乳杆菌属菌的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及乳杆菌属菌。更详细而言，涉及一种新型戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus)〇
【背景技术】
[0002] 乳酸菌和双歧杆菌中存在具有调整肠胃效果及免疫赋活效果等优异生理活性的 物质，根据菌种的特性被用于各种用途。其中，近年来关于通过将这些菌种摄入体内来发挥 其减肥效果的研究日益进步，可列举诸多报告。
[0003] 例如，专利文献1报道如下：鼠李糖乳杆菌ATCC53103株分解成为肥胖原因的脂 质（三酰基甘油），进而抑制其在体内的吸收。并且，作为植物性乳酸菌之一的L.brevis KB290活菌到达肠道内后，肠内存活率及肠管到达性优异（但排泄菌数比摄取菌数少）已为 人所知（参照非专利文献1)。另外，非专利文献2关于LactobacillusacidophilusL-92 报道如下：根据摄取菌数的93%从粪便回收，可得出该菌株的肠管到达性优异；非专利文 献3研究了L.gasseriSBT2055的肠管存活性，并报道当给药100g含1X106~5X10 6cfu/ g的发酵乳时，最多可从奠便中检测出lX105cfu/g左右的L.gasseriSBT2055。
[0004] 另一方面，关于双歧杆菌报道如下：动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalissubsp.lactis)GCL2505株，具备经口摄取后活菌到达肠道的肠管到达性，同 时显示显著的肠管内增殖性（参照专利文献2)。非专利文献4报道如下：针对成人进 行B.animalisssp.lactisDN-173010给药时，从奠便中检测出与摄取菌数20%左右的 DN-173010。
[0005] 现有技术文献
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献1日本国特开2011-206057号公报
[0008] 专利文献2日本国特开2011-172506号公报
[0009] 非专利文献
[0010] 非专利文献1《乳酸菌的保健功能与应用》（日文原名《乳酸菌①保健機能t応 用》）2007年8月31日CMC出版160-162页
[0011] 非专利文献2日本乳酸菌学会杂志（日文原名：日本乳酸菌学会誌）2001年12 号"在人肠管内持留性优异的LactobacillusacidophilusL-92株的分离及其性质"（日 文原名：匕卜腸管内"?、生残性?良〇Lactobacillusacidophilus1^_92株?単離<!；子?性 質）28-35页
[0012] 非专利文献 3Microbiol.Immunol. 2006 年 50 号"Monitoringandsurvivalof LactobacillusgasseriSBT2055inthehumanintestinaltract. '，867-870 页
[0013] 非专利文献 4J.Mol.Microbiol.Biotechnol. 2008 年 14 号"Survivalof BifidobacteriumanimalisDN-173010inthefaecalmicrobiotaafteradministration inlyophilizedformorinfermentedproduct-arandomizedstudyinhealthy adults. '，128-136 页
【发明内容】
[0014] 以往，像这样在各种益生菌中研究了其肠管到达性，但关于乳酸菌，或者都停留在 报道为与摄取的菌数相等或在其以下的菌数到达了肠管，或者未测定到达肠管的菌数。
[0015] 另外，由于脂肪的吸收主要是在小肠内进行，所以通常在大肠内增殖的双歧杆菌 即使显示了肠管内增殖性，其对脂肪吸收的抑制也不充分。并且，虽然已知乳酸菌在大肠的 更上端发挥作用，但在肠管内显示增殖性的菌种尚未见报道。
[0016] 本发明的课题在于提供一种显示肠管内增殖性的乳酸菌。
[0017] 本发明涉及保藏号为NITEBP-1479的戊糖乳杆菌TUA4337L株，其特征在于，具有 在肠管内的增殖能力。
[0018] 本发明的乳酸菌取得了在肠管内增殖这样的优异效果。此外，当摄取本发明的乳 酸菌时，该乳酸菌通过到达肠管内并增殖，来持续脂肪吸收抑制效果等，菌体的生理活性得 到增强，进而，取得了可获得高减肥效果这样的优异效果。
【附图说明】
[0019] 图1是表示人工肠液中的筛选结果的图。
[0020] 图2是表示体重增加进程的图。图中的标记表示相对于高脂肪食物组具有显 著性差异（P〈〇. 05)。
[0021] 图3是表示血清中的甘油三酯量的图。图中的标记表示相对于高脂肪食物组 具有显著性差异（P〈〇. 05)。
