)为潍坊盛泰药业有限公司副产品。
[0028] (4)种子液的制备：将鼠李糖乳杆菌接种于装有种子培养基的摇瓶中，37°C生长 18-20小时至对数生长期，接种备用。
[0029] 2、具体步骤
[0030] (1)往黄芪粉中添加玉米浆配制100g发酵培养基，将发酵培养基放入塑封袋中， 置于紫外灯下30分钟消毒备用。
[0031] (2)将鼠李糖乳杆菌种子液接入到发酵培养基中，再加入适量无菌水使发酵体系 含水量为30 %，混合均匀。
[0032] (3)用真空包装机对塑封袋抽真空塑封，37°C恒温培养，间隔一定时间翻滚塑封 袋，使黄芪充分发酵。
[0033] ⑷测定发酵产物中粗蛋白质、黄芪多糖和黄芪甲苷含量。
[0034] 3、发酵条件优化
[0035] 采用单因素试验和正交试验相结合的实验设计方法，以粗蛋白质、黄芪多糖及黄 芪甲苷含量为检测指标，对影响发酵的因素接种量、玉米浆添加量和发酵时间进行优化。其 中单因子试验中接种量设计的水平为1%、2%、3%、4%、5% (体积质量比，mL/g);玉米浆 添加量的水平为发酵培养基总质量的5%、10%、15%、20%、25%;发酵时间设计的水平为4 天、5天、6天、7天、8天。正交实验设计为三因素三水平的实验设计，每组试验均设置3个 重复。
[0036] 4、检测方法
[0037] (1)粗蛋白质的测定方法：参考食品安全国家标准（GB 5009. 5-2010)食品中蛋白 质的测定，凯氏定氮法。
[0038] (2)黄芪多糖的测定方法：蒽酮硫酸比色法。样品制备：称取IOg发酵产物，加入 4倍95%乙醇4°C静置过夜，4000rpm离心10分钟，回收乙醇，沉淀用蒸馏水稀释，作为供试 品。
[0039] (3)黄芪甲苷的测定方法：高效液相色谱法。样品制备：取发酵产物10g，60°C水浴 蒸干，放入索氏提取器中，加甲醇40mL，冷浸过夜。再加甲醇适量，80°C水浴加热回流4h，提 取液浓缩至干。残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL， 合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40mL，弃去氨液，正丁醇层挥干后用甲醇定容 至5mL，供测试用。取黄芪甲苷配成0.5mg/mL浓度，为对照样品。色谱条件及系统适用性： 经预试，选择(^18色谱柱（15〇1111]1\4.61111]1，5以1]1)，流动相为乙腈：水=32:68等度洗脱，检测 波长为202nm，流速为0. 8mL/min，柱温30°C，进样量为10 μ L，采用外标法定量。
[0040] 5、结果
[0041] 在上述不同条件下所得发酵产物中粗蛋白质含量为356. 17-371. 25mg/g、黄芪多 糖含量为305. 38-324. 51mg/g、黄芪甲苷含量为0. 41-0. 46mg/g，与发酵前相比，粗蛋白质、 黄芪多糖和黄芪甲苷分别增加了 〇. 33-0. 39倍，4. 05-4. 37倍和2. 28-2. 68倍。
[0042] 根据上述结果也确定了鼠李糖乳杆菌发酵黄芪的最佳条件为：接种量为3%，玉 米浆添加量为15%，发酵时间为6天。在该条件下，发酵产物中粗蛋白质含量为368. 38mg/ g、黄芪多糖含量为312. 32mg/g、黄芪甲苷含量为0. 42mg/g，与发酵前相比，分别增加了 0. 38倍、4. 17倍和2. 36倍，结果见表1。
[0043] 表1.发酵前和发酵后样品中粗蛋白、黄芪多糖和黄芪甲苷的含量
[0044]
【主权项】
1. 一种以玉米浆为基质利用鼠李糖乳杆菌发酵黄芪的方法，其特征在于包括如下步 骤： (1) 往黄芪粉中添加液体玉米浆配制发酵培养基并进行灭菌； (2) 将鼠李糖乳杆菌种子液接入到发酵培养基中，再加入适量无菌水使发酵体系含水 量为30-40%，混合均匀，厌氧条件下进行发酵。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中所述的玉米浆的添加量为发酵 培养基质量的10-20%。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1)中所述的灭菌的方法为紫外线灭 菌。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中所述的鼠李糖乳杆菌种子液通 过包含如下步骤的方法制备得到：将鼠李糖乳杆菌接种于装有种子培养基的摇瓶中，37°C 生长18-20小时至对数生长期；所述的种子培养基的配制为：取蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵 母膏 5g、葡萄糖 20g、吐温-20 80mL、K2HPO4 2g、乙酸钠 5g、MgSO4 ? 7H20 0? 2g、MnSO4 ? 4H20 〇.〇5g，蒸馈水定容至1000mL，调pH为6. 2-6. 4,在121°C高压灭菌15min。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中所述的鼠李糖乳杆菌种子液的 接种量为1-5%。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中所述的发酵的条件为37°C发 酵5-7天。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 往黄芪粉中添加液体玉米浆配制发酵培养基，将其置于紫外灯下灭菌；其中，玉米 衆的添加量为发酵培养基质量的15% ; (2) 将鼠李糖乳杆菌种子液按3%的接种量接入到发酵培养基中，再加入适量无菌水使 发酵体系含水量为30%，混合均匀，厌氧条件下37°C发酵6天。
8. 权利要求1-7任一项所述的方法在制备饲料原料中的应用。
9. 一种饲料原料，其特征在于：将通过权利要求1-7任一项所述的方法得到的发酵产 物干燥得到。
【专利摘要】本发明公开了一种以玉米浆为基质利用鼠李糖乳杆菌发酵黄芪制备饲料原料的方法。本发明方法包括如下步骤：（1）往黄芪粉中添加液体玉米浆配制发酵培养基并进行灭菌；（2）将鼠李糖乳杆菌种子液接入到发酵培养基中，再加入无菌水使发酵体系含水量为30-40%，混合均匀，厌氧条件下进行发酵；（3）发酵产物干燥后即得饲料原料。本发明一方面利用了工业副产物玉米浆为鼠李糖乳杆菌提供氮源和碳源，提高了发酵产物中的粗蛋白质含量，降低了生产成本；另外一方面利用鼠李糖乳杆菌发酵黄芪替代了传统的物理化学方法提取黄芪多糖和黄芪甲苷，提高了发酵产物中的黄芪多糖和黄芪甲苷的含量，避免了物理化学方法提取带来的环境污染问题。
【IPC分类】A23K1-14, A23K1-00
【公开号】CN104872396
【申请号】CN201510341361
【发明人】林建国, 王常高, 杜馨, 蔡俊
【申请人】湖北工业大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月18日