得。
[0028] 本品每Iml含氮（N)量不得少于0. 6mg。
[0029] 本发明乌鸡阿胶口服液的功效试验， 本动物实验采用实施例1-7制备的的乌鸡阿胶口服液。
[0030] 1材料和方法 I. 1样品受试物：乌鸡阿胶口服液，人拟用剂量为每日20. 0ml/60kg。Bw，所用样品为4 倍浓缩液，棕色液体。
[0031] 1. 2试验动物18-22g雌性SPF级昆明种小鼠160只，合格证号：SCXK(军） 2009-003 0000105 1. 3试验动物饲养环境：SPF级实验动物室。
[0032] 1. 4剂量选择：本实验设计了低、中、高三各剂量组，分别为0. 417ml/kg.Bw、0. 833 ml/kg.Bw、l. 667ml/kg.Bw，即相当于人拟用剂量的5倍、10倍、20倍。低、中、高剂量组分 别取本样品受试物4倍浓缩液4. 17ml、8. 33ml和16. 67ml，均价蒸馏水至200ml，充分混匀， 按0. 2ml/10g.bw灌胃，对照组给予等量的蒸馏水，每日一次，连续30天，末次给受试物后24 小时测定各项指标。将试验动物分为四个大组，每组40只，然后每组40只动物又分为4各 小组，分别对照和低、中、高三各剂量组，每组10只，其中一组进行HG50测试、抗体生成细胞 检测、迟发型变态反应(足趾增厚法）；2组进行小鼠淋巴腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、 脏/体比值测定；3组进行碳廓清试验；4组进行小鼠淋巴转化试验、NK细胞活性测定试验。
[0033] 1. 5试验方法 1. 5. 1脏器/体重比值测定：给受试物30天后，称取脾脏、胸腺，计算脏/体比。
[0034] 1. 5. 2迟发型变态反应(足跖增厚法）：给受试物30天，第25天腹腔注射2%SRBC， 免疫4天后，测量左后足跖部厚度，同时在测量部位注射20%SRBC20ul，24小时后再次测量 I. 5. 3conA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验（MTT法）：给受试物30天，无菌取脾，制成单 细胞悬液，，HANK'S液洗3遍，调整细胞浓度为3*108个/ml。将细胞悬液分两孔加入24孔 培养板中，每孔Iml，一孔加75ulC〇nA液（lOOug/ml)，另一孔为对照，置5%C02,，37°C孵箱 中培养72小时。培养结束前4小时，每孔吸取上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的 RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml) 50ul/孔，继续培养4小时，培养结束后，每孔加 入Iml酸性异丙醇，吹打均匀，使紫色结晶完全溶解，以570nm波长测定光密度值。
[0035] L5. 4半数溶血值（HG50)的测定：给受试物30天，于第25天腹腔注射2%SRBC， 免疫5天后，收集血清，试管内加入300倍稀释的血清lml、10%SRBCO. 5ml、补体lml，37°C 水浴20分钟，冰浴终止反应，离心，取上清lml，加都氏试剂3ml，10分钟后540nm比色。
[0036] 1. 5. 5抗体生成细胞检测：给受试物30天，于第25天腹腔注射2%SRBC，免疫5天 后，脱臼处死，取脾，制成细胞悬液，200目筛网过滤，用hanks液洗3次，每次lOOOr/min离 心lOmin，将细胞悬浮于5目录RPMI1640培养液中，并调整细胞浓度为5*106个/ml。将表 层培养基加热溶解，15°C水浴保温，与等量2倍浓度hanks液混合，分装小试管，每管0. 5ml， 加入50ull0%SRBC，20ul皮细胞悬液混匀，倒片，二氧化碳培养箱中培养1小时，加入SA缓 冲液稀释的补体（1:10)，继续培养1小时，计数溶血空斑处。
[0037] 1. 5. 6小鼠碳廓清试验：给受试物30天后，尾静脉注射3. 5倍稀释的印度墨汁(每 IOg体重0.lml)，分别于第2、10分钟内眦取血20ul，加入到2.98ml0. 1%碳酸钠溶液中， 600nm比色。另取肝、脾称重，计算吞噬指数。
[0038] 1. 5. 7小鼠腹腔巨噬鸡红细胞实验(半内体法）给受试物30天后，每鼠腹腔注射 20%鸡红细胞悬液lml，间隔30min，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开 腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板Imin吸出腹腔洗液lml，平均分滴于2片载 玻片上，放入垫有纱布的搪瓷盘内，于37°C孵箱温育30min，孵毕，生理盐水漂洗，晾干，以 1:1丙酮甲醇溶液固定，4%Giemsa染色lOmin，计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数及被吞噬的 巨噬细胞数 1. 5. 8NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶测定法):实验前24h将YAC-I细胞(祀细胞）进行 传代培养，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4*105个/ml。无菌取脾，制成单细胞 悬液，hanks液洗3遍，调整细胞浓度为4*107个/ml，去靶细胞和效应细胞各IOOul(效靶 比50:1 )，加入U型96孔培养板，靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各IOOul，靶细胞最 大释放孔加靶细胞和1%NP40各lOOul，均设3个复孔，于37°C、5%C02培养箱中培养4h，每 孔吸取上清液IOOul置瓶底96孔培养板中，同时加入LDH基液IOOul，反应3min，每孔加入 lmol/1的HCL30ul，在酶标仪492nm测定光密度值。