【具体实施方式】
[0022] 本发明的乳酸菌为戊糖乳杆菌TUA4337L株，其特征在于，具有在肠管内的增殖能 力。此外，在本说明书中"具有在肠管内的增殖能力"或"在肠管内增殖"，是指到达肠管内 后，在小肠和/或大肠内、优选在小肠内进行增殖，增殖能力的程度在如下情况下可评价为 "有增殖能力":即在人工肠液中于37°C下培养6hr时，相对于接种时的0D66。显示10倍以上 的数值。
[0023] 本发明者针对本发明者所保有的约480种乳酸菌，进行了在人工肠液中的增殖 能力研究，将从中选择的属于戊糖乳杆菌的菌悬液针对动物进行给药时，发现戊糖乳杆菌 TUA4337L株的排出菌数与给药菌数相比显著增多，至此完成了本发明。
[0024] 戊糖乳杆菌TUA4337L株，以识别表示NRIC0883、保藏号NITEBP-1479,于国际保 藏日2012年12月10日保藏于独立行政法人制品评价技术基盘机构（NITE)专利微生物保 藏中心（日本国千叶县木更津市Kazusa镰足2-5-8)。以下将戊糖乳杆菌TUA4337L株简记 为TUA4337L株。
[0025] TUA4337L株的菌学性质示于表1及表2。表2的糖的可同化性是用细菌鉴定试剂 盒API50CH(BI0METRIEUX)进行测定的结果。此外，表2中的" + "是指可同化的糖，是 指不可同化的糖。
[0026] [表 1]
[0027]
[0028] [表 2]
[0029]
[0030] TUA4337L株将在后述实施例中进行详述，其具有排出菌数相对于摄取菌数增多的 特征，即具有肠管内增殖性。另外，作为肠管内增殖性，例如在人工肠液中于37°C下培养6 小时后，以培养开始时的菌数为基准时，显示优选10倍以上、更优选15倍以上、进一步优选 20倍以上、更进一步优选25倍以上的菌数。
[0031] 另外，由提取自TUA4337L株的DNA编码的recA基因序列（序列号1)与 LactobacilluspentosusIG1株的recA基因序列有99 %的同一性。此外，在本说明书 中，同一性例如通过使用检索程序BLAST，以得分表示相似度，检索程序BLAST使用的是 Altschul等（TheJournalofMolecularBiology，215,403-410 (1990))开发的算法。
[0032] 作为用于培养TUA4337L株的培养基，没有特别限制，可列举通常的含有碳源、氮 源、无机盐类、有机营养素等的培养基。另外，也可用琼脂培养基、液体培养基培养。培养温 度优选为10~45°C、更优选为15~42°C、进一步优选为28~38°C、进一步优选为35~ 37°C，可增殖的pH优选为pH3. 0~12. 5、更优选为pH3. 5~12. 0。
[0033] 作为本发明的菌株，可列举乳酸菌（活菌及死菌）本身、乳酸菌含有物、乳酸菌处 理物等各种形式。活菌可从该乳酸菌培养液等的乳酸菌含有物中获得。死菌例如可通过对 活菌进行加热、紫外线照射、福尔马林处理、酸处理等获得。得到的活菌、死菌可通过进一步 磨碎、破碎而成为处理物。另外，从充分发挥在肠管内的增殖效果的观点出发，虽然上述各 形式中的乳酸菌优选活菌，但也可混合有死菌。
[0034] 作为前述乳酸菌，例如，可列举活菌体、湿菌、干菌等。作为前述乳酸菌含有物，例 如，可列举乳酸菌悬浮液、乳酸菌培养物（包括菌体、培养上清、培养基成分）、乳酸菌培养 液（从菌体培养物中除去固体成分的物质）。另外，作为前述乳酸菌处理物，例如，可列举磨 碎物、破碎物、液状物（提取液等）、浓缩物、浆化物、干燥物（喷雾干燥物、冷冻干燥物、真空 干燥物、离心干燥物等）、稀释物等。
[0035] 实施例
[0036] 以下示出实施例具体说明本发明，但本发明并不受下述实施例的限制。
[0037] 实施例1〈将人工肠液中的增殖能力作为指标的筛选〉
[0038] 本发明者针对保有的乳酸菌中主要为植物性乳酸菌的约480株（包括JCM株），进 行在人工肠液中的增殖能力评价。
[0039] 具体而言，首先，将各乳酸菌的甘油保存菌分别以lv/v%接种于MRS培养 基（DifcoLaboratories)(10mL)中，在35°C下培养16~17hr。接着，用分光光度计 UV-1600 (岛津制作所）测定各培养液的0D_ (660nm处的吸光度），将100yL用MRS培养 基以各培养液的〇D66。为10制备的培养液接种于下述所示组成的人工肠液（10mL)中。其 后，在37°C下缓慢震荡培养6hr，然后测定0D66。，并求出增殖倍率（6hr后的0D66。/接种时的 0D66。）。代表性的筛选结果不于表3及图1。
[0040] 〈人工肠液（pH6. 45) >
[0041] MRS培养基 9mL
[0042] 10w/v%胆汁（和光纯药工业株式会社）溶液lmL
[0043] lw/v%膜酶（from