[0039] 1. 6结果统计：用SPSSlI. 5FORWindow进行统计检验。 2结果 2. 1本样品受试物浓缩液对小鼠体重的影响 表1受试物对免疫1组小鼠体重的影响（g，均值土标准差）
【主权项】
1. 乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是包括如下步骤： 按质量百分比称取：乌鸡粉5%?25%，阿胶5%?15%，枸杞子20%?50%，大枣20%? 50% ;山梨酸钾0· 01%?0· 1% ;甜菊糖甙0· 01%?0· 1% ; 按质量比为1 :5?15的比例，将所述乌鸡粉加体积浓度为30%?70%的乙醇水溶液， 浸渍提取12?36小时，过滤，收集滤液，提取1?3次，合并滤液，静置30?60小时，上清 液回收乙醇并浓缩至在60°C时相对密度为0. 95?0. 99的浸膏； 将所述枸杞子和大枣，加入3?8质量倍的水煎煮20?60分钟，过滤，收集滤液，煎煮 1?3次，合并滤液并浓缩至在60°C时相对密度为1. 00?1. 10的浸膏； 将所述阿胶，加入5?10质量倍的水煎煮烊化，收集滤液； 将步骤（2)至（4)获得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸钾，混匀，加入合并后的浸 膏质量的I. 〇?1. 5倍的水，加入枸橼酸调节pH为4. 0?5. 0,搅拌20?40分钟；过滤， 将滤液体装入包装瓶内；灭菌柜湿热100?120°C灭菌30?60分钟，得到一种乌鸡阿胶口 服液。
2. 根据权利要求1所述的乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是所述步骤（1)为：按质 量百分比称取：乌鸡粉10%?20%，阿胶5%?10%，枸杞子30%?40%，大枣30%?40% ;山梨 酸钾0· 05%?0· 1% ;甜菊糖甙0· 03%?0· 07%。
3. 根据权利要求1所述的乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是所述步骤（2)为：按质 量比为1 :8?11的比例，将所述乌鸡粉加体积浓度为40%?55%的乙醇水溶液，浸渍提取 18?28小时，过滤，收集滤液，提取1?3次，合并滤液，静置40?50小时，上清液回收乙 醇并浓缩至在60°C时相对密度为0. 95?0. 99的浸膏。
4. 根据权利要求3所述的乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是所述步骤（2)为：按 质量比为1 :9?10的比例，将所述乌鸡粉加体积浓度为40%?50%的乙醇水溶液，浸渍提 取24小时，过滤，收集滤液，提取2次，合并滤液，静置45?48小时，上清液回收乙醇并浓 缩至在60°C时相对密度为0. 97?0. 98的浸膏。
5. 根据权利要求1所述的乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是所述步骤（3)为：将所 述枸杞子和大枣，加入6质量倍的水煎煮40分钟，过滤，收集滤液，煎煮2次，合并滤液并浓 缩至在60°C时相对密度为1. 05的浸膏。
6. 根据权利要求1所述的乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是所述步骤（5)为：将 步骤（2)至（4)获得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸钾，混匀，加入合并后的浸膏质量 的1. 3倍的水，加入枸橼酸调节pH为4. 3?4. 7,搅拌30分钟；过滤，将滤液体装入包装瓶 内；灭菌柜湿热IKTC灭菌30分钟，即得。
7. 根据权利要求1?6之一所述的乌鸡阿胶口服液的制备方法，其特征是所述乌鸡粉 的质量标准为：水分：小于等于8. 0%，挥发性碱性物质：消耗0. 005mol/L的硫酸滴定液不 得超过20. Oml ;含氮量：大于等于6. 0%。
8. 权利要求1?7之一的方法制备的乌鸡阿胶口服液。
【专利摘要】本发明涉及一种乌鸡阿胶口服液及其制备方法，方法的步骤如下：1、将乌鸡粉加入质量比为1:5-15，乙醇含量为30%--70%的乙醇水溶液，浸渍提取12-36小时，过滤，浸渍提取1-3次，合并滤液，静置30～60小时，上清液回收乙醇并浓缩至在60℃时相对密度为0.95～0.99的浸膏；2、将枸杞子和大枣，加入3～8质量倍的水煎煮20～60分钟，过滤，收集滤液，煎煮1～3次，合并滤液并浓缩至在60℃时相对密度为1.00～1.10的浸膏；3、将阿胶，加入5～10质量倍的水煎煮烊化，收集滤液，4、将步骤1至3获得的浸膏合并，加入甜菊糖甙和山梨酸钾，混匀，加入合并后的浸膏质量的1.0～1.5倍的水，加入枸橼酸调节pH为4.0～5.0，搅拌20～40分钟；过滤，将滤液体装入包装瓶内；100～120℃灭菌30～60分钟，得到一种乌鸡阿胶口服液。
【IPC分类】A23L1-29, A61P7-06, A61P1-16, A61K35-36, A61K35-57, A61K36-815, A61P37-04
【公开号】CN104585752
【申请号】CN201410847979
【发明人】杨桂芝
【申请人】天津凯镛药业有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月31日